一种具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂及其制备方法

1.一种具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，其特征在于，它包括背衬层、固定在背衬层上的含药基质层和覆盖在含药基质层上的防粘层，所述的含药基质层包括水凝胶基质15～
45份、挥发油部位15～45份、乙醇精制提取物30-90份和透皮促渗剂8～24份；
所述的挥发油部位和乙醇精制提取物由下列方法制备得到：
(1)取当归20～40份、党参10～30份，红花15～30份，丹参15～30份，川芎15～30份、骨碎补10～25份，狗脊5～20份，贯众4～24份，杜仲10～30份，续断10～40份、延胡索10～40份、干姜20～40份，独活10～30份，川断10～20份，怀牛膝10～40份，白芍5～25份，青风藤6～24份，黄芪20～40份，菟丝子10～20份，鸡血藤20～40份，鹿衔草10～25份，伸筋草15～45份和全蝎5～10份组成的中药组合物；加入中药组合物总重量8～15倍量的水煎煮2～3次，并用挥发油提取器收集得到挥发油部位，合并水煎液在30～70℃减压浓缩得浓缩物；
(2)取步骤(1)得到的浓缩物加入乙醇，回流提取2～3次，每次1～2小时，合并乙醇提取物浓缩，得乙醇浓缩物；
(3)取步骤(2)得到的乙醇浓缩物上大孔吸附树脂柱，用体积浓度为50％～70％的乙醇洗脱，合并60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥得乙醇精制提取物。
2.根据权利要求1所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，其特征在于，所述的中药组合物由当归40份、党参30份，红花20份，丹参30份，川芎25份、骨碎补20份，狗脊10份，贯众
16份，杜仲20份，续断35份、延胡索20份、干姜40份，独活16份，川断16份，怀牛膝30份，白芍
25份，青风藤18份，黄芪40份，菟丝子20份，鸡血藤30份，鹿衔草10份，伸筋草20份和全蝎6份组成。
3.根据权利要求1或2所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，其特征在于，所述的水凝胶基质包括5～20份黏合剂、20～40份骨架材料和10～30份保湿剂。
4.根据权利要求3所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，其特征在于，所述的黏合剂为海藻酸钠或羧甲基纤维素。
5.根据权利要求4所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，其特征在于，所述的骨架材料包括聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮K30。
6.根据权利要求5所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，其特征在于，所述的保湿剂包括甘油或聚乙二醇400。
7.根据权利要求6所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，其特征在于，所述的透皮促渗剂为氮酮、丙二醇或薄荷醇中的一种或几种。
8.权利要求1所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取当归20～40份、党参10～30份，红花15～30份，丹参15～30份，川芎15～30份、骨碎补10～25份，狗脊5～20份，贯众4～24份，杜仲10～30份，续断10～40份、延胡索10～40份、干姜20～40份，独活10～30份，川断10～20份，怀牛膝10～40份，白芍5～25份，青风藤6～24份，黄芪20～40份，菟丝子10～20份，鸡血藤20～40份，鹿衔草10～25份，伸筋草15～45份和全蝎5～10份组成的中药组合物；加入中药组合物总重量8～15倍量的水煎煮2～3次，并用挥发油提取器收集得到挥发油部位，合并水煎液在30～70℃减压浓缩得浓缩物；
(2)取步骤(1)得到的浓缩物加入乙醇，回流提取2～3次，每次1～2小时，合并乙醇提取物浓缩，得乙醇浓缩物；
(3)取步骤(2)得到的乙醇浓缩物上大孔吸附树脂柱，用体积浓度为50％～70％的乙醇洗脱，合并60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥得乙醇精制提取物；
(4)水凝胶基质的制备：取黏合剂和骨架材料加入水，放置24小时充分溶胀，在水浴上混合并加入保湿剂，充分搅拌混匀，得透明黏稠的水凝胶基质；
