抗独特型单克隆抗体,其在恶性肿瘤主动免疫治疗中的应用以及含有它们的组合物

1.对神经节苷脂N-乙醇酰部分的鼠科抗体P3特异的γ型抗独特型单 克隆抗体，所述P3抗体是以保藏号ECACC 94113026保藏的杂交瘤 产生的，其中所述γ型抗独特型单克隆抗体是由杂交细胞系ECACC 97112901产生的γ型抗独特型单克隆抗体。
2.产生权利要求1的抗独特型单克隆抗体的杂交细胞系ECACC 97112901。
3.含有有效量的权利要求1的单克隆抗体和稀释剂、佐剂或载体的药物 组合物。
4.权利要求1的单克隆抗体在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

技术领域\n广义上，本发明涉及抗独特型单克隆抗体及其作为免疫调节剂的用 途。更具体地，本发明涉及抗与N-乙醇酰神经节苷脂及癌细胞表达的抗 原起反应的鼠科单克隆抗体的鼠科单克隆抗体；及其对肿瘤生长的抑制 效果。\n背景\n治疗癌症的策略之一是采用主动免疫治疗，即一种以激活宿主免疫 系统抗肿瘤的天然潜能为目标的治疗方式。\n自从Niels Jerne在1974(Jerne，N.K.1974.免疫学年报(Ann Immunol)125C，373-389)提出独特型网络理论后，在有效抗癌治疗的 研究中打开了崭新的可能性。Jerne的理论第一次提出免疫系统是一个抗 体的网络，抗体能通过其可变区或独特型(Id)与其它抗体以及与大量 天然表位相互作用。这套复杂的独特型-抗独特型相互作用起到调节对抗 原的免疫应答的作用。那些对初始抗原应答的抗体称为Ab1，其自身作为 抗原可引发产生第二套称为抗独特型抗体或Ab2的抗体，而该抗体又可 被称为抗抗独特型(Ab1’或Ab3)的其它抗体调节。Jerne的最初理论不断 地被修正，而且已经报道Ab2与带有Ab1的淋巴细胞相互作用并不必然 导致免疫应答的抑制，而可能会刺激该应答。此外，Jerne的理论局限于 B淋巴细胞和抗体，而现在已清楚T细胞通过T细胞受体独特型在免疫调 节中起重要作用(Teitelbaum，D.等，1984免疫学杂志(J.Immunol.)132， 1282-1285；Zanetti，M.等(1986)免疫学杂志137，3140-3146；Powell， J.等(1988)140，3266-3272；Baskin，J.G.等(1990)免疫学杂志 145，202-208；Furuyama，A.等(1992)抗癌研究(Anticancer Res)12， 27-32；Raychaudhuri，S.等.免疫学杂志131，271-278；Raychaudhuri 等(1987)免疫学杂志139，3902-3910；Durrant等(1994)癌症研究 (Cancer Res.)54，4837-4840)。\n免疫学上定义的独特型能与一种以上识别给定独特型的独特型决定 簇或独特位的抗独特型起反应。因此，由于一个特定的Ab1表达多个独 特位，当用该Ab1免疫同系动物时会获得一个抗独特型抗体的异质性群 体。\n抗独特型抗体分类的焦点是其结合于抗原结合位点内还是该独特型 的某一其它区域。如果Ab2与Ab1的结合可被相关抗原抑制而且该Ab2 能够诱导该Ab1同样特异性的抗体应答，该Ab2就模拟了天然抗原，定 为Ab2β类；这类Ab2被称为内影象抗独特型，可充当抗原的替代品。不 被抗原抑制的抗独特型定为Ab2α类，这些Ab2与结构上跟抗原结合位点 无关的Ab1独特位相互作用。1984年Bona和Khler提出了由于空间干 扰受到抗原抑制的第三类抗独特型抗体(Ab2γ)，这类抗独特型与结构 上跟抗原结合位点相关的独特位作用，但不能模拟Ab1所识别的抗原表 位(Bona和Khler(1984)抗独特型抗体和内影象(Anti-idiotypic antibodies and internal image)。