抗人IV型胶原蛋白酶联免疫定量测定试剂盒及制作方法

1、抗人IV型胶原蛋白酶联免疫测定试剂盒，其特征在于它由抗人IV型 胶原蛋白单克隆抗体包被的酶标板和测定试剂组成，测定试剂为：
标准抗原冻干品：
酶标抗体结合物，
稀释液磷酸盐缓冲液，
洗液吐温磷酸盐缓冲液，
显色液A四甲基联苯胺，B双氧水，
终止液2M硫酸溶液。
2、如权利要求1所述的试剂盒制作方法，包括标准抗原的制备，单克 隆抗体包被的酶标板的制作，酶标抗体结合物的制备和试剂的配制，其特征 在于：
a)单克隆抗体的制备，是将人胎盘提取的IV型胶原蛋白抗原进行免疫 BACB/C小鼠，再取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，培养，筛选克隆，选择 特异性抗人IV型胶原单克隆细胞株注入小鼠腹腔制备腹水，得到单克隆抗体 腹水用正辛酸纯化得到单克隆抗体；
b)单克隆抗体包被的酶标板的制作，将单克隆抗体用碳酸盐缓冲液释 释后滴入酶标板各孔内，过夜吸附，用洗液洗板，再用牛、马血清封闭液在 37℃温度封闭，甩干，吹干，即制成单克隆抗体包被的酶标板。
3、根据权利要求2所述的制作方法，其特征在于IV型胶原蛋白单克隆 抗体可以是氨基端7S，羧基NC1，三螺旋中心区，IV型胶原全抗体的其中任 意一种。
4、如权利要求1所述的试剂盒的测定方法，其特征在于它依次按下述 步骤进行：
a)在酶标板上孔内加稀释液，
b)再加入人血清样品，在37℃水浴上静置10-20分钟，
c)再加入酶标抗体结合物，在37℃水浴上静置60分钟；
d)用洗液洗板并甩干、吹干；
e)依次加显色液A、B，在37℃水浴上静置5-10分钟；
f)加终止液，结束反应；
g)测OD450值，计算结果。

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