(5)取步骤(1)挥发油部位15～45份和步骤(3)乙醇精制提取物30～90份，分散于步骤(4)制备得到的15～45份水凝胶基质中，加入透皮促渗剂8～24份，混合均匀，超声除去气泡，趁热涂布于背衬层上，干燥后覆上防粘层，即得。
9.根据权利要求8所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述的黏合剂为海藻酸钠或羧甲基纤维素；所述的骨架材料为聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮K30；所述的保湿剂为甘油或聚乙二醇400。
10.根据权利要求8所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述的透皮促渗剂为氮酮、丙二醇或薄荷醇中的一种或几种。

一种具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂及其制备方法\n技术领域：\n[0001] 本发明涉及一种中药组合物及其外用水凝胶贴剂，具体涉及一种具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂及其制备方法。\n背景技术\n[0002] 腰椎间盘突出系指由于腰椎间盘髓核突出压迫其周围神经组织而引起的一系列症状。临床统计表明，腰椎间盘突(脱)出症是骨科门诊最为多见的疾患之一，也是腰腿痛最为多见的原因，临床上以持续性腰背部钝痛最为常见，以平卧位减轻，站立则加剧，在一般情况下可以忍受，并容许腰部适度活动及慢步行走，主要是机械压迫所致。持续时间少则2周，长者可达数月，甚至数年之久。另一类疼痛为腰部痉挛样剧痛，不仅发病急骤突然，且多难以忍受，非卧床休息不可。此主要是由于缺血性神经根炎所致，即髓核突然突出压迫神经根，致使根部血管同时受压而呈现缺血、淤血、乏氧及水肿等一系列改变，并可持续数天至数周。另外临床上还表现为下肢放射痛，肢体麻木，肌肉麻痹等症状，严重影响人们的生活。\n[0003] 随着年龄的增长，人们骨骼钙质流失，加之坐立姿势不对，腰椎间盘容易出现腰椎间盘突出等病症，严重影响人们的生活和工作，对于腰椎间盘突出病症，一般采用手术的治疗方法，存在病痛和费用高等缺点，中医药在防治腰椎间盘突出方面尤其独特的优势，但目前用于治疗腰椎间盘突出的中药大多以口服为主，存在首过效应和胃肠道的破坏，生物利用度低等问题。\n[0004] 经皮吸收贴剂的治疗特点与优势在于，透皮给药系统可避免肝脏的首过效应和药物在胃肠道的灭活，药物的吸收不受胃肠因素的影响，减少用药的个体差异，维持恒定药效血液浓度或生理效应。\n发明内容\n[0005] 发明目的：本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种使用方便、疗效持续稳定，治疗效果显著的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，本发明另一个目的是提供该透皮贴剂的制备方法。\n[0006] 技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：\n[0007] 一种具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，其特征在于，包括背衬层、固定在背衬层上的含药基质层和覆盖在含药基质层上的防粘层，所述的含药基质层包括水凝胶基质15～\n45份、挥发油部位15～45份、乙醇精制提取物30-90份和透皮促渗剂8～24份；\n[0008] 所述的挥发油部位由下列方法制备得到：\n[0009] (1)取当归20～40份、党参10～30份，红花15～30份，丹参15～30份，川芎15～30份、骨碎补10～25份，狗脊5～20份，贯众4～24份，杜仲10～30份，续断10～40份、延胡索10～40份、干姜20～40份，独活10～30份，川断10～20份，怀牛膝10～40份，白芍5～25份，青风藤6～24份，黄芪20～40份，菟丝子10～20份，鸡血藤20～40份，鹿衔草10～25份，伸筋草15～45份和全蝎5～10份组成的中药组合物；加入中药组合物总重量8～15倍量的水煎煮2～3次，并用挥发油提取器收集得到挥发油部位，合并水煎液在30～70℃减压浓缩得浓缩物；\n[0010] (2)取步骤(1)得到的浓缩物加入乙醇，回流提取2～3次，每次1～2小时，合并乙醇提取物浓缩，得乙醇浓缩物；\n[0011] (3)取步骤(2)得到的乙醇浓缩物上大孔吸附树脂柱，用体积浓度为50％～70％的乙醇洗脱，合并60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥得乙醇精制提取物。