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一种利用海洋细菌交替假单胞菌MB004产的胶原蛋白酶基因的克隆表达方法

发明专利无效专利
  • 申请号:
    CN201410030498.6
  • IPC分类号:C12N15/57;C12N15/70;C12N9/52
  • 申请日期:
    2014-01-23
  • 申请人:
    浙江省海洋开发研究院;宁波大学
著录项信息
专利名称一种利用海洋细菌交替假单胞菌MB004产的胶原蛋白酶基因的克隆表达方法
申请号CN201410030498.6申请日期2014-01-23
法律状态撤回申报国家中国
公开/公告日2014-05-07公开/公告号CN103773787A
优先权暂无优先权号暂无
主分类号C12N15/57IPC分类号C;1;2;N;1;5;/;5;7;;;C;1;2;N;1;5;/;7;0;;;C;1;2;N;9;/;5;2查看分类表>
申请人浙江省海洋开发研究院;宁波大学申请人地址
浙江省舟山市定海区临城街道体育路10号 变更 专利地址、主体等相关变化,请及时变更,防止失效
权利人浙江省海洋开发研究院,宁波大学当前权利人浙江省海洋开发研究院,宁波大学
发明人周宇芳;朱鹏;相兴伟;杨会成;肖金星;徐珊
代理机构宁波诚源专利事务所有限公司代理人袁忠卫
摘要
本发明涉及一种利用海洋细菌交替假单胞菌MB004产的胶原蛋白酶基因的克隆表达方法,以交替假单胞菌MB004基因组DNA为模板,用PCR方法克隆MB004的编码基因,将该基因重组到表达质粒中,获得重组质粒,将重组质粒线性化,以原生质体转化的方法整合到大肠杆菌感受态细胞中,获得整合了质粒的重组表达菌株,接种培养基中培养诱导表达重组蛋白,表达的蛋白经离心后收集,浓缩,经IPTG诱导表达、亲和层析纯化获得重组蛋白纯化产物。本发明从海洋细菌中筛选出能产生胶原蛋白酶的细菌MB004,从而获得其胶原蛋白酶基因,胶原蛋白酶PNJC的酶活力为160.34U/mg,达到胶原蛋白酶标准品的70.48%。

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