一种富含免疫球蛋白的液态乳制品及其制备方法

1.一种富含免疫球蛋白的液态乳制品，其特征在于，其原料包括下述以重量百分比计的组分：35～99%的原料乳，0.1～5%乳清粉和0.8～59.75%的水，所述乳清粉为免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉；
所述的富含免疫球蛋白的液态乳制品由包括下述步骤的方法制得：
（1）将包括原料乳和水的原料混合，经均质、杀菌后冷却，得灭菌的原料混合物；所述杀菌的条件为在121-150℃下，杀菌4-15秒；
（2）制备无菌的液态免疫球蛋白IgG：将免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉充分溶解于水中，混合均匀后在60-65℃、150-300bar条件下进行均质，然后通过1.0-1.2微米的陶瓷膜过滤，再经过巴氏杀菌，从而制得无菌的液态免疫球蛋白IgG；所述巴氏杀菌的温度为
60-65℃，所述巴氏杀菌的时间为15s-15min；
（3）无菌条件下，向步骤（1）制得的灭菌的原料混合物中加入步骤（2）制得的无菌的液态免疫球蛋白IgG；
（4）在温度≤20℃的条件下进行无菌灌装，即得。
2.如权利要求1所述的液态乳制品，其特征在于，所述的原料乳为生鲜牛奶。
3.如权利要求1所述的液态乳制品，其特征在于，所述的原料还包括本领域液态奶中常规添加的食品添加剂。
4.如权利要求3所述的液态乳制品，其特征在于，所述的食品添加剂为稳定剂和/或风味物质；所述的稳定剂选自单硬脂酸甘油脂肪酸酯、双硬脂酸甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、大豆磷脂、卡拉胶和微晶纤维素中的一种或多种；所述的风味物质为本领域常规使用的各种风味物质。
5.如权利要求4所述的液态乳制品，其特征在于，所述稳定剂的用量为0.1～0.6%，所述风味物质的用量为0.05%～1%，所述百分比为占原料总重量的重量百分比。
6.如权利要求1所述的液态乳制品，其特征在于，步骤（1）所述均质为一级均质，即均质的温度为60-80℃，均质的压力为150-300bar；或者，所述均质为二级均质，即均质的温度为60-80℃，均质的压力分别为30-45bar，100-250bar。
7.如权利要求1所述的液态乳制品，其特征在于，步骤（1）所述冷却为将灭菌的原料混合物冷却到25℃以下。
8.如权利要求1所述的液态乳制品，其特征在于，所述的原料还包括食品添加剂；所述的食品添加剂为热敏性食品添加剂，所述食品添加剂在步骤（1）所述的均质后添加；或者，所述的食品添加剂为非热敏性食品添加剂，所述食品添加剂在步骤（1）中所述混合的过程中添加。
9.一种如权利要求1～8任一项所述富含免疫球蛋白的液态乳制品的制备方法，其包括下述步骤：
（1）将包括原料乳和水的原料混合，经均质、杀菌后冷却，得灭菌的原料混合物；
（2）制备无菌的液态免疫球蛋白IgG：将免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉充分溶解于水中，混合均匀后在60-65℃、150-300bar条件下进行均质，然后通过1.0-1.2微米的陶瓷膜过滤，再经过巴氏杀菌，从而制得无菌的液态免疫球蛋白IgG；
（3）无菌条件下，向步骤（1）制得的灭菌的原料混合物中加入步骤（2）制得的无菌的液态免疫球蛋白IgG；
（4）在温度≤20℃的条件下进行无菌灌装，即得。

一种富含免疫球蛋白的液态乳制品及其制备方法\n技术领域\n[0001] 本发明涉及液态奶领域，尤其涉及一种富含免疫球蛋白的液态乳制品及其制备方法。\n背景技术\n[0002] 随着我国国民经济的迅猛发展，快节奏、高效率的工作和生活方式，以及应对各种激烈的市场竞争，使越来越多的人长期处于亚健康状态，导致人体的免疫力下降。与此同时，人民生活水平的提高及可持续发展观、生活质量观的日益兴起，人们科学的医疗保健观念正在逐步形成。过去“有病才去看医生”的旧观念正渐渐淡化，转而追求以自我保健为中心的健康模式，自行掌管健康。