\n[0012] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，所述的中药组合物由当归40份、党参30份，红花20份，丹参30份，川芎25份、骨碎补20份，狗脊10份，贯众16份，杜仲20份，续断35份、延胡索20份、干姜40份，独活16份，川断16份，怀牛膝30份，白芍25份，青风藤18份，黄芪40份，菟丝子20份，鸡血藤30份，鹿衔草10份，伸筋草20份和全蝎6份组成。\n[0013] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，所述的水凝胶基质包括5～20份黏合剂、20～40份骨架材料和10～30份保湿剂。\n[0014] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，所述的黏合剂为海藻酸钠或羧甲基纤维素。\n[0015] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，所述的骨架材料包括聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮K30。\n[0016] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，所述的保湿剂包括甘油或聚乙二醇400。\n[0017] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，所述的透皮促渗剂为氮酮、丙二醇或薄荷醇中的一种或几种。\n[0018] 本发明所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂的制备方法，包括以下步骤：\n[0019] (1)取当归20～40份、党参10～30份，红花15～30份，丹参15～30份，川芎15～30份、骨碎补10～25份，狗脊5～20份，贯众4～24份，杜仲10～30份，续断10～40份、延胡索10～40份、干姜20～40份，独活10～30份，川断10～20份，怀牛膝10～40份，白芍5～25份，青风藤6～24份，黄芪20～40份，菟丝子10～20份，鸡血藤20～40份，鹿衔草10～25份，伸筋草15～45份和全蝎5～10份组成的中药组合物；加入中药组合物总重量8～15倍量的水煎煮2～3次，并用挥发油提取器收集得到挥发油部位，合并水煎液在30～70℃减压浓缩得浓缩物；\n[0020] (2)取步骤(1)得到的浓缩物加入乙醇，回流提取2～3次，每次1～2小时，合并乙醇提取物浓缩，得乙醇浓缩物；\n[0021] (3)取步骤(2)得到的乙醇浓缩物上大孔吸附树脂柱，用体积浓度为50％～70％的乙醇洗脱，合并60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥得乙醇精制提取物；\n[0022] (4)水凝胶基质的制备：取黏合剂和骨架材料加入水，放置24小时充分溶胀，在水浴上混合并加入保湿剂，充分搅拌混匀，得透明黏稠的水凝胶基质；\n[0023] (5)取步骤(1)挥发油部位15～45份和步骤(3)乙醇精制提取物30～90份，分散于步骤(4)制备得到的15～45份水凝胶基质中，加入透皮促渗剂8～24份，混合均匀，超声除去气泡，趁热涂布于背衬层上，干燥后覆上防粘层，即得。\n[0024] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂的制备方法，步骤(4)所述的黏合剂为海藻酸钠或羧甲基纤维素；所述的骨架材料为聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮K30；所述的保湿剂为甘油或聚乙二醇400。\n[0025] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂的制备方法，步骤(5)所述的透皮促渗剂为氮酮、丙二醇或薄荷醇中的一种或几种。\n[0026] 本发明采用正交实验对黏合剂、骨架材料和保湿剂的配比进行筛选，以中药组合物挥发油和乙醇提取精制部位化学性质为基准，并以水凝胶基质的经皮渗透性、初黏力和感官指标为考察指标，筛选出上述最佳基质配比。本发明采用水凝胶基质，制备过程中无皮肤刺激性和致敏性，对于水溶性药物，载药量可大大增加，更有利于药物透皮，生物利用度提高，疗效更好。\n[0027] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，所述的黏合剂包括海藻酸钠和羧甲基纤维素及其钠盐。本发明根据中药组合物有效成分的化学性质，对比实验表明：选用羧甲基纤维素钠具有稳定性好，在水中溶解后能形成粘稠状稳定胶体溶液，与其它的水溶性胶或树脂具有良好的配伍性等优点；选用海藻酸钠具有粘度低，粒度细，附壁性好，性能稳定等优点。