一种南美白对虾定向交尾方法

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一种南美白对虾定向交尾方法\n技术领域\n[0001] 本发明涉及一种南美白对虾家系选择育种，具体说是一种根据个体标记实现对虾定向交尾的南美白对虾家系构建方法。\n背景技术\n[0002] 凡纳滨对虾（Litopenaeus  vannamei），也称南美白对虾，属于节肢动物门（Athropoda），甲壳纲（Crustacean），十足目（Decapoda），自然分布于秘鲁至墨西哥的太平洋沿岸。凡纳滨对虾具有肉质鲜美、抗逆能力强、生长速度快、繁殖期长、耐高密度与耐低盐度及有利于活虾运输等特点。凡纳滨对虾于20世纪90年代引入我国后，迅速解决了规模化苗种繁育关键技术，形成了针对我国不同地域养殖环境的养殖模式和技术，促进了养殖规模的迅速扩张，最终成为我国水产养殖业的支柱产业。为了进一步提高对虾的产量及品质，国内外均对当前养殖的对虾品种进行遗传改良。优良品种的选育是改良对虾重要经济性状的有效手段，大规模建立家系，利用个体本身、同胞、祖先和后代等系谱和测定信息，通过约束极大似然法( restricted maximum likelihood，REML) 和最佳线性无偏预测法( best linear unbiased prediction，BLUP)进行遗传评定，依据综合选择指数选择留种亲本，已经逐渐成为水产动物选择育种的一种重要方法，基于标记辅助的大规模家系选育技术对对虾进行的遗传改良在国内外广泛开展。\n[0003] 在对虾大规模家系选育过程中，首先利用定向交配技术，通过巢式设计建立全同胞和半同胞家系。南美白对虾的定向交配常采用人工授精法，对于选定的成熟雌虾和雄虾，采用挤压或刺激雄虾腹部使精荚排除，然后将精荚贴在成熟雌虾第三、第四步足的纳精囊上。这种方法保障雌雄虾的定向交配，但有实际操作过程中存在着对亲虾可造成伤害，且存在精荚容易脱落、受精率低、难于建立半同胞等问题。\n发明内容\n[0004] 本发明的目的是提供一种根据个体标记实现对虾定向交尾而非人工受精的方式来构建南美白对虾家系的方法，该方法具有成功率高、亲虾损耗小的特点，克服现有技术中采用人工受精方式存在的对亲虾造成伤害、精荚容易脱落、受精率低、难于建立半同胞等问题。\n[0005] 本发明的技术方案如下：一种南美白对虾定向交尾方法，采用如下步骤：\n[0006] （1）亲虾的挑选与营养强化培育：根据育种目标的要求选留亲虾，将雌雄亲虾分池饲养，以沙蚕、红虫、牡蛎、鱿鱼作为饵料进行营养强化培育，强化培育过程中饵料日投喂量为对虾体重的7%-15%；强化培育池用水符合或优于GB 11607标准，且经过严格的过滤消毒，其中，溶解氧保持在5mg/L以上，海水比重1.016-1.025，pH值8.0-8.5，水温25-28℃；\n[0007] （2）交配方案的设定：根据育种要求确定需要定向交配的雌雄亲本；\n[0008] （3）雄虾的催熟与单独培育：雄虾单独放入1m×1m×1m的网框中，对网框进行编号，记录亲本信息，将网框放入面积为30m2、加有水深60cm过滤海水的雄虾培育池中进行催熟培育；\n[0009] （4）雌虾的催熟与单独培育：经强化培育后用于定向交配的雌虾用眼柄套环进行个体标记，在步骤（1）的强化培育池中进行催熟培育；\n[0010] （5）定向交配亲虾的挑选：雌、雄亲本经催熟培育后性腺发育成熟，定向交配时，根据性腺