一种能够减少叶菜病虫害的微生物制剂及其制备方法

1.一种能够减少叶菜病虫害的微生物制剂，其特征在于，它由下述以重量份计的原料制成：球孢自僵菌培养液10-20、链霉菌培养液5-10、复合菌种培养液15-30、大蒜1-15、糖蜜20-40、中草药1-15以及微量元素无机盐溶液0.2-0.8；
其中，所述复合菌种由枯草芽孢杆菌培养液25-45wt％、沼泽红假单胞菌30-50wt％以及酵母菌25-45wt％组成；
所述中草药由甘草40wt％、金银花40wt％以及板蓝根20wt％组成；
所述微量元素无机盐溶液为含有铁离子、钼离子、铜离子、硼离子以及氯离子的无机盐溶液，上述离子浓度和为1-5g/L；
所述球孢白僵菌培养液的制备方法为：将第一液体培养基在120-130℃灭菌15-30分钟后，与吐温-80以重量比100∶0.5-0.8混合；将球孢白僵菌按1∶80-100的重量比接种于所得第一液体培养基混合物中，在25-35℃、振荡频率为110-130r/min的条件下在摇床中振荡培养5-7d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/mL时停止发酵，得到球孢白僵菌培养液；所述的第一液体培养基由以下以重量份计的原料组成：黄豆粉2-4、花生粉2-5、蔗糖5-10、磷酸二氢钾1.5-2、硫酸镁0.2-0.6、氯化钙0.01-0.02、硫酸锰
0.001-0.008、维生素B8-10以及无菌水70-80；
所述链霉菌培养液的制备方法为：将第二液体培养基在120-130℃灭菌15-30分钟后，将链霉菌按1∶50-100的重量比接种于上述第二液体培养基中，调节pH值为7.0-7.2，在温度25-30℃、振荡频率为200-240r/min的条件下在摇床中振荡培养8-10d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/mL时停止发酵，得到链霉菌培养液；所述第二液体培养基由以下以重量份计的原料组成：淀粉10-15、玉米粉8-10、酵母粉2-5、豆饼粉2-5、碳酸钙
1.5-2.0、磷酸二氢钾1.5-2、硫酸镁0.2-0.6、氯化钙0.01-0.02、氯化钴0.0004-0.0007以及无菌水65-78；
所述复合菌种培养液的制备方法为：将枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、酵母菌按
25-45∶3-50∶25-45的重量比混合，按1∶50-100的重量比接种于第三液体培养基，将pH值调节至6.8，在25-35℃以150-300r/min的速度搅拌15-25min后，密闭静置发酵2-4d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/mL时停止发酵，得到复合菌种培养液；所述第三液体培养基由以下以重量份计的原料组成：糖蜜5-10、蛋白胨0.5-1、酵母粉0.5-1、硫酸铵0.2-0.5、硫酸镁0.2-0.5以及无菌水88-94。
2.如权利要求1所述的能够减少叶菜病虫害的微生物制剂，其特征在于，所述链霉菌培养液的制备方法中振荡培养的温度为26-28℃。
3.权利要求1所述的能够减少叶菜病虫害的微生物制剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将大蒜与中草药碾碎后与球孢白僵菌培养液、链霉菌培养液、复合菌种培养液以及糖蜜按比例混合，置入密闭罐内在30-35℃发酵6-8d，取样观察，待活菌总浓度数超过
12亿/mL时停止发酵，得到混合发酵产物；
第二步：在第一步得到的混合发酵产物中按比例添加微量元素无机盐溶液，得到能够减少叶菜病虫害的微生物制剂。