\n[0028] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，所述的骨架材料包括聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮K30。本发明以中药组合物有效成分的化学性质为基础，对比实验表明，聚乙烯醇易成膜，其膜的机械性能优良，且与亲水性的纤维素有很好的粘结力；另外聚乙烯吡咯烷酮K30也具有成膜性、粘结性和吸湿性好等优点，对有效成分具有优异的溶解性能及生理相容性。\n[0029] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，所述的保湿剂包括甘油和聚乙二醇400。本发明根据对比实验结果表明，当选用甘油和聚乙二醇400时具有与本发明中药组合物的挥发油部位和乙醇精制提取物的有效成分更好的相容性，并具有更好的吸湿性、保润性和软化性。\n[0030] 本发明根据中医药领域和现代分离纯化方法及药理实验跟踪，实验结果表明，本发明中药复方的挥发油部位具有强的消肿，消炎，止疼，活血等功效，取得了很好的技术效果。\n[0031] 作为优选方案，以上所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，所述的透皮促渗剂为氮酮、丙二醇或薄荷醇中的一种或几种。本发明以体外透皮时的经皮吸收速率、单位面积透过量和累积透过百分率为指标，根据大量对比实验筛选出对有效成分具有最佳促透效果的促透剂：氮酮、丙二醇和薄荷醇。\n[0032] 有益效果：本发明提供的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂和现有技术相比具有以下优点：\n[0033] 1、本发明提供的具有防治腰椎间盘突出中药组合物，根据中医理论和腰椎间盘突出的发病机制，通过大量实验筛选中药组成，组方采用活血(如当归，红花，丹参，川芎)，行气，消炎(白芍，青风藤，黄芪，鸡血藤，鹿衔草，全蝎等)，消肿止疼，伸筋活络(骨碎补，狗脊，贯众，杜仲，续断、延胡索，独活，川断，怀牛膝，菟丝子，伸筋草)，促进血液循坏，增加骨骼血流量的中药科学配比而成，实验结果表明本发明提供的中药组合物具有很好的防治腰椎间盘突出的功效，并且通过本发明优选的透皮制剂，可快速透皮吸收，发挥持久的药效。\n[0034] 2、本发明提供的具有防治腰椎间盘突出的作用的透皮贴剂，通过大量实验筛选水凝胶基质、挥发油活性部位、乙醇精制提取物和透皮促渗剂的组成和配备，实验结果表明，所采用的水凝胶基质具有较大的载药量(对挥发油部位和乙醇精制提取物均具有理想的载药量)，制备过程中无皮肤刺激性和致敏性，不容易污染衣物，对于水溶性成分也有很好的促渗性；并且本发明选用的羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮K30、甘油和聚乙二醇400经过正交实验筛选，配比合理，工艺明确，形成的基质外观、黏附性和经皮渗透性均优良；\n[0035] 3、本发明提供的透皮贴剂，含药基质层的挥发油部位和乙醇精制提取物，是在中医药理论和腰椎间盘突出机制研究的基础上，选取合理的配伍组方进行提取，通过现代分离纯化手段进行去粗存精所得，并对其进行成分分析及药效学研究，筛选出挥发油活性部位和乙醇洗脱活性部位，活性成分明确、具有很好的止痛、抗炎、活血化瘀等作用，并且针对其有效成分进行分析，依据有效成分的理化性质及透皮吸收特点，制作经皮给药系统，可促使药物吸收，迅速起效，缓慢释放，生物利用度高，对腰椎间盘突出症状具有良好的改善作用。\n具体实施方式\n[0036] 下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。\n[0037] 实施例1\n[0038] 本发明所述的具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂的制备方法，包括以下步骤：\n[0039] (1)取当归40份、党参30份，红花20份，丹参30份，川芎25份、骨碎补20份，狗脊10份，贯众16份，杜仲20份，续断35份、延胡索20份、干姜40份，独活16份，川断16份，怀牛膝30份，白芍25份，青风藤18份，黄芪40份，菟丝子20份，鸡血藤30份，鹿衔草10份，伸筋草20份和全蝎6份组成的中药组合物；加入中药组合物总重量12倍量的水煎煮3次，并用挥发油提取器收集得到挥发油部位，合并水煎液在60℃减压浓缩得浓缩物；\n[0040] (2)取步骤(1)得到的浓缩物加入乙醇，回流提取3次，每次2小时，合并乙醇提取物浓缩，得乙醇浓缩物；\n[0041] (3)取步骤(2)得到的乙醇浓缩物上大孔吸附树脂柱，用体积浓度为50％～70％的乙醇洗脱，合并60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥得乙醇精制提取物；\n[0042] (4)水凝胶基质的制备：取海藻酸钠5份，聚乙烯吡咯烷酮K3010份，混合后加入20份水，静置24小时，充分溶胀，得凝胶A；取聚乙烯醇5份，加入15份水，静置24小时，充分溶胀后在95℃水浴上溶解，得凝胶B。