一种能同时检测藻毒素MC-LR/RR/YR的荧光定量试纸条及其制备方法和应用

1.一种藻毒素荧光免疫层析检测试纸条，其特征在于包括：衬板和衬板上依次粘贴吸附的样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述硝酸纤维素膜上划有三根检测线T1/T2/T3线和一根质控线C线。
2.根据权利要求1所述的藻毒素荧光免疫层析检测试纸条，其特征在于：所述检测线T1/T2/T3线分别包被的抗原为藻毒素MC-LR与牛血清白蛋白的偶联物、藻毒素MC-RR与牛血清白蛋白的偶联物、藻毒素MC-YR与牛血清白蛋白的偶联物。
3.根据权利要求1所述的藻毒素荧光免疫层析检测试纸条，其特征在于：所述质控线C线包被的抗原为羊抗兔二抗。
4.根据权利要求1所述的藻毒素荧光免疫层析检测试纸条，其特征在于：所述荧光标记物结合垫上用喷金仪分别喷有藻毒素MC-LR的鼠单抗荧光微球标记物、藻毒素MC-RR的鼠单抗荧光微球标记物、藻毒素MC-YR的鼠单抗荧光微球标记物、兔IgG荧光微球标记物。
5.根据权利要求1所述的藻毒素荧光免疫层析检测试纸条，其特征在于：所述衬板为PVC硬板纸，所述样品垫为玻璃纤维素膜、聚酯膜或海绵。
6.一种根据权利要求1至5任一所述试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）制备抗体的荧光微球标记物：先将荧光微球用EDC和NHS进行活化，然后离心除去多余的EDC和NHS，用偶联缓冲液复溶后加入抗体进行偶联，偶联2～4小时后，加入牛血清白蛋白BSA和乙醇胺封闭过夜，最后离心洗涤2～3次后，用储存缓冲液复溶置于4℃保存；
（2）制备硝酸纤维素膜T线和C线：将藻毒素MC-LR与牛血清白蛋白的偶联物、藻毒素MC-RR与牛血清白蛋白的偶联物、藻毒素MC-YR与牛血清白蛋白的偶联物用喷膜机由左至右依次喷涂在距硝酸纤维素膜表面形成检测线T1、T2和T3线，将羊抗兔二抗用喷膜机喷涂在T3线右边形成质控线C线，将喷涂好的硝酸纤维素膜37℃烘干2小时，置于室温干燥环境中保存备用；
（3）荧光标记物结合垫的制备：先用含海藻糖、牛血清白蛋白、PVP的磷酸缓冲液浸泡Fusion5，然后置于37℃烘箱中烘干2小时，再将三种藻毒素抗体荧光微球标记物和兔IgG荧光微球标记物用磷酸缓冲液分别稀释后，用喷金仪喷于处理烘干后的Fusion5上，置于
37℃烘箱中烘干2小时后，置于密封干燥包装袋中保存备用；
（4）样品垫的处理：用含有EDTA、tween-20、PVP、BSA的PBS缓冲液浸泡样品垫，然后置于37℃烘箱中烘烤2小时至完全干燥，置于密封干燥包装袋中保存备用；
（5）试纸条的组装：在衬板上依次搭接并粘贴处理过的样品垫、喷有荧光标记物探针的荧光标记物结合垫、喷涂有三条检测线T线和质控线C线的硝酸纤维素膜以及吸水纸，组装完毕后剪切成4 mm宽的试纸条，装入塑料卡壳中，然后装入内置有干燥剂的铝箔袋中，室温干燥保存即可。
7.根据权利要求6所述试纸条的制备方法，其特征在于：所述荧光微球粒径范围为
100～1000nm，荧光发光物为铕、钐、铽或镝，荧光微球表面基团为氨基、羧基、巯基或羟基。
8.根据权利要求7所述试纸条的制备方法，其特征在于：所述荧光微球表面基团密度为20～250 sq·A/grp。
9.根据权利要求6所述试纸条的制备方法，其特征在于：所述三条检测线T线和质控线C线之间的间距为3～10mm。
10.一种根据权利要求1至5任一所述试纸条在检测藻毒素中的应用，其特征在于包括以下步骤：取80μL样品，滴加在试纸条卡壳的加样孔中，计时6分钟，然后将试纸条卡壳插入荧光读数仪的卡槽中，读数仪将分别激发扫描和读取T1/T2/T3/C线的荧光强度，根据荧光强度的大小和荧光读数仪中内置的标准曲线即可自动计算出样品的三种藻毒素的准确浓度。

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