一种能够减少叶菜病虫害的微生物制剂及其制备方法\n技术领域\n[0001] 本发明涉及一种能够减少叶菜病虫害的微生物制剂及其制备方法，可以显著增强叶菜机体抗病力和抗逆力，改良土壤、减少土传病害，促使叶菜安全增产；同时有效减少化肥农药的使用，改善叶菜的品质，降低种植成本，属于微生物在农业生产应用技术领域。\n背景技术\n[0002] 叶菜能为人们提供了丰富的碳水化合物、维生素、纤维素等营养物质，是日常生活中不可缺少的食物。然而，在片面追求经济利益的驱动下，人们开始了虐夺式的生产活动，采取了过量施用氮肥、农药、除草剂等农用产品等不良手段，结果导致叶菜品质恶化、病虫害加剧、农药残留量超标等系列问题，直接影响了叶菜产量与质量。随着人们生活水平的提高与健康观念的加强，叶菜在人们膳食结构中的比例越来越大，蔬菜的质量安全也成为饱受关注的问题，同时，过量施用化肥、农药的栽培技术体系还引起了严重的环境问题。开发叶菜病害控制的安全增产技术具有极其重要的意义。\n[0003] 随着研究的深入，已形成了物理、化学、生物等不同角度的增产技术。物理防治，多利用趋性诱杀害虫，减少叶菜损失；化学角度，多采用施用化肥与施用低毒低残留的农药方法，仍然不能完全避免有毒有害物质的残留聚集；生物角度，则不用或少用化学农药，通过有益的微生物活动改良土壤、抑制病虫害、促进作物营养吸收，达到安全增产的效果。但目前关于叶菜增产技术的研究多集中于物理化学领域，生物领域相关成熟技术较少，且多为\n6 8\n单一微生物的应用，菌的活力一般在10-10cfu/克，功能也比较单一，关于复合益生菌的病害防治、安全增产技术少之又少。\n发明内容\n[0004] 本发明的目的是提供一种可以显著增强叶菜机体抗病力和抗逆力，改良土壤、减少土传病害，促使叶菜安全增产的复合微生物制剂及其制备方法。\n[0005] 为了达到上述目的，本发明的技术方案是提供一种能够减少叶菜病虫害的微生物制剂，其特征在于，它由下述以重量份计的原料制成：球孢白僵菌培养液10-20、链霉菌培养液5-10、复合菌种培养液15-30、大蒜1-15、糖蜜20-40、中草药1-15以及微量元素无机盐溶液0.2-0.8；\n[0006] 其中，所述复合菌种由枯草芽孢杆菌培养液25-45wt％、沼泽红假单胞菌\n30-50wt％以及酵母菌25-45wt％组成。\n[0007] 所述中草药为甘草30-50wt％、金银花20-40wt％以及板蓝根20-30wt％组成。\n[0008] 所述微量元素无机盐溶液为含有铁离子、钼离子、铜离子、硼离子以及氯离子的无机盐溶液，上述离子浓度和为1-5g/L。\n[0009] 本发明还提供了上述能够减少叶菜病虫害的微生物制剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：\n[0010] 第一步：将第一液体培养基在120-130℃灭菌15-30分钟后，与吐温-80以重量比\n100∶0.5-0.8混合；将球孢白僵菌按1∶80-100的重量比接种于所得第一液体培养基混合物中，在25-35℃、振荡频率为110-130r/min的条件下在摇床中振荡培养5-7d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到球孢白僵菌培养液；\n[0011] 所述的第一液体培养基由以下以重量份计的原料组成：黄豆粉2-4、花生粉2-5、蔗糖5-10、磷酸二氢钾1.5-2、硫酸镁0.2-0.6、氯化钙0.01-0.02、硫酸锰0.001-0.008、维生素B8-10以及无菌水70-80；\n[0012] 第二步：将第二液体培养基在120-130℃灭菌15-30分钟后，将链霉菌按\n1∶50-100的重量比接种于上述第二液体培养基中，调节p H值为7.0-7.2，在温度\n25-30℃、振荡频率为200-240r/min的条件下在摇床中振荡培养8-10d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到链霉菌培养液；\n[0013] 所述第二液体培养基由以下以重量份计的原料组成：淀粉10-15、玉米粉8-10、酵母粉2-5、豆饼粉2-5、碳酸钙1.5-2.0、磷酸二氢钾1.5-2、硫酸镁0.2-0.6、氯化钙\n0.01-0.02、氯化钴0.0004-0.0007以及无菌水65-78；\n[0014] 