抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条

1.抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其特征在于：其包括底板，所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区，所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上，所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的鼠抗人IgG多克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定有识别抗52-kD Ro/SSA抗体的第一检测线、识别抗rRNP抗体的第二检测线、识别抗Jo-1抗体的第三检测线、识别抗SmD1抗体的第四检测线、识别抗Scl-70抗体的第五检测线、识别抗SSB-La抗体的第六检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。
2.根据权利要求1所述的抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其特征在于：
所述荧光标记物结合垫包括层叠的第一荧光标记物结合垫和第二荧光标记物结合垫，所述第一荧光标记物结合垫的一端垫在样品垫的下方，所述第二荧光标记物结合垫交叠压在硝酸纤维素膜的一端。
3.根据权利要求2所述的抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其特征在于：
所述第一荧光标记物结合垫中插入样品垫下方的一端设有定位条，所述样品垫的下端面设有能容纳定位条的定位槽。
4.根据权利要求1至3任一项所述的抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其特征在于：还包括卡壳，所述底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫均置于卡壳内，所述卡壳壳面上对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗，卡壳壳面上对应于样品垫的位置设有加样孔。
5.根据权利要求4所述的抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其特征在于：
所述观察窗为长方形孔。
6.根据权利要求4所述的抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其特征在于：
所述荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白中的一种。
7.根据权利要求4所述的抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其特征在于：
所述样品垫为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。
8.根据权利要求4所述的抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其特征在于：
所述底板为聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。
9.根据权利要求4所述的抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其特征在于：
所述卡壳包括塑料上壳和塑料下壳，所述塑料上壳扣合塑料下壳上后形成卡壳。

抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条\n技术领域\n[0001] 本实用新型属于免疫检测领域，具体涉及一种高灵敏度抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条。\n背景技术\n[0002] 自身免疫性疾病(Autoimmune Diseases，AID)是泛指机体免疫效应细胞或免疫效应分子，针对自身组织或细胞出现异常免疫应答反应，导致组织损坏或功能障碍的疾病，是一类发病率高，可侵袭全身系统，严重危害人类健康的、致残率、致死率高的疾病。该类疾病特点为血液中存在自身抗体和(或)致敏的淋巴细胞；组织器官损伤和功能障碍范围取决于自身抗原分布；患者以女性较多见，发病率随年龄的增长而增高；多数原发病病因不清，常呈现遗传倾向性；病程慢性迁延和反复发作，甚至成为终身痼疾；免疫抑制药物治疗有一定疗效。\n[0003] 在AID疾病的各种检测项目中，由于抗核抗体(ANA)与AID密切相关，是自身免疫反应的重要靶位，因此抗核抗体检测在AID疾病中一直处于重要位置，是临床上一项极其重要的筛选试验。