的发育情况判断当天能够产卵的成熟雌虾，并进行选择，性腺成熟的雌虾从表面观察生殖腺颜色为红色，每体节卵巢分叶清晰，性腺在第一、二腹节的突起大，卵粒饱满，当天可以产卵；观察雄虾第五步足基部的精荚囊饱满，精荚呈乳白色时，选出，单独放入体积为1立方米的网箱或小水槽中；\n[0011] （6）定向交配：每天下午，将选定的雌虾，按交配设计要求，从雌虾池移入对应的雄虾网框中进行自然交配，第二天早晨观察雌虾交配情况，将交配成功雌虾移入产卵池中；未交配则将雌虾放入原强化培育池中继续培育至性腺成熟到可产卵状态后，重复定向交配步骤；\n[0012] （7）产卵受精：将步骤（6）交配成功的雌虾放于200L的塑料桶中，桶内注有消毒过滤的新鲜海水，水温保持29±0.5℃，充气微沸状，桶孔用黑色塑料布遮挡，防止雌虾跳出或外界影响；翌日早晨6:00-7:00，搅动水体使卵子均匀分布于水体，后每隔2h搅拌水体一次，捞出雌虾，用10ppm的聚维酮碘消毒后放于原来的培育池；下午13:00-15:00用200目筛绢网排水收集养殖池中无节幼体，并计算无节幼体的量，进行标准化家系育苗培养。\n[0013] 本发明技术方案中，所述步骤（3）雄虾的催熟培育的方法是：逐步提高水温，每天升温幅度不超过0.5℃，至28-29℃时保持恒温，以沙蚕、红虫、牡蛎、鱿鱼作为饵料，饵料日投喂量为雄虾体重的7%-15%；培育用水符合或优于GB 11607标准，且经过严格的过滤消毒，其中，溶解氧保持在5mg/L以上，海水比重1.016-1.025，pH值8.0-8.5，促使雄虾性腺成熟。\n[0014] 所述步骤（3）中，当进行多对雌雄亲本间的定向交配时，可将装有多尾雄虾亲本的多个网框置于同一个雄虾培育池中，实现在网框中通过人工饲养达到性成熟，进而实现多尾雄性亲本的催熟培育。\n[0015] 由于南美对虾雌雄个体的性腺发育不同步，一般是雄虾先熟，雌虾后熟。因此在进行所述步骤（3）时，雄虾的催熟培育时间应视性腺发育情况，在其性腺发育成熟前一周左右，进行。\n[0016] 本发明技术方案中，所述步骤（4）雌虾的催熟培育方法是：控制培育密度每平方米\n10-15尾，逐步提高水温，每天升温幅度不超过0.5℃，至28-29℃时保持恒温，用烫灼法将雌虾单侧眼柄夹烫，促使雌虾性腺成熟。\n[0017] 本发明相对于现有技术的有益效果如下：（1）避免了人工受精过程中可能对雌、雄对虾造成的损伤；（2）整个交配过程只需要确定交配亲虾的编号即可，操作方便易行，可准确的建立所建家系的系谱关系；（3）家系个体间的亲缘关系确定，人为地设计交配方案，可有效避免所建家系的近交衰退。\n具体实施方式\n[0018] 下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。\n[0019] 实施例1 按以下步骤实现本发明：\n[0020] （1）亲虾的挑选与营养强化培育：根据育种目标的要求选留亲虾，将雌雄亲虾分池饲养，以沙蚕、红虫、牡蛎、鱿鱼作为饵料进行营养强化培育，强化培育过程中饵料日投喂量为对虾体重的10%，饵料每天投喂4次，分别为8:00、12:00、17:00、23:00；强化培育池用水符合或优于GB 11607标准，且经过严格的过滤消毒，其中，溶解氧保持在8mg/L，海水比重\n1.016-1.025，pH值8.0-8.5，水温25-28℃；每天早上投喂前，打扫虾池卫生、更换虾池海水，每天更新过滤消毒海水量为60%；营养强化培育一个月；\n[0021] （2）交配方案的设定：根据育种要求确定需要定向交配的雌雄亲本；\n[0022] （3）雄虾的催熟与单独培育：雄虾单独放入1m×1m×1m的网框中，对网框进行编号，记录亲本信息，将网框放入面积为30m2、加有水深60cm过滤海水的雄虾培育池中按以下方法进行催熟培育：逐步提高水温，每天升温幅度不超过0.5℃，至28-29℃时保持恒温，其中，\n[0023] a．