在70℃水浴上混合凝胶A和凝胶B，搅拌至凝胶混合均匀，加入5份聚乙二醇400，充分搅拌，之后加入步骤(1)中所得挥发油部位和步骤(3)得到的乙醇精制提取物，搅拌至充分混匀，最后加入1份氮酮、3份丙二醇，充分搅拌混匀后即得含药基质层。\n[0043] (5)取步骤(4)所得的含药基质层趁热涂布于背衬层上，干燥后覆上防粘层，切割成适宜的大小，包装即得。\n[0044] 实施例2\n[0045] 一种具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，包括背衬层、含药基质层和防粘层，其制备方法包括以下步骤：\n[0046] (1)取(1)取当归40份、党参30份，红花30份，丹参30份，川芎30份、骨碎补25份，狗脊20份，贯众24份，杜仲30份，续断40份、延胡索40份、干姜40份，独活30份，川断20份，怀牛膝40份，白芍25份，青风藤24份，黄芪40份，菟丝子20份，鸡血藤40份，鹿衔草25份，伸筋草45份和全蝎10份组成的中药组合物；加入中药组合物总重量10倍量的水煎煮2次，并用挥发油提取器收集得到挥发油部位，合并水煎液在70℃减压浓缩得浓缩物；\n[0047] (2)取步骤(1)得到的浓缩物加入乙醇，回流提取2次，每次1小时，合并乙醇提取物浓缩，得乙醇浓缩物；\n[0048] (3)取步骤(2)得到的乙醇浓缩物上大孔吸附树脂柱，用体积浓度为50％～70％的乙醇洗脱，合并60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥得乙醇精制提取物；\n[0049] (4)含药基质层的制备：取羧甲基纤维素10份，聚乙烯醇10份，混合后加入20份水，静置24小时，充分溶胀，得凝胶A；取聚乙烯醇5份，加入15份水，静置24小时，充分溶胀后在\n95℃水浴上溶解，得凝胶B。在70℃水浴上混合凝胶A和凝胶B，搅拌至凝胶混合均匀，加入5份聚甘油，充分搅拌，之后加入步骤(1)中所得挥发油部位和步骤(3)得到的乙醇精制提取物，搅拌至充分混匀，最后加入2份氮酮、2份丙二醇，充分搅拌混匀后即得含药基质层。\n[0050] (3)取步骤(2)所得的含药基质层趁热涂布于背衬层上，干燥后覆上防粘层，切割成适宜的大小，包装即得。\n[0051] 实施例3\n[0052] 一种具有防治腰椎间盘突出的透皮贴剂，包括背衬层、含药基质层和防粘层，其制备方法包括以下步骤：\n[0053] (1)取当归20份、党参15份，红花15份，丹参15份，川芎15份、骨碎补10份，狗脊10份，贯众6份，杜仲10份，续断10份、延胡索10份、干姜20份，独活10份，川断10份，怀牛膝10份，白芍5份，青风藤6份，黄芪20份，菟丝子10份，鸡血藤20份，鹿衔草10份，伸筋草15份和全蝎5份组成的中药组合物；加入中药组合物总重量8倍量的水煎煮3次，并用挥发油提取器收集得到挥发油部位，合并水煎液在65℃减压浓缩得浓缩物；\n[0054] (2)取步骤(1)得到的浓缩物加入乙醇，回流提取2次，每次2小时，合并乙醇提取物浓缩，得乙醇浓缩物；\n[0055] (3)取步骤(2)得到的乙醇浓缩物上大孔吸附树脂柱，用体积浓度为50％～70％的乙醇洗脱，合并60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥得乙醇精制提取物；\n[0056] (4)含药基质层的制备：取羧甲基纤维素10份，聚乙烯醇10份，混合后加入20份水，静置24小时，充分溶胀，得凝胶A；取聚乙烯醇5份，加入15份水，静置24小时，充分溶胀后在\n95℃水浴上溶解，得凝胶B。在70℃水浴上混合凝胶A和凝胶B，搅拌至凝胶混合均匀，加入5份聚甘油，充分搅拌，之后加入步骤(1)中所得挥发油部位和步骤(3)得到的乙醇精制提取物，搅拌至充分混匀，最后加入2份氮酮、2份薄荷醇，充分搅拌混匀后即得含药基质层。\n[0057] (3)取步骤(2)所得的含药基质层趁热涂布于背衬层上，干燥后覆上防粘层，切割成适宜的大小，包装即得。\n[0058] 实施例4活血化瘀试验\n[0059] 1实验材料\n[0060] 1.1实验动物实验用SD雌性大鼠，体重200g±10g，由黑龙江中医药大学实验动物中心(SPF级)提供。\n[0061] 1.2试剂盐酸肾上腺素液，天津药业集团新郑股份有限公司，；枸橼酸钠，天津市生物化学制药厂生产.\n[0062] 1.3仪器L G-R-80电脑血液粘度测试仪，北京世帝科学仪器公司产品。