一种C-肽定量测定试剂盒

1.一种C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：包括抗C-肽抗体包被的磁性微粒、吖啶酯标记的抗C-肽抗体；
所述抗C-肽抗体包被的磁性微粒包括带有羧基或对甲苯磺酰基的磁性微粒、抗C-肽抗体、包被缓冲液、保存液、封闭液；
所述吖啶酯标记的抗C-肽抗体由标记物、抗C-肽抗体、标记缓冲液、保存液制备而成；
所述标记物为吖啶酯或吖啶磺酰胺或吖啶磺酰胺衍生物中的任意一种。
2.根椐权利要求1所述的C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：所述带有羧基的抗C-肽抗体包被的磁性微粒还包括活化剂和偶联剂，所述带有羧基的抗C-肽抗体包被的磁性微粒的制备方法如下：
1)配制所述包被缓冲液、封闭液、保存液、活化剂、偶联剂；
2)抗C-肽抗体预处理：取所述抗C-肽抗体用超滤离心管进行离心，弃掉滤液，往浓缩的抗体中加入包被缓冲液，继续离心，重复4-6次，然后将离心管倒置离心，浓缩收集抗体备用；
3)制备抗C-肽抗体包被的磁性微粒：取所述带有羧基的磁性微粒用包被缓冲液清洗4-
6次，磁分离去除上清液，加入活化剂和偶联剂，用漩涡混合器充分混匀悬浮磁性微粒，反应
30-40min；再用包被缓冲液清洗4-6次，磁分离架上去除上清液，添加步骤2)预处理过的抗C-肽抗体，添加包被缓冲液，在25℃下，用漩涡混合器旋转包被15-20小时；反应完成后用包被缓冲液清洗4-6次，磁分离去除上清液，加入封闭液，在25℃下，用漩涡混合器旋转包被4-
5小时，最后用保存液清洗4-6次，用保存液稀释后，2-8℃保存。
3.根椐权利要求1所述的C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：所述带有甲苯磺酰基的抗C-肽抗体包被的磁性微粒还包括催化剂，所述带有甲苯磺酰基的抗C-肽抗体包被的磁性微粒的制备方法如下：
1)配制所述包被缓冲液、封闭液、保存液、催化剂；
2)抗C-肽抗体预处理：取所述抗C-肽抗体用超滤离心管进行离心，弃掉滤液，往浓缩的抗体中加入包被缓冲液，继续离心，重复4-6次，然后将离心管倒置离心，浓缩收集抗体备用；
3)制备抗C-肽抗体包被的磁性微粒：取所述带有对甲苯磺酰基的磁性微粒用包被缓冲液清洗4-6次，磁分离去除上清液，加入催化剂，用漩涡混合器充分混匀悬浮磁性微粒，反应
30-40min；再用包被缓冲液清洗4-6次，磁分离去除上清液，添加步骤2)预处理过的抗C-肽抗体，添加包被缓冲液，在25℃下，用漩涡混合器旋转包被15-20小时；反应完成后用包被缓冲液清洗4-6次，磁分离去除上清液，加入封闭液，在25℃下，用漩涡混合器旋转包被4-5小时，最后用保存液清洗4-6次，用保存液稀释后，2-8℃保存。
4.根椐权利要求1所述的C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：所述吖啶酯标记的抗C-肽抗体的制备方法如下：
1)配制所述标记缓冲液、保存液；
2)抗C-肽抗体预处理：取所述抗C-肽抗体用超滤离心管进行离心，弃掉滤液，往浓缩的抗体中加入标记缓冲液，继续离心，重复4-6次，然后将离心管倒置离心，浓缩收集抗体备用；
3)制备吖啶酯标记的抗C-肽抗体：将所述标记物加入步骤2)预处理的抗体中，添加标记缓冲液，避光37℃震荡反应16小时，反应完成后，用快速高效蛋白纯化系统纯化，去除未结合的标记物，收集标记的抗体，用保存液稀释后，2-8℃保存。
5.根椐权利要求1所述的C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：所述C-肽定量测定试剂盒还包括样本稀释液、反应清洗液、预激发液、激发液、C-肽标准品。
6.根椐权利要求5所述的C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：所述样本稀释液为添加有表面活性剂和防腐剂的Tris缓冲液或MES缓冲液或磷酸缓冲液。
7.根椐权利要求5所述的C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：所述反应清洗液为添加有表面活性剂和防腐剂、浓度为0.01M磷酸盐缓冲液组成。
8.根椐权利要求5所述的C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：所述预激发液为浓度为
13-14g/L过氧化氢和浓度为3-4g/L硝酸组成的水溶液。
9.根椐权利要求5所述的C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：所述激发液为氢氧化钠水溶液。
10.根椐权利要求5所述的C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：所述C-肽标准品的制备方法如下：
(1)配制标准品稀释液；
(2)制备C-肽标准品：用标准品稀释液溶解C-肽抗原，配制目标浓度为60ng/mL的C-肽抗原高浓度原液，采用C-肽标准品进行标示，测出其实际浓度值，根据实际浓度值，用标准品稀释液稀释配制不同浓度C-肽标准品，配制好的C-肽标准品分装到西林瓶中，每瓶1mL，冻干后，2-8℃保存。

暂无