这样一种观念的形成，为功能性食品特别是安全、天然的抗病毒的食品的发展提供了一个巨大的机会。\n[0003] 免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)是牛奶中最重要的免疫活性蛋白。牛奶中的免疫球蛋白主要有IgG、IgM、IgA，其中IgG为主要的免疫球蛋白。泌乳期牛乳中IgG的含量为0.030～0.614mg/mL，平均为0.322mg/mL。牛乳中的免疫球蛋白具有很多生物活性功能。牛奶IgG能够有效抑制细菌的繁殖，抑制细菌定植，抑制细菌分泌毒素，还能够阻止毒素与人体细胞受体的结合，中和毒素，以及有效地抗病毒。\n[0004] SARS、禽流感等重大传染病提醒人类，提高免疫能力才能有健康的生命，因此牛奶免疫球蛋白的功能引起普遍的关注。目前市场上有很多含有免疫球蛋白的乳制品，但大多数为固体。这主要是因为常规的液态乳品加工工艺会对免疫球蛋白的活性产生不利影响，容易导致免疫球蛋白变性（见表1），所以研究解决免疫球蛋白在加工中的热稳定性关系到其是否能够合理地应用到乳制品当中，从而影响这一类乳制品的开发研究。\n[0005] 表1常规杀菌条件下免疫球蛋白（IgG）变形率\n[0006] \n 杀菌条件 免疫球蛋白（IgG）变形率\n LTLT（63℃、30min） ≤1%\n HTST(72℃、15s) ≤10%\n UHT（120～139℃，4s） ≥97.6%\n发明内容\n[0007] 本发明解决的技术问题在于克服了超高温乳制品加工工艺中的热处理对免疫球蛋白会造成损失的缺陷，而提供一种利用无菌后添加的方式在常温下加入无菌液体免疫球蛋白的方法，从而完全保留了免疫球蛋白功能性组分，使其充分发挥功效。\n[0008] 本发明提供的技术方案之一是：\n[0009] 一种富含免疫球蛋白的液态乳制品，其原料包括下述以重量百分比计的组分：\n35～99%的原料乳，0.1～5%乳清粉和0.8～59.75%的水，所述乳清粉为免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉；\n[0010] 所述的富含免疫球蛋白的液态乳制品由包括下述步骤的方法制得：\n[0011] （1）将包括原料乳和水的原料混合，经均质、杀菌后冷却，得灭菌的原料混合物；\n[0012] （2）制备无菌的液态免疫球蛋白IgG：将免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉充分溶解于水或原料乳中，混合均匀后在60-65℃、150-300bar条件下进行均质，然后通过\n1.0-1.2微米的陶瓷膜过滤，再经过巴氏杀菌，从而制得无菌的液态免疫球蛋白IgG；\n[0013] （3）无菌条件下，向步骤（1）制得的灭菌的原料混合物中加入步骤（2）制得的无菌的液态免疫球蛋白IgG；\n[0014] （4）在温度≤20℃的条件下进行无菌灌装，即得。\n[0015] 本发明中，对于所述的富含免疫球蛋白的液态乳制品，其原料较佳地包括下述以重量百分比计的组分：55～99%的原料乳，1～5%乳清粉和0.8～43%的水，所述乳清粉为免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉；\n[0016] 本发明中，所述的原料乳可以是本领域各种常规的用于制备液态乳品的原料乳，如牛乳、羊乳、马乳等；所述的原料乳既可以是生鲜乳，也可以是还原乳，较佳地为生鲜乳，优选生鲜牛奶；所述的生鲜牛奶为符合GB-19301《食品安全国家标准生乳》标准的生鲜牛奶。从营养物质的含量来考虑，本发明的原料乳中的蛋白质含量优选≥2.9wt%，脂肪含量可以根据具体产品要求来定，可选用脱脂奶、低脂奶或全脂奶等。\n[0017] 本发明中，较佳地，所述的原料还包括本领域液态奶中常规添加的食品添加剂，如稳定剂和/或风味物质。\n[0018] 所述的稳定剂可选用牛奶生产工艺中各种常规的稳定剂，一般是符合GB2760规定的各种稳定剂或复配而成的复合稳定剂；较佳地，所述的稳定剂选自单硬脂酸甘油脂肪酸酯、双硬脂酸甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、大豆磷脂、卡拉胶和微晶纤维素中的一种或多种。