无同源性、多个长片段、高效零背景组装方法

发明专利有效专利

申请号：
CN202110220459.2
IPC分类号：C12N15/81;C12N15/70;C12N15/66
申请日期：
2021-02-26
申请人：
通用生物系统（安徽）有限公司

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法律信息

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著录项信息

专利名称	无同源性、多个长片段、高效零背景组装方法
申请号	CN202110220459.2	申请日期	2021-02-26
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2021-06-08	公开/公告号	CN112921050A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/81 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/63 使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节〔5〕 C12N15/79 专门适用于真核细胞宿主的载体或表达系统〔5〕 C12N15/80 用于真菌〔5〕 C12N15/81 用于酵母〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;8;1;;;C;1;2;N;1;5;/;7;0;;;C;1;2;N;1;5;/;6;6查看分类表>
申请人	通用生物系统（安徽）有限公司	申请人地址	安徽省滁州市经济技术开发区祈福寺西路69号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	通用生物系统（安徽）有限公司	当前权利人	通用生物系统（安徽）有限公司
发明人	喻明军;崔康乐;王维坤;骆晓雯;纪世春
代理机构	合肥正则元起专利代理事务所（普通合伙）	代理人	刘生昕

摘要

本发明公开了无同源性、多个长片段、高效零背景组方法，包括以下步骤：先在整个环化质粒限制性内切酶Not I位点唯一处，添加一个B片段Yesator i，同时保证B片段左右有且刚好只两个Not I酶切位点，示例无同源性的A、B片段之间设计两条Pr imer 1/2引物，无同源性的B、C片段之间设计两条Pr imer 3/4引物以引物作为两个片段之间连接的桥梁；将所有片段共7个ABCDEFG，同每个片段接头处的一对引物共7对pr imer1‑14，一同转入酵母感受态细胞震荡培养两天；第四步、提取培养两天的酵母质粒；最后经过扩增、检测即得，本发明提供一种无同源性、多个长片段、高效零背景组方法，经过酵母组装、大肠杆菌筛选，即完成零背景克隆，无空载体产出，且相较于传统克隆方式节约大量时间。

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