单克隆抗独特型抗体：受体结构和 功能的探针(Monoclonal and anti-idiotypic antibodies：Probes for receptor structure and function)，Venter JC，Frasser CM，Lindstrom J(编)，NY，Alan R.Liss，pp 141-149，1984)。\n根据Jerne的理论已发展了两种主要寻找大量抗原(包括肿瘤相关 抗原)的疫苗的方法。第一种方法采用Ab2β，以不同分子环境中的表位 呈递为基础。含有该类抗独特型抗体的疫苗已能诱导抗病毒、细菌和寄 生虫的保护性应答(Kennedy等(1986)232，220-223；McNamara等(1985) 科学(Science)226，1325-1326)。而且，Ab2β已用于诱导对肿瘤相关 抗原的免疫应答并在动物模型和临床试验中获得阳性结果(Raychauhuri 等(1986)免疫学杂志137，1743-1749；Raychauhuri等(1987)免疫学 杂志139，3902-3910；Bhattacharya-Chatterjee等(1987)免疫学 杂志139，1354-1360；Bhattacharya-Chatterjee等(1988)免疫学杂 志141，1398-1403；Herlyn，D.等(1989)国际免疫学回顾(Intern. Rev.Immunol.)4，347-357；Chen，Z-J等(1990)细胞免疫、免疫治 疗和癌症(Cell Imm.Immunother.Cancer)351-357；Herlyn，D.等(1991) In Vivo 5，615-624；Furuya等(1992)抗癌研究12，27-32；Mittelman， A.等(1992)美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)89， 466-470；Durrant，LG.等(1994)癌症研究(Cancer Res.)54，4837-4840； Mittelman，A.等(1994)癌症研究54，415-421；Schmitt，H.等(1994) 杂交瘤(Hybridoma)13，389-396；Chakrobarty，M.等(1995)免疫治疗 杂志(J.Immunother.)18，95-103；Chakrobarty，M.等(1995)癌症研 究55，1525-1530；Foon，K.A.等(1995)临床肿瘤研究(Clin.Cancer Res.)1，1285-1294；Herlyn，D.等(1995)杂交瘤14，159-166； Sclebusch，H.等(1995)杂交瘤14，167-174；Herlyn，D.等(1996) 癌症免疫和免疫治疗(Cancer Immunol.Immunother.)43，65-76)。然 而，已证明Ab2的β特性并不足于预测能诱导该Ab2的生物学效应 (Raychauhuri等(1986)免疫学杂志137，1743-1749；Raychauhuri等 (1987)免疫学杂志139，231-278)；Maruyama等(1996)国际癌症杂志 (Int.J.Cancer)65，547-553)。\n第二种方法的依据是通过调节性独特位的网络操作，该调节性独特 位与抗原结合无关但包含与其它抗体或T细胞共有的独特位。积累的证 据表明这些抗Id抗体也能产生免疫应答和保护性效应(Paul，W.E.和 Bona，C.