随着人们认识的不断加深，抗核抗体(Antinuclear antibody，ANA)的定义已由原来传统的针对细胞核扩展到现在的整个细胞，指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。目前已发现了具有不同临床意义的三十多种ANA，常见的如抗dsDNA抗体和抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的标志性抗体，而抗SS-A(Ro)抗体和抗SS-B(La)抗体则多出现于干燥综合症患者等。临床上ANA的检测，实际是指总抗核抗体检测。ANA阳性的疾病很多，常见的AID疾病中，系统性红斑狼疮患者的ANA的阳性率约为90-100％，干燥综合症患者阳性率约60-80％，类风湿性关节炎患者的ANA阳性率为30-50％。由于ANA在AID疾病出现明显临床症状之前就可存在，且病情稳定后其滴度逐渐下降，因此ANA的检测对于AID疾病的早期筛查、诊断和鉴别诊断、疾病活动度的判断及治疗效果的观察和指导临床用药等方面具有重要的意义。\n[0004] 目前常用的检测方法主要有两种，即是作为检测“金标准”的首选方法-间接免疫荧光法(IIF)和ELISA法。IIF法一直是临床常规的筛选试验，尽管该方法检测灵敏度高，但是需要手工操作和显微镜观察，影响因素较多，尤其是经验不丰富者容易判断错误，而且因为操作时间长，临床上常采用批量检测，因而也常出现一周或二周才出一次报告的情况，不利于疾病的早期诊断。EILSA法，因可进行半定量检测，临床经常根据其浓度的变化判定病人的好转与否，从而制定下一步的治疗方案，因此在临床也得到了广泛的使用。由于ELISA方法也是批量检测，因此也存在标本量少时不能极时出结果，开包装的试剂盒放置时间长易影响检测结果从而影响临床诊治的缺点。AID疾病的临床诊断路径，通常是先进行ANA筛查，如果阴性且无明显临床症状基本可排除AID，反之，ANA阳性的患者则需要进一步进行靶抗体的确认实验，从而进一步的确定疾病的种类。但IIF法和EILSA法，均存在出报告时间长，导致病人等待结果时间长，耽误病人的即时就医，从而影响疾病诊治情况。\n[0005] 针对上述临床存在之问题，在当今检验医学发展提出的POCT(Point Of Care Testing)，即即时检验新领域背景下，致力于开发一种新的检测试剂即荧光免疫层析快速检测试剂盒，使用小型荧光免疫分析仪进行检测，花费时间在15分钟左右，因此简单、便捷，标本即到即检，既能解决病人等待时间长之问题，又能解决临床医生执行自身免疫性疾病临床诊断的路径问题，可以在临床推广使用，以提高自身免疫疾病的诊治水平。\n[0006] 抗52-kD Ro/SSA抗体，抗rRNP抗体，抗Jo-1抗体，抗SmD1抗体，抗Scl-70抗体，抗SSB-La抗体是临床常见的几种自身免疫性疾病的标志性抗体，六项联合检测可以用于自身免疫性疾病的铺助诊断。\n实用新型内容\n[0007] 本实用新型的目的，在于提供一种抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其基于间接法、荧光免疫侧向层析和生物素-链霉亲和素放大系统，提供高灵敏度抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条。使用本实用新型时，提高了检测灵敏度和检测稳定性，降低了非特异性结合，联合检测大幅度提高检测的准确性和便利性，检测时间在15分钟左右，大大提高了诊断效率。\n[0008] 本实用新型解决其技术问题的解决方案是：抗核抗体六项联合免疫层析定性检测试纸条，其包括底板，所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区，所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上，所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的鼠抗人IgG多克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定有识别抗52-kD Ro/SSA抗体的第一检测线、识别抗rRNP抗体的第二检测线、识别抗Jo-1抗体的第三检测线、识别抗SmD1抗体的第四检测线、识别抗Scl-70抗体的第五检测线、识别抗SSB-La抗体的第六检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。\n[0009] 作为上述技术方案的进一步改进，所述荧光标记物结合垫包括层叠的第一荧光标记物结合垫和第二荧光标记物结合垫，所述第一荧光标记物结合垫的一端垫在样品垫的下方，所述第二荧光标记物结合垫交叠压在硝酸纤维素膜的一端。\n[0010] 作为上述技术方案的进一步改进，所述第一荧光标记物结合垫中插入样品垫下方的一端设有定位条，所述样品垫的下端面设有能容纳定位条的定位槽。