第三步：将枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、酵母菌按25-45∶30-50∶25-45的重量比混合，按1∶50-100的重量比接种于第三液体培养基，将pH值调节至6.8，在\n25-35℃以150-300r/min的速度搅拌15-25min后，密闭静置发酵2-4d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到复合菌种培养液；\n[0015] 所述第三液体培养基由以下以重量份计的原料组成：糖蜜5-10、蛋白胨0.5-1、酵母粉0.5-1、硫酸铵0.2-0.5、硫酸镁0.2-0.5以及无菌水88-94；\n[0016] 第四步：将大蒜与中草药碾碎后与球孢白僵菌培养液、链霉菌培养液、复合菌种培养液以及糖蜜按比例混合，置入密闭罐内在30-35℃发酵6-8d，取样观察，待活菌总浓度数超过12亿/ml时停止发酵，得到混合发酵产物；\n[0017] 第五步：在第四步得到的混合发酵产物中按比例添加微量元素无机盐溶液，得到能够减少叶菜病虫害的微生物制剂。\n[0018] 所述第二步中振荡培养的温度为26-28℃。\n[0019] 本发明所用的5种菌种均从农业微生物菌种保藏管理中心购买，其保藏号如下：\n球孢白僵菌Beauveria bassiana(ACCC 30006)；链霉菌Streptomyces sp(ACCC 40069)；\n枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(ACCC 10623)；沼泽红假单胞菌Rhodosedoseudomousaspadustris(ACCC 10649)；酵母菌Saccharomyces cerevisiae(IFO 0203)。\n[0020] 本发明原理如下：\n[0021] 本发明采用多种菌种与大蒜、中草药等抗菌物质共同生长发酵，同时产生较大含量的代谢物质，活菌含量液体为12亿/mL。\n[0022] 球饱白僵菌具有部分降解甲苯化合物等有害物质的能力和生物转化镉和铜等重金属的能力，此外其产生的球包白僵菌素，能抑制害虫血细胞的防卫反应，使其能在宿主体内大量繁殖，破坏宿主的组织功能，同时其代谢产物草酸盐在血液中的大量积累，可使宿主新陈代谢紊乱而死亡。\n[0023] 链霉菌属于放线菌目，可通过抗生、竞争和超寄生作用进行植物保护。连灭菌可分泌抗生物质或细胞外酵素，能有效抑制植物病原菌，少部分能促进植物生长或诱导植物产生抗病性；还具有较强的分解复杂达到含氮和不含氮有机物的能力，对土壤改良起着重要作用，能有效减少病菌滋生，达到防治病害效果。\n[0024] 沼泽红假单胞菌可在代谢过程中产生和释放一种抗病因子辅酶，对机体和土壤中的致病菌具有一定的抑制作用，还可与土壤中的放线菌共生，使有益菌增殖，抑制其它有害菌群繁殖，起到生态防病功能。\n[0025] 酵母菌群不仅细胞蛋白质含量高，而且在他们生长代谢过程中能形成多种B族维生素和生理活性物质，有助于其他微生物和动植物的营养吸收，增强有效菌的活性，促进病害防治功能的发挥。\n[0026] 通过微生物制剂的使用，能在叶菜根部或土壤中可产生并积累大量营养丰富的微生物菌体及有用的代谢产物，如有机酸、醇、醛、维生素、激素、抗生素，增强植物机体活力和代谢能力，促使根系与植株发育，提高光合面积叶片的叶绿素含量和光合速度，促进安全增产。\n[0027] 叶菜主要食用部位为枝叶，需保证其色泽浓绿，若缺乏必需元素，会导致内源性病症，因此补充钼，避免植株缺钼造成硝酸盐积累，导致黄斑病；补充铜，避免植株缺铜导致电子链传递受阻，植物萎蔫细弱。补充硼，避免缺硼导致的根尖与茎尖分生组织坏死。补充氯，避免植株缺氯形成小叶并发生坏死。\n[0028] 本发明的优点如下：\n[0029] 1.能增强植物的新陈代谢，强化叶片保护膜的角质层，防止病原菌进入，使植物根部的木质素增加，使病害减轻；\n[0030] 2.