(1982)现代免疫学(Immunology Today)3，230-234；McNamara M.K.等(1985)科学226，1325-1326；Khler y cols(1992)第八 届布达佩斯国际免疫学大会会刊(Proc.8th Inter.Cong Immunol. Budapest)，第619页)。\n神经节苷脂是含有唾液酸的鞘糖脂，在大多数哺乳动物细胞膜上表 达。尽管这些抗原存在于正常组织中，但在恶性细胞表面可发现更大数 量的该抗原并且其表现出一种不同的结构和构象(Hakomori，S.(1985) 癌症研究45，2405-2415；Miraldi，F.(1989)第19届核医学研讨会 (Seminars in Nuclear Medicine XIX)，282-294；Hamilton等(1993) 国际癌症杂志53，1-81)。\n尽管神经节苷脂是有用的免疫应答目标，但由于其碳水化合物性质 和自身抗原情况，其免疫原性极弱(Livingston，P.等，(1995)第6届 癌症生物学研讨会(Seminars in Cancer Biology 6)，357-366)。\n唾液酸的N-乙醇酰基变体在大多数哺乳动物正常组织上表达；但在 人的正常组织中极难检测到其存在(Watarai，S.等(1995)生物化学杂 志(J.Biochem.)117，1062-1069)。另一方面，已报导这些抗原存在于 结肠癌、黑素瘤、成视网膜细胞瘤和乳腺癌等中(Higachi，H等(1984) 日本癌症研究杂志(癌症)(Jpn J Cancer Res(Gann))75，1025-1029； Higachi，H等(1985)癌症研究45，3796-3802；Hirabayashi，I.等 (1987)日本癌症研究杂志(癌症)78，1614-1620；Higachi，H.等(1988) 日本癌症研究杂志(癌症)79，952-956；Miyake，M.等(1990)癌症 65，499-505；Devine，P.L.等(1991)癌症研究51，5826-5386；Vázquez， A.M.等(1995)杂交瘤14，551-556；Marquina，G.等(1996)癌症研究 56，5165-5171)。\n用含神经节苷脂的疫苗进行免疫导致黑素瘤病人产生抗神经节苷脂 抗体，并延长了其生存(Livingston，P.等(1987)美国科学院院刊84， 2911-2915；Livingston，P.等(1989)癌症研究49，7045-7050； Livingston，P.(1995)免疫学综述(Immunological Reviews)145， 147-166)。然而，抗原的弱免疫原性使得抗独特型抗体的使用成为在该 抗原模型中进行主动免疫治疗的一个具有吸引力的替代方法。鼠科抗独 特型单克隆抗体(4C10)是抗识别人黑素瘤GM3的人IgM单克隆抗体 (L612)的。用与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联的该抗独特型单克隆抗体免 疫小鼠，该小鼠血清与抗原阳性黑素瘤细胞系和纯化的GM3发生强烈反 应，这说明含有GM3内影象的该抗独特型单克隆抗体(Ab2β)可作为主 动特异免疫治疗黑素瘤病人的有效工具(Yamamoto，S.等(1990)J. Natl.Cancer.Inst.82，1757-1760；Irie，R.F.美国专利5,208,146)。 对该抗独特型单克隆抗体的VL和VH进行了克隆、测序并将其表达成嵌 合性鼠/人IgG1抗体(Hastings，A.等(1992)癌症研究52，1681-1686)。\n而且，抗人单克隆抗体L612产生的α型抗独特型单克隆抗体在免疫 诊断过程中是有用的(Irie，R.F.