一种NAMPT基因修饰的人脐带间充质干细胞外泌体的制备方法

发明专利有效专利

申请号：
CN202110552148.6
IPC分类号：C12N15/85;C12N5/10;C12N15/54
申请日期：
2021-05-20
申请人：
扬州大学

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专利名称	一种NAMPT基因修饰的人脐带间充质干细胞外泌体的制备方法
申请号	CN202110552148.6	申请日期	2021-05-20
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2021-08-10	公开/公告号	CN113234759A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/85 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/63 使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节〔5〕 C12N15/79 专门适用于真核细胞宿主的载体或表达系统〔5〕 C12N15/85 用于动物细胞〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;8;5;;;C;1;2;N;5;/;1;0;;;C;1;2;N;1;5;/;5;4查看分类表>
申请人	扬州大学	申请人地址	江苏省扬州市大学南路88号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	扬州大学	当前权利人	扬州大学
发明人	周琦琦;崔恒宓;刘洋洋
代理机构	扬州苏中专利事务所（普通合伙）	代理人	沈志海

摘要

本发明涉及一种NAMPT基因修饰的人脐带间充质干细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：1）、针对人AAVS1位点设计sgRNA并构建sgRNA‑CAG‑hCas9载体；2）、将sgRNA‑CAG‑hCas9载体转染至293T细胞验证sgRNA切割效率；3）、构建含NAMPT基因、抗性基因neo、转录终止序列BGH polyA、启动子EF‑1A重组载体；4）、将步骤2）中切割效率好的sgRNA‑CAG‑hCas9载体与步骤3）中构建的重组载体共转染间充质干细胞，G418筛选得到稳转细胞系；5）、收集高表达NAMPT稳转细胞系培养基，利用外泌体试剂盒提取，得到高表达NAMPT基因的人脐带间充质干细胞外泌体。通过本发明，较于慢病毒构建方法更加安全。

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