可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法

1、一种可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其特征在于，包括如 下步骤：
第一步，用O，O-二乙基硫代磷酰氯与4-氨基丁酸反应，合成含有多种有机 磷农药共同结构-O，O-二乙基硫代磷酰基的通用半抗原O，O-二乙基-N-(3-羧 基丙基)硫逐磷酰胺酯DENP；
第二步，采用碳二亚胺法将第一步得到的通用半抗原O，O-二乙基-N-(3-羧 基丙基)硫逐磷酰胺酯DENP分别与牛血清白蛋白BSA、鸡卵清蛋白OVA进行偶联， 制备通用免疫原DENP-BSA和通用包被原DENP-OVA；
第三步，采用第二步制备的免疫原免疫新西兰大白兔，得到多克隆抗体，即 可检测多种有机磷农药残留的抗体。
2、根据权利要求1所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其 特征是，所述的第一步，具体为：
①取1.0gO，O-二乙基硫代磷酰氯溶于5mL甲醇，置于冰浴；
②称取KOH 0.69g和4-氨基丁酸0.67g，溶于5mL甲醇；
③在搅拌中，将氨基丁酸和KOH的混合溶液逐滴加入O，O-二乙基硫代磷酰 氯溶液中，在冰浴中反应，过滤反应混合物，减压浓缩，然后用20ml NaHCO3 溶液将浓缩液转移到分液漏斗中，用10mL正己烷萃取，弃去有机相，再重复两 次；
④然后用盐酸调节水相pH＝2，用10mL二氯甲烷萃取有机相，再重复两次；
⑤经无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到淡黄色油状物0.53g，即为产物通用半 抗原O，O-二乙基-N-(3-羧基丙基)硫逐磷酰胺酯DENP。
3.根据权利要求2所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其 特征是，所述的在冰浴中反应，其时间为2h。
4.根据权利要求2所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其 特征是，所述的NaHCO3溶液，其浓度为50mg/mL。
5.根据权利要求1所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其 特征是，所述的第二步，具体为：
①取52mg DENP溶于3mL无水二甲基甲酰胺DMF，加入116mg N-羟基琥珀酰 亚胺NHS，191mg N，N’-二环己基碳二亚胺EDC，室温搅拌反应过夜；
②取133mgBSA或90mgOVA溶于15mL硼酸盐缓冲液；
③然后将活化半抗原溶液加入BSA或OVA溶液中，使半抗原与BSA或OVA的 摩尔比为100∶1，室温反应2h后，于4℃反应过夜，透析获得纯化的完全抗原溶 液。
6.根据权利要求5所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其 特征是，所述硼酸盐缓冲液，其浓度为0.2mol/L，pH8.7。
7.根据权利要求5所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其 特征是，所述室温反应，其时间为2h。
8.根据权利要求1所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其 特征是，所述第三步，具体为：以合成的通用免疫原，与等量弗氏佐剂混合后， 采用皮内注射的方式免疫新西兰大白兔。

暂无