美国专利5,208,146)。\nBEC-2单克隆抗体是一种抗识别GD3神经节苷脂的鼠科单克隆抗体 (mAbR24)的鼠科抗独特型单克隆抗体，其能模拟GD3并且尽管正常兔 组织表达GD3，其也能诱导抗该神经节苷脂的抗体(Chapman，P.B.和 Houghton，A.N.(1991)88，186-192)。初步研究结果显示BGE-2加BGG 佐剂显著地增强了患有小细胞肺癌的病人的存活(Scrip Magazine(1996) pp 56-59；第33届美国临床肿瘤学协会年会(33rd American Society of Clinical Oncology annual meeting)(1997))。\n用特异抗GD2的鼠科单克隆抗体(3F8)免疫大鼠，产生抗独特型单 克隆抗体，当在小鼠中作为免疫原测试时可激活与神经节苷脂GD3反应 的抗体。这说明该抗独特型单克隆抗体可能对构建疫苗是有用的(Cheung， N-K.V.等(1993)国际癌症杂志54，499-505)。\n此外，采用特异抗GD2的鼠科单克隆抗体14G2治疗的病人的外周血 单核细胞生产了人抗独特型单克隆抗体。以该人抗独特型单克隆抗体免 疫兔子，诱导了抗GD2抗体以及对抗原阳性肿瘤细胞的DTH反应。这说 明该抗体可潜在地作为人抗独特型疫苗用于患恶性黑素瘤的病人(Saleh， M.N.等(1993)免疫学杂志151，3390-3398)。\n题为“神经节苷脂疫苗：作为抗原替代物的抗独特型单克隆抗体” 的文章(Iglesias，E等，Biotecnología Applicada，Vol.14，No.1，1997， p50，XP-00291466)描述了七种与P3 MAb强烈反应但未见与试验的其他 抗神经节苷脂IgM Mab反应的IgG1抗独特型单克隆抗体(MAb)。这七种 抗独特型MAb在1-10μg/ml的浓度下具有阻断P3与NGcGM3结合的能 力。这些抗独特型中的5种能激发抗NGcGM3的体液应答，被归类于Ab2 β和Ab2α抗独特型单克隆抗体。\n另外，Pérez等(“神经节苷脂对独特型网络揭示了什么”， Biotecnologia Applícada，Vol.14，No.1，1997，P42，XP-00291467) 还指出抗神经节苷脂抗体P3在Bal b/c小鼠中激发强IgG抗独特型应答 (Ab2，滴度1/10000至1/50000)。所获得的这些特异性Ab2克隆大部分 能够阻断P3MAb与GM3(NeuGc)的结合。如上所述相同，这些抗体能够 诱导对神经节苷脂的天然自身抗体应答，也被归为Ab2β抗独特型抗体。\n从上述背景可明显看出，迄今没有生产出抗识别N-乙醇酰神经节苷 脂的单克隆抗体，并能够在动物模型中起抗肿瘤作用的γ型抗独特型单 克隆抗体。\n本发明的公开\n广义上，本发明涉及抗独特型(抗-Id)单克隆抗体(mAbs)及其作 为免疫调节剂在癌症治疗中的应用。更具体地，本发明涉及抗与N-乙醇 酰神经节苷脂及癌细胞表达的抗原起反应的鼠科单克隆抗体的鼠科γ型 抗Id单克隆抗体。\n依据本发明，本发明的目的是提供一种新的抗-Id mAb，其可在异种 模型中诱导优势的抗独特型应答以及可在带有恶性肿瘤的小鼠或其它动 物物种中产生保护性效应。本发明还提供产生该抗-Id mAb的杂交细胞 系，其依据布达佩斯条约于1997年11月29日保藏在英国的欧洲细胞培 养物保藏中心(ECACC)，保藏号97112901。\n本发明的详细描述\n获得抗神经节苷脂mAbs的抗独特型(Ab2)抗体应答的免疫过程\n在有或没有佐剂以及选择性地偶联转运蛋白的情况下，以25-200ug 剂量的纯化抗神经节苷脂mAbs免疫小鼠和其它哺乳动物物种。