所述的稳定剂的用量为本领域液态奶中常规的添加量，较佳地为0.1～0.6%，更佳地为0.2～0.3%，所述百分比为占原料总重量的重量百分比。\n[0019] 所述的风味物质可选用本领域常规使用的各种风味物质，如香精和/或香料等调节牛奶风味的物质。所述的香精可选用本领域各种常规的香精，较佳地选自香草香精、牛奶香精和脂蕾中的一种或多种。所述风味物质的用量为本领域的常规用量，较佳地为\n0.05%～1%，更佳地为0.1～0.5%，所述百分比为占原料总重量的重量百分比。\n[0020] 本发明中，步骤（1）所述均质的条件为本领域常规的均质条件；较佳地，步骤（1）所述均质为一级均质，即均质的温度为60-80℃，均质的压力为150-300bar；或者，所述均质为二级均质，即均质的温度为60-80℃，均质的压力分别为30-45bar，100-250bar；更佳地，步骤（1）所述均质为一级均质，即均质的温度为65-75℃，均质的压力为200-250bar；\n或者，所述均质为二级均质，即均质的温度为65-75℃，均质的压力分别为35-40bar，\n150-200bar。\n[0021] 本发明中，步骤（1）所述杀菌的条件为本领域常规；较佳地，所述杀菌的条件为在\n121-150℃下，杀菌4-15秒；更佳地，所述杀菌的条件为在131-140℃下，杀菌7-12秒。\n[0022] 本发明中，步骤（1）所述冷却较佳地为将灭菌的原料混合物冷却到25℃以下。\n[0023] 本发明步骤（1）所述原料还可以包括本领域液态奶中常规添加的食品添加剂，如稳定剂和/或风味物质。所述的食品添加剂若是热敏性的，则在步骤（1）所述的均质后添加；若所述食品添加剂是非热敏性的，则在步骤（1）中所述混合的过程中添加。\n[0024] 本发明中，步骤（2）所述巴氏杀菌为本领域常规，较佳地，所述巴氏杀菌的温度为\n60-65℃，所述巴氏杀菌的时间为15s-15min；更佳地，所述巴氏杀菌的温度为62-65℃，所述巴氏杀菌的时间为1min-10min。\n[0025] 本发明中，所述免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉为市售常规途径获得。\n[0026] 本发明提供的技术方案之二是：一种如上所述的富含免疫球蛋白的液态乳制品的制备方法，其包括下述步骤：\n[0027] （1）将包括原料乳和水的原料混合，经均质、杀菌后冷却，得灭菌的原料混合物；\n[0028] （2）制备无菌的液态免疫球蛋白IgG：将免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉充分溶解于水或原料乳中，混合均匀后在60-65℃、150-300bar条件下进行均质，然后通过\n1.0-1.2微米的陶瓷膜过滤，再经过巴氏杀菌，从而制得无菌的液态免疫球蛋白IgG，灌装至无菌袋中备用；\n[0029] （3）无菌条件下，向步骤（1）制得的灭菌的原料混合物中加入步骤（2）制得的无菌的液态免疫球蛋白IgG；\n[0030] （4）在温度≤20℃的条件下进行无菌灌装，即得。\n[0031] 本发明是将热敏性的富含免疫球蛋白的乳清粉制成无菌的液态免疫球蛋白样品，然后采用无菌后添加的方式添加到已经灭菌处理过的常规液态乳制品中，从而制得本发明在常温条件下保存的富含免疫球蛋白的液态乳制品。\n[0032] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。\n[0033] 本发明所用试剂和原料均市售可得。\n[0034] 本发明的积极进步效果在于：\n[0035] 1、本发明富含免疫球蛋白液态乳制品的货架期较长，在确保免疫球蛋白活性的前提下，可以达到常温条件下保质期六个月以上，从而扩大了销售范围和销售周期；\n[0036] 2、本发明的产品采用UHT杀菌后段无菌添加免疫球蛋白液体，大大节约了生产成本和管理成本，解决了产品在货架期内的稳定性问题；\n[0037] 3、本发明通过膜过滤和低温巴氏杀菌的方式将富含免疫球蛋白的乳清粉制成无菌的液态免疫球蛋白，解决了粉体在牛奶中难溶解且热处理易变性的问题，该方法大大提高了免疫球蛋白在牛奶中的利用率。