\n[0063] 2实验方法\n[0064] 2.1模型制备正常组常规饲养，模型组、治疗组(贴附本发明实施例1制备得到的贴剂)大鼠置于0℃～1℃冰水中5min，每日1次，连续七天。治疗组于造模的第1天开始，贴剂发明实施例1制备得到的贴剂，连用7天，正常组、模型组给予生理盐水同样方法处理。于第8天皮下注射0.1％肾上腺素0.1ml/100g，共2次，两次间隔时间4h。之后停食，于次晨采用全自动流变快测仪测定血流变学指标；采用放射免疫的方法测定血清中激素水平。\n[0065] 2.2动物分组选用健康清洁级SD雌性大鼠50只，鼠龄3个月，体重200g±11g。适应性饲养1周后，按随机数字表法将其分为5组，每组10只，即正常对照组(正常组)、模型对照组(模型组)、本发明实施例1贴剂低剂量组(0.5g/kg)、本发明实施例1贴剂中剂量组(1.0g/kg)和本发明实施例1贴剂大剂量组(3.0g/kg)。正常对照组给予生理盐水，贴剂大、中、小剂量组涂于腹部去毛处，连续用药7天。按上述方法复制寒凝血瘀大鼠模型。于末次用药后\n60min，颈动脉取血，测定血液流变学指标。\n[0066] 3实验结果与分析\n[0067] 由表1可见，与对照组相比，模型组的全血粘度明显升高(P<0.05)，表明采用冰水浴及注射肾上腺素造成了大鼠急性血瘀模型。与模型组相比，本发明实施例1制备得到的外用贴剂的高、中剂量组在高、中、低切率均明显降低全血粘度(P<0.01或P<0.05)。贴剂低量组仅在低切率抑制全血粘度升高(P<0.05)，显示出了很好的活血功效。\n[0068] 表1 中药组合物透皮贴剂对寒凝血瘀模型大鼠血液流变学的影响\n[0069]\n[0070] 与模型组相比较，*P＜0.05；**P＜0.01\n[0071] 由以上表的实验结果表明，本发明提供的中药组合物透皮贴剂具有良好的活血化瘀，增加骨骼血量量，发挥很好的活血止疼功效。\n[0072] 实施例5小鼠热板致痛实验\n[0073] 1.实验方法\n[0074] ICR小鼠，50只，体重22～26克，随机分为空白对照组、本发明实施例1制备得到的透皮贴剂低剂量组(0.5g/kg)、中剂量组(1.0g/kg)和大剂量组(2.0g/kg)，每组10只。以热板刺激法评价中药组合物透皮贴剂的镇痛效应。实验前用脱毛剂在小鼠腹部脱毛。24小时后在小鼠腹部分别贴上空白透皮贴剂和中药组合物透皮贴剂，并用胶带纸进行固定，防止脱落。每天给药1次，连续2天，于末次给药后30分钟，1小时，2小时，4小时，10小时测定痛阈时间，比较组间差异。\n[0075] 2.实验结果\n[0076] 透皮贴剂组在给药后对热板刺激所致小鼠痛阈时间较给药前痛阈时间有延长作用，且10小时后依然有明显的镇痛作用，与空白对照组相比，能显著提高小鼠痛阈时间。具体实验结果如表2。\n[0077] 表2 中药组合物透皮贴剂对小鼠热板实验的镇痛作用(n＝10)\n[0078]\n[0079] 与给药前比较，**P<0.01，*P<0.05；与生理盐水组比较，△△P<0.01，△P<0.05。\n[0080] 由以上表2的实验结果表明，本发明提供的中药组合物透皮贴剂具有很好的镇痛作用，可以明显提高痛阈值，且持续时间较长，可发挥持续镇痛的功效。\n[0081] 实施例6抗炎试验\n[0082] 1.实验材料\n[0083] 仪器Drict-Q5超纯水机(Millipore)；旋转蒸发器(南京金正教学仪器有限公司)；\n电子天平(Sartoris BP211D)；显微镜(型号OLMPUS CKX31)；酶标仪(型号680，BIO-RAD)；酶标仪(DENLEYDRAGONWellscan MK3，Thermo)；洗板机(Wellwash4MK2，Thermo)；电子天平(型号JA2003N，上海精密科学仪器有限公司)；离心机(Anke LXJ-IIB)；恒温水浴箱(HH-S金坛市医疗仪器厂)；漩涡混合器(XW-80A，上海青浦沪西仪器厂)。\n[0084] 试剂与样品Freund’s完全佐剂(100M8717CAS9007-81-2，sigma)；聚山梨酯80(上海申宇医药化工有限公司)；无水乙醇(无锡市亚盛化工有限公司)；大鼠IL-2ELISA试剂盒、大鼠PGE2ELISA试剂盒、大鼠TNFαELISA试剂盒(均购自于上海西唐生物科技有限公司)；吲哚美辛(上海辛帕斯制药有限公司，批号：H31020148)；戊巴比妥钠(德国分装，批号：\nWS20080810)；枸橼酸钠；超纯水为自制；样品均为自制。\n[0085] 动物：清洁级SD大鼠。饲养条件：清洁级动物实验室，室温23-25℃，相对湿度40％-\n70％，每天适当通风换气15次。\n[0086] 2.