动物接受 2-6个剂量的抗神经节苷脂mAbs，每剂间隔14到30天。可能的免疫途 径有腹膜内、皮下、静脉内或其组合。\n在免疫前和免疫期间采取动物血清样本，以任何已知的免疫测定方 法测定Ab2抗体的应答水平。动物血清稀释物与用作免疫原的抗神经节 苷脂mAbs或本免疫方法未使用的其它抗神经节苷脂mAbs一起孵育。\n并且进行实验以确定免疫动物血清阻断作为免疫原的抗神经节苷脂 mAbs结合其抗原的能力。\n抗抗神经节苷脂mAbs的抗独特型mAb的产生\n在获得产生抗体的细胞前三天，以作为免疫原的mAb再免疫具有高 Ab2抗体效价的小鼠。尽管优选采用脾细胞；也可以选择其它产生抗体的 细胞。\n这些细胞与骨髓瘤细胞相融合，使杂交细胞或杂交瘤具有了在体外 和体内繁殖的性质。细胞融合可用任何已知方法进行。\n杂交瘤产生的抗体用免疫测定法测定，优选免疫-酶实验，其中杂交 瘤上清液与作为免疫原的mAb和所述免疫中未用的其它抗神经节苷脂 mAbs一起孵育。\n通过将该上清液与足量抗神经节苷脂mAb稀释液一起孵育后再将所 述抗体与其抗原一起孵育，以测定杂交瘤上清液阻断作为免疫原的抗神 经节苷脂mAb结合其抗原的能力。\n选择的杂交瘤至少克隆两次，然后按如上所述在体外和体内生产形 成的mAbs。\n所获的抗独特型mAbs识别抗神经节苷脂的mAbs并且具有阻断该抗 神经节苷脂mAb结合其抗原的能力。\n在异种模型中获得对Ab2mAbs的抗-抗独特型(Ab3)抗体应答的免疫过 程\n用抗独特型mAbs免疫猴或其它异种物种。这些mAbs在用作免疫原 之前可任选性地偶联转运蛋白，可与或不与佐剂一起施用。\n每只动物接受2-8剂每剂250ug到2mg的抗独特型mAb，每剂间隔7 到30天。\n免疫途径可采用皮内、皮下、静脉内、腹膜内或其组合。\n在免疫前或免疫期间采取动物血液样本，用任何已知的免疫测定方 法来监测Ab3抗体应答的存在。\n将抗神经节苷脂mAbs免疫所产生的抗独特型mAbs施用于动物，能 诱导抗作为免疫原的该抗独特型mAb的独特型的优势抗体应答，而不诱 导抗原特异性抗体应答。\n抗独特型mAbs治疗的抗肿瘤效应\n施用有效量的抗独特型mAbs，有或没有佐剂，使用前任选性地与转 运蛋白偶联。术语有效量应理解为获得抗肿瘤效应所需的抗独特型mAb 的量。在向动物实验性施用恶性细胞之前或之后，采用抗独特型mAb进 行治疗。\n动物接受1-5剂每剂10-200ug的抗独特型mAbs，每剂间隔7-30天。\n免疫途径可采用皮内、腹腔内、皮下、静脉内或其组合。\n用抗独特型mAb治疗后，比较用相同方式处理和维持的对照组与抗 独特型mAb治疗组的肿瘤发生率和动物存活率。\n抗独特型mAb的治疗显著增加了肿瘤动物的存活率并减少了肺转移 瘤。\n实施例1：在同系模型中生产抗P3 mAb的抗独特型抗体。\n以两剂每剂50ug的与KLH偶联的纯化P3 mAb(抗含N-乙醇酰的神 经节苷脂，ECACC保藏号94113026，欧洲专利申请EP 657471 Al；Vázquez， AM.等，杂交瘤(1995)14，551-556)免疫6-8周龄Balb/c雌鼠，两剂 间隔14天。\n最后一次免疫后三天，摘取含有高血清水平抗P3 mAb Ab2抗体的小 鼠的脾脏，通过不锈钢筛挤压该组织或灌注脾脏以制备细胞悬液。\n细胞融合采用稍作修改的Khler和Milstein所述方法(1975，自 然(Nature)(Lond)256，495-497)。\n鼠脾细胞与非分泌性鼠骨髓瘤P3/X63 Ag8 6.5.3的细胞(可获自 ECACC，编号85011420)按10∶1比例在0.5ml融合培养液(含42％聚乙 二醇的RPMI-1640培养液)中融合。