\n[0011] 作为上述技术方案的进一步改进，还包括卡壳，所述底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫均置于卡壳内，所述卡壳壳面上对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗，卡壳壳面上对应于样品垫的位置设有加样孔。\n[0012] 作为上述技术方案的进一步改进，所述观察窗为长方形孔。\n[0013] 作为上述技术方案的进一步改进，所述荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白中的一种。\n[0014] 作为上述技术方案的进一步改进，所述样品垫为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。\n[0015] 作为上述技术方案的进一步改进，所述底板为聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。\n[0016] 作为上述技术方案的进一步改进，所述卡壳包括塑料上壳和塑料下壳，所述塑料上壳扣合塑料下壳上后形成卡壳。\n[0017] 本实用新型与现有技术相比，具有如下优点：\n[0018] (1)本实用新型将荧光蛋白作为标记物，此标记物稳定性良好，有利于提高检测稳定性。\n[0019] (2)本实用新型通过利用“链霉亲和素-生物素放大系统”，提高检测灵敏度，降低非特异性结合，有利于提高试剂盒性能。\n[0020] (3)利用本实用新型进行样品的检测时间在15分钟左右，极大地提高了检测效率。\n[0021] (4)本实用新型可通过荧光免疫分析仪对结果进行判读，可实现自动化，减少主观因素的影响，提供便利、快速、可靠的诊断结果。\n[0022] (5)本实用新型卡壳设有样品进入的加样孔和供观测结果的观察窗，根据分析仪器判定结果，准确可靠。\n[0023] (6)本实用新型制作方便，体积小、便于携带。\n[0024] (7)本实用新型检测成本较低。\n[0025] (8)本实用新型可批量生产，适用于临床快速诊断和现场快速诊断；易于保存，有利于基层单位推广。\n[0026] (9)本实用新型采用联合检测，一条检测条同时检测六项，检测更加方便。\n附图说明\n[0027] 为了更清楚地说明本实用新型实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单说明。显然，所描述的附图只是本实用新型的一部分实施例，而不是全部实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他设计方案和附图。\n[0028] 图1是本实用新型实施例一的结构示意图；\n[0029] 图2是本实用新型实施例二的结构示意图；\n[0030] 图3是本实用新型实施例三的结构示意图；\n[0031] 图4是本实用新型实施例四的结构示意图。\n具体实施方式\n[0032] 以下将结合实施例和附图对本实用新型的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本实用新型的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本实用新型的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本实用新型的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本实用新型保护的范围。另外，文中所提到的所有联接/连接关系，并非单指构件直接相接，而是指可根据具体实施情况，通过添加或减少联接辅件，来组成更优的联接结构。\n[0033] 参照图1，抗SSB-La抗体免疫层析定量检测试纸条，其包括底板5，所述底板5上依次设有样品垫1、荧光标记物结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫4，所述吸水垫4和荧光标记物结合垫2分别交叠压在硝酸纤维素膜3的两端后在硝酸纤维素膜3的表面形成检测区，荧光标记物结合垫2为玻璃纤维膜，所述样品垫1交叠压在荧光标记物结合垫2上，所述荧光标记物结合垫2上固定有生物素标记的鼠抗人IgG多克隆抗体(浓度0.3～1.5mg/mL)和链霉亲和素标记(或亲和素)的荧光蛋白(使用激发光波长530nm，发射光波长\n570nm，浓度0.1～2.0mg/mL)；所述检测区内的硝酸纤维素膜3上固定有识别抗52-kD Ro/SSA抗体的第一检测线T1(浓度0.5～3mg/mL)、识别抗rRNP抗体的第二检测线T2(浓度\n0.5～3mg/mL)、识别抗Jo-1抗体的第三检测线T3(浓度0.5～3mg/mL)、识别抗SmD1抗体的第四检测线T4(浓度0.5～3mg/mL)、识别抗Scl-70抗体的第五检测线T5(浓度0.5～\n3mg/mL)、识别抗SSB-La抗体的第六检测线T6(浓度0.5～3mg/mL)和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线C(浓度0.2～2.0mg/mL)，质控线C用于检测试纸条的有效性。