复合微生物制剂中含有的酯成分在草食害虫体内不分解，可使害虫产生生理障碍而死亡；\n[0031] 3.微生物菌种在植物体内或根部、叶面定植，还能形成相互协同的菌膜，可以提高植物根部的营养吸收能力，有效抑制有害菌的生长繁殖与入侵。\n[0032] 4.通过微生物的活动，促进了土壤有机质的分解与生物活性物质的合成，能提高了土壤保水、保肥能力，改善土壤生态环境，抑制田间杂草和有害微生物的繁殖，促进叶菜生长。\n[0033] 5.补充提供必需的微量元素，避免植物因为缺乏必须微量元素，发生枯萎、黄斑、小叶等内源性病症，内外结合，巩固病害防治效果。\n具体实施方式\n[0034] 以下结合实施例对本发明作进一步说明。\n[0035] 实施例1\n[0036] 一种能够减少叶菜病虫害的微生物制剂由下述以重量份计的原料制成：球孢白僵菌培养液20、链霉菌培养液5、复合菌种培养液30、大蒜1、糖蜜40、中草药4以及微量元素无机盐溶液0.8；\n[0037] 其中，所述复合菌种由枯草芽孢杆菌培养液45wt％、沼泽红假单胞菌30wt％以及酵母菌25wt％组成。\n[0038] 所述中草药由甘草30wt％、金银花40wt％以及板蓝根30wt％组成。\n[0039] 所述微量元素无机盐溶液为含有铁离子、钼离子、铜离子、硼离子以及氯离子的无机盐溶液，上述离子浓度和为1g/L。\n[0040] 上述能够减少叶菜病虫害的微生物制剂的制备方法，具体步骤为：\n[0041] 第一步：将第一液体培养基在120℃灭菌30分钟后，与吐温-80以重量比\n100∶0.5混合；将球孢白僵菌按1∶80的重量比接种于所得第一液体培养基混合物中，在25℃、振荡频率为130r/min的条件下在摇床中振荡培养5d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到球孢白僵菌培养液；\n[0042] 所述的第一液体培养基由以下以重量份计的原料组成：黄豆粉4、花生粉2、蔗糖\n5、磷酸二氢钾2、硫酸镁0.2、氯化钙0.02、硫酸锰0.005、维生素B 8以及无菌水80；\n[0043] 第二步：将第二液体培养基在120℃灭菌30分钟后，将链霉菌按1∶50的重量比接种于上述第二液体培养基中，调节pH值为7.0，在温度25℃、振荡频率为200r/min的条件下在摇床中振荡培养8d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到链霉菌培养液；\n[0044] 所述第二液体培养基由以下以重量份计的原料组成：淀粉15、玉米粉8、酵母粉5、豆饼粉2、碳酸钙1.5、磷酸二氢钾1.5、硫酸镁0.4、氯化钙0.01、氯化钴0.0004以及无菌水\n68；\n[0045] 第三步：将枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、酵母菌按45∶30∶25的重量比混合，按1∶50的重量比接种于第三液体培养基，将pH值调节至6.8，在26℃以150r/min的速度搅拌25min后，密闭静置发酵3d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到复合菌种培养液；\n[0046] 所述第三液体培养基由以下以重量份计的原料组成：糖蜜10、蛋白胨0.5、酵母粉\n1、硫酸铵0.2、硫酸镁0.2以及无菌水88；\n[0047] 第四步：将大蒜与中草药碾碎后与球孢白僵菌培养液、链霉菌培养液、复合菌种培养液以及糖蜜按比例混合，置入密闭罐内在35℃发酵6d，取样观察，待活菌总浓度数超过\n12亿/ml时停止发酵，得到混合发酵产物；\n[0048] 第五步：在第四步得到的混合发酵产物中按比例添加微量元素无机盐溶液，得到能够减少叶菜病虫害的微生物制剂。\n[0049] 实施例2\n[0050] 一种能够减少叶菜病虫害的微生物制剂由下述以重量份计的原料制成：球孢白僵菌培养液15、链霉菌培养液10、复合菌种培养液28、大蒜11、糖蜜35、中草药1以及微量元素无机盐溶液0.2；\n[0051] 其中，所述复合菌种由枯草芽孢杆菌培养液35wt％、沼泽红假单胞菌40wt％以及酵母菌25wt％组成。