\n[0038] 4、本发明富含免疫球蛋白的液态乳制品除了具有常规乳品的营养功能外，还能帮助人体进行免疫调节作用。\n具体实施方式\n[0039] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。\n[0040] 下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。本发明中除特别说明之外，所用的百分比都是重量百分比。实施例中所用原料的生产厂商如下:\n[0041] 原料乳：光明乳业股份有限公司荷斯坦分公司；\n[0042] 乳清粉（免疫球蛋白IgG含量≥10%）：戴维林国际贸易（上海）有限公司；\n[0043] 稳定剂QSR-70（组成：单硬脂酸甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、卡拉胶）：上海蓝岛嘉利食品添加剂有限公司；\n[0044] 稳定剂SR-16（组成：单硬脂酸甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、大豆磷脂）：上海蓝岛嘉利食品添加剂有限公司；\n[0045] 稳定剂9395-C（组成：微晶纤维素、单硬脂酸甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯）：丹尼斯克（中国）有限公司；\n[0046] 香精APG-07：爱普香料集团股份有限公司；\n[0047] 香料APG-03：爱普香料集团股份有限公司。\n[0048] 实施例1\n[0049] 原料配方如下表：\n[0050] \n 原料 添加量（g）\n 原料乳 990\n 水 8\n 乳清粉（IgG≥10%） 1\n 稳定剂QSR-70 1\n[0051] 制备工艺：\n[0052] （1）将稳定剂QSR-70加入原料乳中，搅拌10分钟，混合均匀；\n[0053] （2）二级均质：均质温度为75℃，第一级在30bar，第二级在250bar下进行；\n[0054] （3）杀菌：杀菌条件为121℃，时间为15秒，将牛奶冷却至25℃以下；\n[0055] （4）液态无菌免疫球蛋白的制备：将富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8（w/w）的比例溶解在水中，然后采用均质温度为60℃，均质压力为300bar，充分溶解免疫球蛋白，再用1.2微米膜过滤和65℃巴氏杀菌15s制得无菌液体免疫球蛋白样品备用。\n[0056] （5）向冷却后的灭菌牛奶加入无菌免疫球蛋白液体，进行无菌灌装。\n[0057] 检验结果如下：\n[0058] \n 项目 指标\n 脂肪 3.1%\n 蛋白 2.9%\n 免疫球蛋白IgG 100mg/L\n[0059] 实施例2\n[0060] 原料配方如下表：\n[0061] \n 原料 添加量（g）\n 原料乳 800\n 乳清粉（IgG≥10%） 3.5\n 稳定剂QSR-70 1\n 香精APG-07 0.5\n 水 196\n[0062] 制备工艺：\n[0063] （1）将稳定剂QSR-70、香精APG-07、水加入原料奶中，搅拌10分钟，混合均匀；\n[0064] （2）二级均质：均质温度：60℃，第一级在45bar，第二级在100bar下进行；\n[0065] （3）杀菌:杀菌条件为150℃，时间为4秒，将牛奶冷却至25℃以下；\n[0066] （4）液态无菌免疫球蛋白的制备：将富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8（w/w）的比例溶解在水中，然后采用均质温度为65℃，均质压力为150bar，充分溶解免疫球蛋白，再用1.0微米膜过滤和60℃巴氏杀菌15min制得无菌液体免疫球蛋白样品备用。\n[0067] （5）向冷却后的灭菌牛奶加入无菌免疫球蛋白液体，进行无菌灌装。