\n[0034] 将生物素标记的鼠抗人IgG多克隆抗体和链霉亲和素(或亲和素)标记的荧光蛋白固定在荧光标记物结合垫2上，将识别抗52-kD Ro/SSA抗体的抗原、识别抗rRNP抗体的抗原、识别抗Jo-1抗体的抗原、识别抗SmD1抗体的抗原、识别抗Scl-70抗体的抗原、识别抗SSB-La抗体的抗原混合均匀固定于硝酸纤维素膜上作为检测线，将羊抗鼠IgG多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜上作为质控线C。当待测样品加到样品垫1上后，通过层析作用向前移动，样品中抗52-kD Ro/SSA抗体，抗rRNP抗体，抗Jo-1抗体，抗SmD1抗体，抗Scl-70抗体，抗SSB-La抗体与荧光标记物结合垫2上结合荧光标记物(荧光蛋白)的鼠抗人IgG多克隆抗体(Pab*Fluoro)反应形成复合 物 Mab-52-kDRo/SSA-Pab*Fluoro、Mab-rRNP-Pab*Fluoro、Mab-Jo-1-Pab*Fluoro、Mab-SmD1-Pab*Fluoro、Mab-Scl-70-Pab*Fluoro、Mab-SSB-La-Pab*Fluoro，在 层 析 作用下反应复合物继续向前移动经过硝酸纤维膜上包被的52-kD Ro/SSA抗原、rRNP抗原、Jo-1抗原、SmD1抗原、Scl-70抗原、SSB-La抗原(检测线)时，反应复合物分别对应被包被的52-kD Ro/SSA抗原、rRNP抗原、Jo-1抗原、SmD1抗原、Scl-70抗原、SSB-La抗 原 捕 获 形 成 复 合 物 (52-kDRo/SSA-Mab-52-kDRo/SSA-Pab*Fluoro、rRNP-Mab-rRNP-Pab*Fluoro、Jo-1-Mab-Jo-1-Pab*Fluoro、SmD1-Mab-SmD1-Pab*Fluoro、Scl-70-Mab-Scl-70-Pab*Fluoro、SSB-La-Mab-SSB-La-Pab*Fluoro)(检测线)，通过荧光免疫分析仪读取检测线的反应信号，在激发光源的作用下，荧光物质发射特定波长的荧光信号，荧光免疫分析仪俘获荧光信号，得到抗52-kD Ro/SSA抗体，抗rRNP抗体，抗Jo-1抗体，抗SmD1抗体，抗Scl-70抗体，抗SSB-La抗体的检测结果。\n[0035] 作为上述技术方案的进一步改进，参照图3，所述荧光标记物结合垫2包括层叠的第一荧光标记物结合垫20和第二荧光标记物结合垫21，所述第一荧光标记物结合垫20的一端垫在样品垫1的下方，所述第二荧光标记物结合垫21交叠压在硝酸纤维素膜3的一端。荧光标记物结合垫2的分层设置，便于将荧光标记物结合垫2安装在样品垫1和硝酸纤维素膜3之间。\n[0036] 作为上述技术方案的进一步改进，参照图3所述第一荧光标记物结合垫20中插入样品垫下方的一端设有定位条22，所述样品垫1的下端面设有能容纳定位条22的定位槽。\n通过定位条22便于荧光标记物结合垫2和样品垫1之间的安装固定。\n[0037] 作为上述技术方案的进一步改进，参照图2和图4，还包括卡壳，所述底板5、样品垫1、荧光标记物结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫4均置于卡壳6内，所述卡壳6壳面上对应于硝酸纤维膜3的位置设有观察窗8，卡壳6壳面上对应于样品垫1的位置设有加样孔\n7。\n[0038] 作为上述技术方案的进一步改进，所述观察窗8为长方形孔。\n[0039] 作为上述技术方案的进一步改进，所述荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白中的一种。\n[0040] 作为上述技术方案的进一步改进，所述样品垫1为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。样品垫由玻璃纤维构成，经表面活性剂缓冲液浸泡处理，干燥后使用。所述样品垫1的裁剪宽度为2.5～5.0mm。\n[0041] 作为上述技术方案的进一步改进，所述底板5为聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。\n[0042] 作为上述技术方案的进一步改进，所述卡壳6包括塑料上壳60和塑料下壳61，所述塑料上壳60扣合塑料下壳61上后形成卡壳6。\n[0043] 以上是对本实用新型的较佳实施方式进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本实用新型精神的前提下还可作出种种的等同变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。