一种通过敲除黄素还原酶提高L-精氨酸产量的方法

发明专利有效专利

申请号：
CN201610592588.3
IPC分类号：C12N1/21;C12P13/10;C12R1/15
申请日期：
2016-07-26
申请人：
江南大学

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专利名称	一种通过敲除黄素还原酶提高L-精氨酸产量的方法
申请号	CN201610592588.3	申请日期	2016-07-26
法律状态	授权	申报国家	中国
公开/公告日	2016-12-07	公开/公告号	CN106190942A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N1/21 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N1/00 微生物本身，如原生动物；及其组合物（含有由原生动物、细菌或病毒得到的材料的药物的制备入A61K35/66；从藻类材料制备药物的入A61K36/02；从真菌中材料制备药物的入A61K36/06；药用细菌的抗原或抗体组合物的制备，如细菌菌苗入A61K39/00）；繁殖、维持或保藏微生物或其组合物的方法；制备或分离含有一种微生物的组合物的方法；及其培养基〔3，2006.01〕 C12N1/20 细菌；其培养基〔3〕 C12N1/21 引入外来遗传物质修饰的〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;/;2;1;;;C;1;2;P;1;3;/;1;0;;;C;1;2;R;1;/;1;5查看分类表>
申请人	江南大学	申请人地址	江苏省无锡市蠡湖大道1800号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	江南大学	当前权利人	江南大学
发明人	饶志明;满在伟;徐美娟;杨套伟;张显
代理机构	哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司	代理人	耿晓岳

摘要

本发明公开了一种通过敲除黄素还原酶提高L‑精氨酸产量的方法，属于微生物发酵生产氨基酸技术领域。本发明通过将钝齿棒杆菌SDNN403中编码假定NADPH‑依赖型FMN还原酶基因frd1和frd2在E.coliBL21中过表达并纯化出目标蛋白Frd181和Frd188，对其功能进行鉴定，结果表明Frd181和Frd188蛋白均为产H2O2NAD(P)H‑依赖型黄素还原酶。以钝齿棒杆菌SDNN403基因组为模板，通过重叠延伸PCR获取frd1和frd2基因缺失片段，并连接pK18mobsacB，得到敲除质粒pK18mobsacB‑Δfrd1和pK18mobsacB‑Δfrd2，通过电击转化钝齿棒杆菌SDNN403，二次筛选得到重组菌株403Δfrd1和403Δfrd2。摇瓶发酵发现，通过敲除frd1和frd2基因，L‑精氨酸产量明显提高。

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