\n[0068] 检验结果如下：\n[0069] \n 项目 指标\n 脂肪 2.5%\n 蛋白 2.3%\n 免疫球蛋白IgG 350mg/L\n[0070] 实施例3\n[0071] 原料配方如下表：\n[0072] \n 原料 添加量（g）\n 原料乳 350\n 乳清粉（IgG≥10%） 50\n 稳定剂SR-16 2.5\n 水 597.5\n[0073] 制备工艺：\n[0074] （1）将稳定剂SR-16、水分加入原料奶中，搅拌10分钟，混合均匀；\n[0075] （2）二级均质:均质温度：80℃，第一级在45bar，第二级在100bar下进行；\n[0076] （3）杀菌:杀菌条件为135℃，时间为4秒，将牛奶冷却至25℃以下；\n[0077] （4）液态无菌免疫球蛋白的制备：将富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8（w/w）的比例溶解在水中，然后采用均质温度为63℃，均质压力为200bar，充分溶解免疫球蛋白，再用1.2微米膜过滤和60℃巴氏杀菌15min制得无菌液体免疫球蛋白样品备用。\n[0078] （5）向冷却后的灭菌牛奶加入无菌免疫球蛋白液体，进行无菌灌装。\n[0079] 检验结果如下：\n[0080] \n 项目 指标\n 脂肪 1.1%\n 蛋白 1.0%\n 免疫球蛋白IgG 5000mg/L\n[0081] 实施例4\n[0082] 原料配方如下表：\n[0083] \n 原料 添加量（g）\n 原料乳 800\n 乳清粉（IgG≥10%） 20\n 稳定剂SR-16 2.5\n 水 177.5\n[0084] 制备工艺：\n[0085] （1）将稳定剂SR-16、水分加入原料奶中，搅拌10分钟，混合均匀；\n[0086] （2）一级均质：均质温度：80℃，在300bar下进行均质；\n[0087] （3）杀菌：杀菌条件为135℃，时间为4秒，将牛奶冷却至25℃以下；\n[0088] （4）液态无菌免疫球蛋白的制备：将富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8（w/w）的比例溶解在水中，然后采用均质温度为63℃，均质压力为200bar，充分溶解免疫球蛋白，再用1.2微米膜过滤和60℃巴氏杀菌10min制得无菌液体免疫球蛋白样品备用。\n[0089] （5）向冷却后的灭菌牛奶加入无菌免疫球蛋白液体，进行无菌灌装。\n[0090] 检验结果如下：\n[0091] \n 项目 指标\n 脂肪 2.5%\n 蛋白 2.3%\n 免疫球蛋白IgG 2000mg/L\n[0092] 实施例5\n[0093] 原料配方如下表：\n[0094] \n 原料 添加量（g）\n 原料奶 600\n 乳清粉（IgG≥10%） 10\n 稳定剂9395-C 6\n 水 384\n[0095] 制备工艺：\n[0096] （1）将稳定剂9395-C、水分加入原料奶中，搅拌10分钟，混合均匀；\n[0097] （2）一级均质:均质温度：60℃，在150bar下进行均质；\n[0098] （3）杀菌：杀菌条件为135℃，时间为4秒，将牛奶冷却至25℃以下；\n[0099] （4）液态无菌免疫球蛋白的制备：将富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8（w/w）的比例溶解在水中，然后采用均质温度为63℃，均质压力为200bar，充分溶解免疫球蛋白，再用1.0微米膜过滤和60℃巴氏杀菌15min制得无菌液体免疫球蛋白样品备用。\n[0100] （5）向冷却后的灭菌牛奶加入无菌免疫球蛋白液体，进行无菌灌装。