实验方法\n[0087] 2.1大鼠佐剂型关节炎模型的建立\n[0088] SD大鼠72只，雌雄各半，体重在180-220g，测各鼠左、右后足跖体积，按体质量随机分出8只作为空白对照组，其余64只按文献方法进行造模。常规方法对SD大鼠右后足跖底部皮肤进行消毒，用微量注射器皮内注射Freund’s完全佐剂0.1mL/只进行致炎。造模后第13天，测量每只大鼠左右足跖容积，模型组足跖容积与空白组比较有显著差异，并观察发现足跖红肿明显提示造模成功。\n[0089] 2.2实验分组\n[0090] 实验按大鼠体质量和足肿胀程度随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(Indomethacin,IMT)、本发明实施例2制备得到的透皮贴剂低剂量组(0.5g/kg)、中剂量组(1.0g/kg)和大剂量组(2.0g/kg)。\n[0091] 2.3大鼠一般状态的观察及关节肿胀度的评定\n[0092] 造模前及给药前后观察大鼠体毛色泽及活动状况，食量的增加变化及关节红肿情况，并于造模前、造模后第13d、造模后第20d、造模后第24d、造模后第27d、造模后第30d测量大鼠的体重(g)和左、右跖的容积(mL)。\n[0093] 体重：用电子称称量大鼠体重；足跖容积：用自制足跖测量装置测各组大鼠左右后跖的容积，比较给药后各组大鼠足跖肿胀程度的变化。\n[0094] 2.4大鼠血浆的采集及处理\n[0095] 用10％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，仰卧位固定，颈动脉取血，用3.8％枸橼酸钠(血与抗凝剂体积比为9:1)抗凝收集全血于10mL的离心管中，用低速离心机以3000r/min转速离心10min，吸取上清液，-20℃下冰冻保存，检测血浆中MDA、PGE2、IL-2。\n[0096] 丙二醛(MDA)的测定方法\n[0097] 实验按照丙二醛(MDA)测定试剂盒说明书的操作方法，测定MDA的释放量。MDA试剂盒测试原理：过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)可与硫代巴比妥酸(TBA)缩合，形成红色的产物，在532nm处有最大吸收峰。\n[0098] 按试剂盒说明配置试剂，取上述所得血清、组织上清液，每个测试样品取八管，每管50μL，空白管和标准管各取八管，每管50μL，每管分别加入混合试剂1000μL，用涡旋混匀器混匀，试管口用保鲜膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴(或用锅开盖煮沸)40分钟，取出后流水冷却，然后3500-4000r/min，离心10分钟。取上清200μL于96孔板中，532nm处测各管的吸光度值，按下述公式计算：\n[0099] (1)血清中MDA含量的计算公式：\n[0100]\n[0101] (2)组织中NO含量的计算公式：\n[0102]\n[0103] 白介素-2(IL-2)、PGE2、TNFα的测定方法\n[0104] 实验采用双抗夹心ABC-ELISA法，用抗大鼠IL-2单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的IL-2与单抗结合，加入生物素化得抗大鼠IL-2，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，IL-2浓度与OD值成正比，通过绘制标准曲线求出标本中IL-2的浓度。\nPGE2、TNFα含量的检测原理与IL-2的检测原理相似。\n[0105] 按试剂盒的要求配置标准品、10×标本稀释液、洗涤液。取出96孔酶标板，每孔依次加入标准品和待测样品100μL，将反应板充分混匀后置37℃孵育120分钟。用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干后，每孔中加入第一抗体工作液100μL，将反应板充分混匀后37℃孵育60分钟，洗板，印干后每孔加底物工作液100μL，将反应板置暗处反应15分钟。\n每孔再加入100μL的终止液混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。\n[0106] 所有OD值都应减除空白值后再行计算。以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、\n31.2、0pg/mL为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。根据样品OD值在该曲线图上查出相应的IL-2、PGE2、TNFα的含量。\n[0107] 3实验结果\n[0108] 3.1致炎后各组大鼠不同时间体重的变化\n[0109] 给药前各组大鼠体重与模型组体重比较，正常组体重与模型组体重有显著性差异(P≤0.05)，其余各组与模型组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。