精子的低温保存

1.一种提供精子的方法，该方法包括：
(a)以足以降低精子新陈代谢速率的低速度将含有精子的样品冷 却到第一个温度从而提供一种被冷却的精子样品，所述第一个温度足 以使得精子免受甘油的毒性作用；
(b)向被冷却的精子样品中加入一种含有甘油的溶液；和
(c)将所述被冷却的精子样品冷冻到第二个温度并维持足以使甘 油和精子达到平衡的一段时间从而提供一种被冷冻的精子样品，由此 对精子进行保存。
2.如权利要求1所述的方法，还包括：提供一种将要在不含甘 油的防冻剂缓冲液中进行冷却的精子样品。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述防冻剂缓冲液含有约10％ 至约30％的蛋黄。
4.如权利要求1所述的方法，其中加入甘油溶液后的样品中的 甘油浓度为约5％至约10％。
5.如权利要求1所述的方法，其中精子样品获自于哺乳动物。
6.如权利要求1所述的方法，其中第一个温度为约0℃至约10 ℃。
7.如权利要求1所述的方法，其中精子样品在第一个温度下保 持约4小时至约21小时。
8.如权利要求1所述的方法，其中精子以每分钟约0.2℃至约 0.5℃的速度被冷却到第一个温度。
9.如权利要求1所述的方法，其中精子经过约1.5至约4小时 被冷却到第一个温度。
10.如权利要求1所述的方法，其中第二个温度为约-40℃至约- 100℃。
11.如权利要求1所述的方法，其中精子样品在第二个温度下保 持约7分钟至约20分钟。
12.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括将被冷冻的 精子样品贮存在约-190℃至约-200℃下。
13.一种保存精子的方法，该方法包括：
a)将精子与第一种防冻剂缓冲液进行混合；
b)以足以降低精子新陈代谢速率的低速度将所述精子冷却到约2 ℃至约10℃的第一个温度由此制备被冷却的精子；
c)在约-60℃至约-90℃的第二个温度下冷冻所述被冷却的精 子；和
d)将被冷冻的精子贮存在液氮中。
14.如权利要求13所述的方法，其中第一种防冻剂缓冲液含有 约5％至约10％的甘油。
15.如权利要求13所述的方法，其中第一种防冻剂缓冲液不含 甘油。
16.如权利要求13所述的方法，其中精子样品获自于哺乳动 物。
17.如权利要求13所述的方法，其中精子样品在第一个温度下 保持约4小时至约21小时。
18.如权利要求13所述的方法，其中精子以每分钟约0.2℃至约 0.5℃的速度被冷却到第一个温度。
19.如权利要求13所述的方法，其中精子经过约1.5至约4小 时被冷却到第一个温度。
20.如权利要求15所述的方法，其中在精子被冷却到第一个温 度之后而且被进一步冷却到第二个温度之前将第二种防冻剂缓冲液加 到样品中。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述第二种防冻剂缓冲液 含有约5％至约10％的甘油。
22.如权利要求13所述的方法，其中第二个温度约为-80℃。
23.如权利要求13所述的方法，其中样品在第二个温度下保持 约7分钟至约20分钟。
24.一种提供精子的方法，该方法包括：
a)提供一种含有精子的样品；
b)从样品中分离精子；
c)将所述被分离的精子与不含甘油的第一种防冻剂缓冲液进行 混合；
d)以每分钟约0.2℃至约0.5℃的速度将所述精子冷却到约2℃ 至约8℃的第一个温度来制备被冷却的精子；
e)加入含有甘油的第二种防冻剂缓冲液；
f)将被冷却的精子在第一个温度下保持约4小时至约21小时
g)在约-60℃至约-90℃的第二个温度下将被冷却的精子冷冻约 10分钟至约15分钟；
h)将被冷冻的精子在约-180℃至约-220℃的温度下贮存一段所 需的时间；和
i)解冻所述精子由此提供精子。
25.如权利要求24所述的方法，其中精子在约37℃的水浴中解 冻约90秒钟。
26.一种生产动物的方法，包括采用由权利要求1、13或24所 述的方法保存的精子使卵母细胞受精。

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