\n[0101] 检验结果如下：\n[0102] \n 项目 指标\n 脂肪 1.8%\n 蛋白 1.7%\n 免疫球蛋白IgG 1000mg/L\n[0103] 实施例6\n[0104] 原料配方如下表：\n[0105] \n 原料 添加量（g）\n 原料乳 600\n 乳清粉（IgG≥10%） 3\n 稳定剂9395-C 4\n 香精APG-03 10\n 水 383\n[0106] 制备工艺：\n[0107] （1）将稳定剂9395-C、水分加入原料奶中，搅拌10分钟，混合均匀；\n[0108] （2）一级均质:均质温度：80℃，在150bar下进行均质；\n[0109] （3）将香精APG-03加入到均质后的牛奶中混合均匀；\n[0110] （4）杀菌：杀菌条件为135℃，时间为4秒，将牛奶冷却至25℃以下；\n[0111] （5）液态无菌免疫球蛋白的制备：将富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8（w/w）的比例溶解在水中，然后采用均质温度为63℃，均质压力为200bar，充分溶解免疫球蛋白，再用1.2微米膜过滤和60℃巴氏杀菌10min制得无菌液体免疫球蛋白样品备用。\n[0112] （6）向冷却后的灭菌牛奶加入无菌免疫球蛋白液体，进行无菌灌装。\n[0113] 检验结果如下：\n[0114] \n 项目 指标\n 脂肪 1.8%\n 蛋白 1.7%\n 免疫球蛋白IgG 300mg/L\n[0115] 效果实施例1本发明富含免疫球蛋白的液态奶乳制品的感官评定结果[0116] 此感官评定实验由50名评价员完成。得分高者则效果好，评价高。具体结果见下表：\n[0117] \n[0118] 由以上数据显示，富含免疫球蛋白的液态乳制品从风味、口感、色泽三方面来看，都受到测评者的亲睐。\n[0119] 效果实施例2本发明富含免疫球蛋白的液态乳制品在保质期内感官和理化评价[0120] 富含免疫球蛋白的液态乳（实施例5）在保质期内感官和理化的测试。\n[0121] 测试结果见下表：\n[0122] \n[0123] \n[0124] *对照样牛奶：常规超高温杀菌牛奶，未添加免疫球蛋白。\n[0125] 由以上数据显示，将富含免疫球蛋白的液态乳制品与常规超高温牛奶比较，富含免疫球蛋白的液态奶在常温七个月内产品的品质比较稳定，免疫球蛋白较好地保存了其活性，特别是在加速储存试验（恒温箱36±1℃）条件下，免疫球蛋白在三个月内仍能够较好地保存其活性。上述结果说明富含免疫球蛋白的液态奶在确保免疫球蛋白活性的前提下，能够实现六个月以上的保质期，从而具有理想的货架期，可以扩大销售范围和销售周期。需要特别说明的是，对照样牛奶由于未额外添加免疫球蛋白，因此其免疫球蛋白的含量几乎为零，而且目前市场上几乎所有的液态奶产品中的免疫球蛋白含量都几乎为零。\n[0126] 效果实施例3本发明富含免疫球蛋白的液态乳制品的免疫功能效果评价[0127] 根据中国卫生部2003年公布的保健食品检验与评价技术规范(2003版)中所列的试验项目、试验原则和结果判定的初步规定，进行本发明富含免疫球蛋白的液态乳制品的免疫功能效果评价实验。具体如下：\n[0128] 一、试验项目\n[0129] 1.1体重；\n[0130] 1.2脏器/体重比之测定:胸腺/体重比值（胸腺指数），脾脏/体重比值（脾指数）；\n[0131] 1.3细胞免疫功能测试:小鼠淋巴细胞转化实验，迟发型变态反应实验（DTH）；\n[0132] 1.4体液免疫功能测试:抗体生成细胞检测，血清溶血素测定；\n[0133] 1.5单核-巨噬细胞功能测试：小鼠炭粒廓清实验，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；\n[0134] 1.6NK细胞活性测试；\n[0135] 二、试验原则\n[0136] 上述试验项目所列指标为必做项目。\n[0137] 三、结果判定标准\n[0138] 增强免疫力功能:在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两方面结果阳性，可以判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。\n[0139] 其中细胞免疫功能测试项目中的两个实验结果均为阳性，或任一试验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫功能测试结果阳性。体液免疫功能测试项目中的两个实验结果均为阳性，或任一试验的两个剂量组结果阳性，可判定体液免疫功能测试结果阳性。