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一种基于无缝克隆技术的H9N2亚型禽流感病毒的拯救方法

发明专利有效专利
  • 申请号:
    CN202011629470.6
  • IPC分类号:C12N15/85;C12N7/00;C12R1/93
  • 申请日期:
    2020-12-30
  • 申请人:
    华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
著录项信息
专利名称一种基于无缝克隆技术的H9N2亚型禽流感病毒的拯救方法
申请号CN202011629470.6申请日期2020-12-30
法律状态实质审查申报国家中国
公开/公告日2021-04-20公开/公告号CN112680477A
优先权暂无优先权号暂无
主分类号C12N15/85IPC分类号C;1;2;N;1;5;/;8;5;;;C;1;2;N;7;/;0;0;;;C;1;2;R;1;/;9;3查看分类表>
申请人华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司申请人地址
广东省肇庆市高新区创业路5号肇庆大华农生物药品有限公司动物大楼(生产车间)一楼 变更 专利地址、主体等相关变化,请及时变更,防止失效
权利人华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司当前权利人华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
发明人陈瑞爱;黄梅;张古月;温良海
代理机构广州市科丰知识产权代理事务所(普通合伙)代理人龚元元
摘要
本发明属于生物领域,公开了一种基于无缝克隆技术的H9N2亚型禽流感病毒的拯救方法,包括如下步骤:步骤1:提取H9N2亚型禽流感病毒的RNA,并根据RNA获得病毒的cDNA;步骤2:以cDNA为模板采用8对引物扩增得到H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物;步骤3:将PHW2000质粒进行酶切得到线性化片段;步骤4:将H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物分别与线性化的PHW2000载体进行同源重组得到8种重组质粒;步骤5:将8种重组质粒共同转染293T及MDCK混合培养细胞,得到重组的H9N2病毒;其中,8对引物的序列分别为如序列表SEQ ID NO:2至SEQ ID NO:17所示。该方法的优势在于:操作简单、重组精确、拯救效率高。

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