HIV病毒抗体/抗原诊断试剂盒及其制备方法、检测方法

1. 一种人类免疫缺陷病毒1+2型抗体/P24抗原诊断试剂盒，其特征在于试剂盒的组分包 括：
(1)、用HIV抗原和P24单克隆抗体包被的预包被酶联板；
(2)、用生物素标记的兔抗P24多克隆抗体；
(3)、用辣根过氧化物酶标记的亲和素和HIV抗原结合物；
(4)、含有吐温的磷酸盐缓冲液的洗涤液；
(5)、含有过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液的显色液A；
(6)、含有四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲液显色液B；
(7)、含有硫酸溶液的终止液；
(8)、含有磷酸盐缓冲液的样品稀释液；
(9)、阴性对照正常人血清；
(10)、HIV抗体阳性对照血清；
(11)、P24抗原阳性对照血清。
2.一种人类免疫缺陷病毒1+2型抗体/P24抗原诊断试剂盒的制备方法，其特征在于有以下 方法：
I、将包被用HIV抗原和鼠抗P24单克隆抗体加至碳酸盐缓冲液中混匀，加至酶联板 内，每孔100微升，孵育过夜，用含有吐温的磷酸盐缓冲液洗涤酶联板后，再加入含有酪蛋 白的Tris缓冲液，37℃孵育2小时后，弃去孔内液体，干燥酶联板，即完成用HIV抗原和P24 单克隆抗体包被的预包被酶联板的制作；
II、将兔抗P24多克隆抗体和生物素进行标记，即为生物素标记的兔抗P24多克隆抗 体；
III、将辣根过氧化物酶与亲和素进行标记，即为辣根过氧化物酶标记的亲和素结合 物；
IV、将标记用HIV重组抗原和辣根过氧化物酶用改良过碘酸钠法结合在一起，即制成用 辣根过氧化物酶标记的HIV抗原结合物；
V、试剂盒其它组分包括：洗涤液为含有吐温的磷酸盐缓冲液，显色液A为含有过氧化 氢的柠檬酸盐缓冲液，显色液B为含有四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲液，终止液为2M硫酸， 样品稀释液为含有酪蛋白的磷酸盐缓冲液，阴性对照血清为正常人血清，HIV抗体阳性对照 血清为含有HIV抗体的人血清，P24抗原阳性对照血清为含P24蛋白的人血清。
3.一种人类免疫缺陷病毒1+2型抗体/P24抗原诊断试剂盒的检测方法，其特征在于有以下 步骤：
a、加样：取用HIV抗原和P24单克隆抗体包被的预包被酶联板，每次实验设空白对照孔 1孔，阴性对照孔、阳性对照孔及P24抗原对照孔各2孔和样品孔。依次加入阴性对照血清、 阳性对照血清及P24抗原对照血清及待检样品各75μl，同时在各孔内加用生物素标记的兔抗 P24多克隆抗体25μl，混匀，贴上不干胶条，置37℃温育60分钟；
b、洗板：弃去各孔内液体，将洗涤液用蒸馏水稀释20倍后注满各孔，静置10-20秒， 甩掉洗涤液；重复洗板，最后拍干；
c、加酶：每孔加用辣根过氧化物标记的亲和素和HIV抗原结合物100μl，空白对照孔 不加，贴上不干胶条，置37℃温育30分钟；
d、洗板：方法同步骤b；
e、显色：依次在每孔加显色剂A液、显色剂B液各50μl，混匀，置37℃避光温育10分 钟：
f、终止：依次在每孔加终止液50μl，混匀；
g、测定：用酶标仪对空白孔调零，测定各孔的光吸收度值(OD值)；
h、结果判定：根据样品的测定OD值与临界值的比值。若比值大于1，则为阳性反应， 说明样品中含有HIV抗体或P24抗原；若比值小于1，则为阴性反应，说明样品中不含有HIV抗 体或P24抗原。

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