融合后细胞在HAT(次黄嘌呤、氨基 蝶呤和胸腺嘧啶)选择培养液中于5％CO2潮湿空气中37℃培养。\n融合后10到15天通过ELISA鉴定杂交瘤上清液中抗体的存在。将 ELISA板(高结合性COSTAR)在碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液pH9.8中与 10ug/ml P3 mAb和其它IgM抗神经节苷脂mAb于4℃孵育过夜。用含有 0.05％Tween 20的PBS洗涤后，该板用含有1％BSA的同样缓冲液37℃封 闭1小时。\n重复洗涤步骤，然后每孔加入50ul上清液。孵育2小时后，再次洗 涤该板并加入碱性磷酸酶与羊抗鼠IgG Fc区结合物抗血清。洗涤后每孔 加入100ul底物溶液(用二乙醇胺缓冲液pH9.8稀释的1mg/ml对硝基苯 磷酸)。在ELISA读数器中测定405nm的吸光度。\n此外，为测定上清液阻断P3 mAb结合NeuGcGM3的能力，在固定有 NeuGcGM3的聚氯乙烯活化板(ICN-FLOW)上进行间接ELISA，方法如下： 每孔加入50ul溶于甲醇的4ug/ml神经节苷脂溶液。37℃放置1小时以 蒸发甲醇。之后，每孔加入150ul含1％BSA的0.05M TRIS-HCl缓冲液 (pH7.8)，于37℃孵育30分钟。\n杂交瘤上清液与4ug/ml P3 mAb在37℃共同孵育3小时，然后每孔 加入50ul该混合液，将测定板在37℃孵育90分钟。\n以200ul PBS洗涤板孔4次，加入50ul适当稀释的碱性磷酸酶与抗 鼠免疫球蛋白结合物抗血清。PBS洗涤后，按如前所述在板孔中加入底 物溶液进行孵育。\n获得的IgG1亚型的抗独特型抗体命名为1E10。该1E10抗-IdP3mAb 极特异地针对作为免疫原的P3mAb。其不与其它抗神经节苷脂抗体如E1、 A3和F6发生反应(图1)。该抗独特型mAb可抑制P3 mAb结合NeuGcGM3 (图2)和P3阳性乳腺瘤细胞系。\n实施例2：在异种模型中生产对1E10抗-Id mAb的抗-抗独特型(Ab3) 抗体应答。\n用氢氧化铝沉淀的1E10抗-IdP3 mAb皮内免疫猕猴，每次注射2mg 剂量的该mAb，每次免疫间隔14天。所述动物接受了数个剂量的该mAb。\n免疫之前和之后采取血清样本。通过ELISA鉴定猴血清中Ab3抗体 应答的存在。ELISA板(高结合性Coster)在pH9.8碳酸盐-碳酸氢盐缓 冲液中与10ug/ml 1E10 mAb或其F(ab’)2片段于4℃孵育过夜。用含有 0.05％Tween 20的PBS洗涤后，该板用含1％BSA的同样缓冲液于37℃封 闭1小时。\n重复洗涤步骤，每孔加入50ul不同的血清稀释液。37℃孵育2小时 后，再次洗涤并加入碱性磷酸酶与羊抗人免疫球蛋白抗-IgM或抗-IgG的 结合物抗血清。洗涤后，按如前所述加入底物溶液。\n进行阻断实验以区分抗同型和抗独特型抗体应答。500ug/ml具有 1E10 mAb相同同型但不同特异性的mAb与猴血清在4℃孵育过夜。然后， 按以上所述通过ELISA测定剩余的抗1E10 mAb血清活性。\n采用如上描述的ELISA方法，检测该猴血清抑制生物素化P3 mAb结 合包被于ELISA板上的1E10 mAb F(ab’)2片段的能力，但此处在血清稀 释液与包被板孵育之后，每孔加入50ul生物素化P3 mAb。37℃孵育1 小时后，洗涤该板并每孔加入50ul抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复 合体，37℃放置1小时。洗涤后，加入底物缓冲液(8mg邻苯二胺溶解于 12ml pH5.0磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液)。