\n[0052] 所述中草药由甘草50wt％、金银花20wt％以及板蓝根30wt％组成。\n[0053] 所述微量元素无机盐溶液为含有铁离子、钼离子、铜离子、硼离子以及氯离子的无机盐溶液，上述离子浓度和为5g/L。\n[0054] 上述能够减少叶菜病虫害的微生物制剂的制备方法，具体步骤为：\n[0055] 第一步：将第一液体培养基在125℃灭菌30分钟后，与吐温-80以重量比\n100∶0.6混合；将球孢白僵菌按1∶90的重量比接种于所得第一液体培养基混合物中，在28℃、振荡频率为120r/min的条件下在摇床中振荡培养6d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到球孢白僵菌培养液；\n[0056] 所述的第一液体培养基由以下以重量份计的原料组成：黄豆粉3、花生粉4、蔗糖\n8、磷酸二氢钾1.5、硫酸镁0.5、氯化钙0.01、硫酸锰0.006、维生素B 9以及无菌水75；\n[0057] 第二步：将第二液体培养基在125℃灭菌20分钟后，将链霉菌按1∶60的重量比接种于上述第二液体培养基中，调节pH值为7.0，在温度27℃、振荡频率为220r/min的条件下在摇床中振荡培养9d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到链霉菌培养液；\n[0058] 所述第二液体培养基由以下以重量份计的原料组成：淀粉12、玉米粉9、酵母粉4、豆饼粉4、碳酸钙1.5、磷酸二氢钾2、硫酸镁0.5、氯化钙0.01、氯化钴0.0004以及无菌水\n68；\n[0059] 第三步：将枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、酵母菌按35∶40∶25的重量比混合，按1∶80的重量比接种于第三液体培养基，将pH值调节至6.8，在28℃以200r/min的速度搅拌20min后，密闭静置发酵4d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到复合菌种培养液；\n[0060] 所述第三液体培养基由以下以重量份计的原料组成：糖蜜8、蛋白胨0.8、酵母粉\n1、硫酸铵0.5、硫酸镁0.2以及无菌水90；\n[0061] 第四步：将大蒜与中草药碾碎后与球孢白僵菌培养液、链霉菌培养液、复合菌种培养液以及糖蜜按比例混合，置入密闭罐内在32℃发酵7d，取样观察，待活菌总浓度数超过\n12亿/ml时停止发酵，得到混合发酵产物；\n[0062] 第五步：在第四步得到的混合发酵产物中按比例添加微量元素无机盐溶液，得到能够减少叶菜病虫害的微生物制剂。\n[0063] 实施例3\n[0064] 一种能够减少叶菜病虫害的微生物制剂由下述以重量份计的原料制成：球孢白僵菌培养液20、链霉菌培养液10、复合菌种培养液30、大蒜10、糖蜜20、中草药10以及微量元素无机盐溶液0.7；\n[0065] 其中，所述复合菌种由枯草芽孢杆菌培养液25wt％、沼泽红假单胞菌50wt％以及酵母菌25wt％组成。\n[0066] 所述中草药由甘草40wt％、金银花40wt％以及板蓝根20wt％组成。\n[0067] 所述微量元素无机盐溶液为含有铁离子、钼离子、铜离子、硼离子以及氯离子的无机盐溶液，上述离子浓度和2g/L。\n[0068] 上述能够减少叶菜病虫害的微生物制剂的制备方法，具体步骤为：\n[0069] 第一步：将第一液体培养基在130℃灭菌15分钟后，与吐温-80以重量比\n100∶0.8混合；将球孢白僵菌按1∶100的重量比接种于所得第一液体培养基混合物中，在35℃、振荡频率为110r/min的条件下在摇床中振荡培养7d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到球孢白僵菌培养液；\n[0070] 