单核-巨噬细胞功能测试项目中的两个实验结果均为阳性，或任一试验的两个剂量组结果阳性，可判定单核-巨噬细胞功能测试结果阳性。NK细胞活性功能测试项目中的两个实验结果均为阳性，或任一试验的两个剂量组结果阳性，可判定NK细胞活性测试结果阳性。\n[0140] 四、试验方法\n[0141] 将300只小鼠按体重随机分入五个实验大组，每组60只（免疫一组进行NK细胞活性测试和淋巴细胞转化实验，免疫二组进行DTH、脾指数和胸腺指数实验，免疫三组进行抗体生成细胞检测和血清溶血素测定，免疫四组进行炭粒廓清实验，免疫五组进行巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。每个实验大组中均设有空白对照组及低、中、高剂量组四组小组，每小a\n组15只。按照每人（按60kg体重计算）每日200ml富含免疫球蛋白的牛奶（实施例5），相当于3.3ml/kg·bw，分别按人体推荐摄入量5、10、30倍设计三个剂量组，即17ml/kg·bw（低剂量组）、33ml/kg·bw（中剂量组）和100ml/kg·bw（高剂量组），另外0ml/kg·bw为不含免疫球蛋白IgG的牛奶代替受试物作为对照组，经口每日一次给予小鼠相应剂量的受试a\n物，连续灌胃30d后测各项免疫力功能指标。（ 注明:人体推荐量为200ml/60kg体重。由于样品推荐剂量很大，超过动物最大承受量，故试验采用脱去水分的有效成份进行，脱水后有效成份放置4℃冷藏）。\n[0142] 五、实验数据处理\n[0143] 将所得的实验数据采用SPSS软件进行统计和分析。\n[0144] 六、实验结果\n[0145] 表1免疫一组（NK细胞活性、脾淋巴细胞转化实验）结果（n=10）[0146] \n 组别(ml/kg·bw) NK细胞活性（%） 淋转OD差值\n 0 71.2±10.7 0.008±0.005\n 17 73.9±17.5 0.010±0.005\n 33 82.0±15.2 0.015±0.008\n 100 92.4±13.1*# 0.018±0.009*#\n[0147] 由表1可见：100ml/kg·bw剂量组的NK细胞活性显著高于0ml/kg·bw对照组（p<0.05）。100ml/kg·bw剂量组的OD差值显著高于0ml/kg·bw对照组（p<0.05）。\n[0148] 表2免疫二组（DTH实验）结果（n=10）\n[0149] \n 组别（ml/kg·bw） 肿胀度\n 0\n 9.7±3.1\n 17\n 10.3±2.9\n 33\n 12.9±4.9*#\n 100\n 12.9±2.6*#\n[0150] 由表2可见：DTH实验中，33ml/kg·bw、100ml/kg·bw剂量组的左右耳重量差值（肿胀度）显著高于0ml/kg·bw空白对照组（p<0.05）。\n[0151] 表3免疫三组（抗体生成细胞和溶血素实验）结果（n=10）\n[0152] \n 组别(ml/kg·bw) 溶血空斑（×106个/全脾） HC50\n 0 182±63 91±40\n 17 254±47 92±29\n 33 286±91 123±27\n 100 287±90*# 127±32*#\n[0153] 由表3可见：抗体生成细胞检测中，33ml/kg·bw、100ml/kg·bw剂量组的空斑数显著高于0ml/kg·bw空白对照组（p<0.05）；血清溶血素实验中，33ml/kg·bw、100ml/kg·bw剂量组的HC50数显著高于0ml/kg·bw空白对照组（p<0.05）。\n[0154] 表4免疫四组（碳廓清实验）结果（n=10）\n[0155] \n 组别（ml/kg·bw） 吞噬指数（%）\n 0 6.3±0.34\n 17 6.39±0.57\n 33 6.16±0.66\n 100 6.15±0.70\n[0156] 由表4可见：炭粒廓清实验中，17ml/kg·bw、33ml/kg·bw、100ml/kg·bw剂量组的吞噬指数略高于0ml/kg·bw空白对照组，但无统计学差异。\n[0157] 表5免疫五组（吞噬实验）结果（n=10）\n[0158]