在ELISA读数器中测定492nm吸 光度。\n1E10抗-IdP3 mAb免疫的猴血清与1E10 F(ab’)2片段强烈反应(图 3)。免疫猴血清特异地结合免疫的1E10 mAb，而与非相关mAb(ior C5) 只有较少的反应。将所述动物血清与非相关mAb同时孵育后，由于吸附 的血清与1E10抗-IdP3 mAb的强烈反应，进一步证实了抗1E10独特型 抗体的存在；令人惊奇的是，诱导的抗独特型抗体应答超过了产生的抗 同型抗体应答(图4)。猴Ab3血清还抑制生物素化P3 mAb结合1E10抗 -Id mAb，说明猴Ab3血清与P3 mAb具有共同的独特位(图5)。1E10抗 -IdP3 mAb免疫产生了优势的IgG抗体反应(图6)。甚至在该动物接受 最后一次免疫之后4个月，该猴血清仍与1E10 F(ab’)2片段发生反应(图 7)，同时也检测到了具有抑制P3 mAb结合1E10能力的Ab3抗体。在该 动物血清中未检测到抗NeuGcGM3抗体。\n因为1E10抗独特型mAb可抑制P3 mAb结合其抗原，但又不能在动 物中诱导P3样抗体的产生，所以说明1E10抗独特型mAb是γ型。\n实施例3：用1E10抗-Id mAb治疗小鼠\n以5剂每剂50ug的氢氧化铝沉淀之1E10抗-IdP3 mAb免疫C57BL/6 小鼠，每剂间隔14天。一周后，小鼠皮下注射5×103 B16黑素瘤细胞。 同样方式处理但未接受该mAb的小鼠作为对照。图8显示了Kaplan-Meyer 存活曲线；1E10抗-IdP3 mAb免疫组的存活率显著比对照高。\nC57BL/6小鼠静脉内接种50×103 Lewis肺癌细胞。14天后静脉内注 射10ug 1E10，再6天后将小鼠处死并对肺转移瘤计数。非相关IgG mAb 处理或仅接受PBS的小鼠作为对照。1E10抗-P3 mAb处理的10只小鼠， 7只未产生肺转移瘤，其余3只转移瘤总数最大是3。相反，所有非相关 IgG1处理或仅接受PBS的小鼠均产生肺转移瘤。这些结果说明用该γ型 抗-Id mAb进行的治疗具有抗肿瘤的保护性效应。\n附图简要说明：\n图1：显示1E10抗-IdP3 mAb抗P3、E1、A3和F6抗神经节苷脂mAb的 反应性。\n图2：显示抑制实验的结果，其中P3 mAb与1E10抗-IdP3 mAb一起孵育， 之后通过ELISA测定P3 mAb与NeuGcGM3的反应性。\n图3：显示动物接受不同剂量的氢氧化铝沉淀之1E10抗-Id mAb后，通 过ELISA测定的猴血清抗体与1E10 F(ab’)2片段的反应性。\n图4：显示抑制实验的结果，其中通过ELISA测定了猴非预吸附血清与 1E10 mAb(-■-)以及猴非预吸附血清与非相关ior C5 mAb(-●-)匹配 的同型的反应性，还测定了血清抗体与1E10 mAb(-□-)以及血清抗体 与非相关ior C5 mAb(-○-)的结合。箭头指示免疫时间和采血持续线 时间。\n图5：显示通过ELISA测定的1E10 mAb免疫猴血清对P3 mAb结合1E10 抗-Id mAb的抑制。箭头指示免疫时间和采血持续线时间。\n图6：显示ELISA测定的抗独特型mAb免疫的猴血清中抗1E10 mAb的IgM 和IgG抗体应答动力学。箭头指示免疫时间和采血持续线时间。\n图7：显示了猴免疫前血清、猴接受最后一次剂量的氢氧化铝沉淀之1E10 抗独特型mAb后采取的血清、以及动物最后一次免疫后4个月采取的血 清，对1E10 F(ab’)2片段的识别。\n图8：显示1E10抗-IdP3 mAb处理并接种B16黑素瘤细胞的小鼠的 Kaplan-Meyer存活曲线。