所述的第一液体培养基由以下以重量份计的原料组成：黄豆粉2、花生粉5、蔗糖\n10、磷酸二氢钾1.5、硫酸镁0.6、氯化钙0.02、硫酸锰0.008、维生素B 10以及无菌水72；\n[0071] 第二步：将第二液体培养基在130℃灭菌15分钟后，将链霉菌按1∶100的重量比接种于上述第二液体培养基中，调节pH值为7.2，在温度28℃、振荡频率为240r/min的条件下在摇床中振荡培养10d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到链霉菌培养液；\n[0072] 所述第二液体培养基由以下以重量份计的原料组成：淀粉10、玉米粉10、酵母粉\n2、豆饼粉5、碳酸钙1.5、磷酸二氢钾2、硫酸镁0.6、氯化钙0.02、氯化钴0.0005以及无菌水\n78.3795；\n[0073] 第三步：将枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、酵母菌按25∶50∶25的重量比混合，按1∶100的重量比接种于第三液体培养基，将pH值调节至6.8，在35℃以300r/min的速度搅拌15min后，密闭静置发酵4d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到复合菌种培养液；\n[0074] 所述第三液体培养基由以下以重量份计的原料组成：糖蜜5、蛋白胨1、酵母粉\n0.5、硫酸铵0.5、硫酸镁0.5以及无菌水92.5；\n[0075] 第四步：将大蒜与中草药碾碎后与球孢白僵菌培养液、链霉菌培养液、复合菌种培养液以及糖蜜按比例混合，置入密闭罐内在30℃发酵8d，取样观察，待活菌总浓度数超过\n12亿/ml时停止发酵，得到混合发酵产物；\n[0076] 第五步：在第四步得到的混合发酵产物中按比例添加微量元素无机盐溶液，得到能够减少叶菜病虫害的微生物制剂。\n[0077] 实施例4\n[0078] 一种能够减少叶菜病虫害的微生物制剂由下述以重量份计的原料制成：球孢白僵菌培养液10、链霉菌培养液10、复合菌种培养液15、大蒜15、糖蜜35、中草药15以及微量元素无机盐溶液0.5；\n[0079] 其中，所述复合菌种由枯草芽孢杆菌培养液25wt％、沼泽红假单胞菌30wt％以及酵母菌45wt％组成。\n[0080] 所述中草药由甘草40wt％、金银花40wt％以及板蓝根20wt％组成。\n[0081] 所述微量元素无机盐溶液为含有铁离子、钼离子、铜离子、硼离子以及氯离子的无机盐溶液，上述离子浓度和为3g/L。\n[0082] 上述能够减少叶菜病虫害的微生物制剂的制备方法，具体步骤为：\n[0083] 第一步：将第一液体培养基在130℃灭菌15分钟后，与吐温-80以重量比\n100∶0.8混合；将球孢白僵菌按1∶100的重量比接种于所得第一液体培养基混合物中，在35℃、振荡频率为110r/min的条件下在摇床中振荡培养7d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到球孢白僵菌培养液；\n[0084] 所述的第一液体培养基由以下以重量份计的原料组成：黄豆粉2、花生粉5、蔗糖\n10、磷酸二氢钾1.5、硫酸镁0.6、氯化钙0.02、硫酸锰0.001、维生素B 10以及无菌水72；\n[0085] 第二步：将第二液体培养基在130℃灭菌15分钟后，将链霉菌按1∶100的重量比接种于上述第二液体培养基中，调节pH值为7.2，在温度30℃、振荡频率为240r/min的条件下在摇床中振荡培养10d，取样观察，当显微镜下活菌总浓度数超过10亿/ml时停止发酵，得到链霉菌培养液；\n[0086] 所述第二液体培养基由以下以重量份计的原料组成：淀粉10、玉米粉10、酵母粉\n2、豆饼粉5、碳酸钙1.5、磷酸二氢钾2、硫酸镁0.6、氯化钙0.02、氯化钴0.0007以及无菌水\n80；\n[0087] 第三步：将枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、酵母菌按25∶30∶45的重量比混