\n[0110] 3.2致炎后各组大鼠不同时间右足跖肿胀程度的影响\n[0111] 致炎后各组大鼠不同时间右足跖肿胀程度的影响，表3可知，造模前，正常组、给药组大鼠右足跖容积均与模型组无显著性差异(P＞0.05)；造模后第13d，正常组与模型组比较有极显著性差异(P＜0.001)，其余各组与模型组比较均无显著性差异(P＞0.05)；造模后第20d，正常组、IMT组、药物组与模型组比较有极显著性差异(P＜0.001)，本发明实施例2制备得到的透皮贴剂高、中剂量组与模型组比较有非常显著性差异(P＜0.01)，低剂量组与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)；造模后第24d，本发明实施例2制备得到的透皮贴剂高、中剂量组与模型组比较有非常显著性差异(P＜0.01)，其余各组与模型组比较均有显著性差异(P＜0.01)；造模后第27d、第30d各组大鼠右足跖容积与模型组比较均匀极显著性差异(P＜0.01)，本发明提供的的透皮贴剂显示出了很好的消肿功效。\n[0112] 表3 大鼠右足跖肿胀程度的变化\n[0113]\n[0114] 注：与模型组比较，*P＜0.05表示有显著性差异，**P＜0.01表示有非常显著性差异，***P＜0.001表示有极显著性差异。\n[0115] 3.3对各组大鼠血浆中MDA、IL-2、PGE2的影响\n[0116] 由表4可知，正常组大鼠血浆中MDA含量与模型组比较有非常显著差异(P＜0.01)，本发明制备得到的透皮贴剂高、中、低剂量组与模型组比较有非常显著差异(P＜0.01)；透皮贴剂高、中、低剂量组大鼠血浆中IL-2、PGE2水平，与模型组比较均有极显著差异(P＜\n0.001)。结果表明本发明制备得到的透皮贴剂具有显著的抑制佐剂性关节炎大鼠血浆中MAD、IL-2、PGE2水平，具有很好的抗炎效果。\n[0117] 表4 对大鼠血浆中MDA、IL-2、PGE2含量的影响\n[0118]\n[0119] 注：与模型组比较，*P＜0.05表示有显著性差异，**P＜0.01表示有非常显著性差异，***P＜0.001表示有极显著性差异。\n[0120] 实施例7皮肤刺激性实验\n[0121] 1材料\n[0122] 1.1动物健康白色家兔，雌性，体重(2.0士0.5)kg，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。\n[0123] 1.2药物实施例1和实施例2制备得到的中药组合物透皮贴剂\n[0124] 2试验方法\n[0125] 2.1一次给药皮肤刺激试验\n[0126] 取健康家兔8只，随机分为2组，每组4只。给药前24h，在家兔背部两侧4个区脱毛\n3cm×3cm。其中1组于给药前用消毒过的9号针头在4个脱毛区皮肤上划井字形，均以损伤角质层、表皮出血为度，作为损伤皮肤组。另1组为完整皮肤组。每只家兔背部皮肤分四区：溶剂对照区、透皮贴剂低剂量区、透皮贴剂中剂量区及透皮贴剂高剂量区。将药分别涂于相应区域。一次给药24h后用温水去除残留受试物，观察去除受试物后1h、24h、48h和72h至一周涂抹部位有无红斑和水肿等情况。\n[0127] 2.2多次给药皮肤刺激试验试验方法\n[0128] 同一次给药皮肤刺激试验，不同之处在于1次给药24h后，连续给药，持续1周。1周后，去除残留药物，lh、24h、48h、72h至1周观察有无红斑和水肿等情况，以及上述变化的恢复情况和时间。\n[0129] 3结果与分析\n[0130] 3.1一次给药皮肤刺激试验\n[0131] 通过对完整皮肤和破损皮肤各时间点进行观察，无水肿现象。去除药物1h后，透皮贴剂的中、高剂量组破损皮肤出现轻微红斑，积分分别为1.25和0.75，产生轻微刺激，对完整皮肤无刺激；低剂量组对完整皮肤和破损皮肤刺激积分均低于0.5，无刺激性。去除药物1天后，各剂量组对完整皮肤和破损皮肤刺激积分均低于0.5，无刺激性。7天后8只家兔完全恢复。\n[0132] 3.2多次给药皮肤刺激试验\n[0133] 经连续7天给药，透皮贴剂高剂量组对破损皮肤有轻微刺激，无水肿，给药第7天后恢复正常。中剂量组对破损皮肤在给药前3天有轻微刺激，7天恢复正常，其他实验组积分均小于0.5，无刺激。\n[0134] 由以上实验结果表明，本发明提供的透皮贴剂对原发性腰椎间盘突出具有很好的预防和治疗作用，并且临床使用过程中，生物利用度高，对肝脏等器官损伤小，使用过程中对皮肤刺激性小，患者易接受，可开发成为新的抗腰椎间盘突出的外用新制剂。\n[0135] 以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。