培育过程饵料管理：以沙蚕、红虫、牡蛎、鱿鱼作为饵料，饵料日投喂量为雄虾体重的10%；\n[0024] b．水质管理：培育用水符合或优于GB 11607标准，且经过严格的过滤消毒，其中，溶解氧保持在8mg/L，海水比重1.016-1.025，pH值8.0-8.5；\n[0025] （4）雌虾的催熟与单独培育：经强化培育后用于定向交配的雌虾用眼柄套环进行个体标记，在步骤（1）的强化培育池中按以下方法进行催熟培育：控制培育密度每平方米15尾，逐步提高水温，每天升温幅度不超过0.5℃，至28-29℃时保持恒温，用烫灼法将雌虾单侧眼柄夹烫，促使雌虾性腺成熟；\n[0026] （5）定向交配亲虾的挑选：雌、雄亲本经催熟培育后性腺发育成熟，定向交配时，根据性腺的发育情况判断当天能够产卵的成熟雌虾，并进行选择，性腺成熟的雌虾从表面观察生殖腺颜色为红色，每体节卵巢分叶清晰，性腺在第一、二腹节的突起大，卵粒饱满，当天可以产卵；观察雄虾第五步足基部的精荚囊饱满，精荚呈乳白色时，选出，单独放入体积为1立方米的网箱中；\n[0027] （6）定向交配：每天下午，将选定的雌虾，按交配设计要求，从雌虾池移入对应的雄虾网框中进行自然交配，第二天早晨观察雌虾交配情况，将交配成功雌虾移入产卵池中；未交配则将雌虾放入原强化培育池中继续培育至性腺成熟到可产卵状态后，重复定向交配步骤；\n[0028] （7）产卵受精：将步骤（6）交配成功的雌虾放于200L的塑料桶中，桶内注有消毒过滤的新鲜海水，水温保持29±0.5℃，充气微沸状，桶孔用黑色塑料布遮挡，防止雌虾跳出或外界影响；翌日早晨6:00-7:00，搅动水体使卵子均匀分布于水体，后每隔2h搅拌水体一次，捞出雌虾，用10ppm的聚维酮碘消毒后放于原来的培育池；下午13:00-15:00用200目筛绢网排水收集养殖池中无节幼体，并计算无节幼体的量，进行标准化家系育苗培养。\n[0029] 实施例2 按以下步骤实现本发明：\n[0030] （1）亲虾的挑选与营养强化培育：根据育种目标的要求选留亲虾，将雌雄亲虾分池饲养，以沙蚕、红虫、牡蛎、鱿鱼作为饵料进行营养强化培育，强化培育过程中饵料日投喂量为对虾体重的15%，饵料每天投喂4次，分别为8:00、12:00、17:00、23:00；强化培育池用水符合GB 11607标准，且经过严格的过滤消毒，其中，溶解氧保持在5mg/L，海水比重1.016-\n1.025，pH值8.0-8.5，水温25-28℃；每天早上投喂前，打扫虾池卫生、更换虾池海水，每天更新过滤消毒海水量为70%；营养强化培育一个月；\n[0031] （2）交配方案的设定：根据育种要求确定需要定向交配的雌雄亲本；\n[0032] （3）雄虾的催熟与单独培育：雄虾单独放入1m×1m×1m的网框中，对网框进行编号，记录亲本信息，将网框放入面积为30m2、加有水深60cm过滤海水的雄虾培育池中按以下方法进行催熟培育：逐步提高水温，每天升温幅度不超过0.5℃，至28-29℃时保持恒温，其中，\n[0033] a．培育过程饵料管理：以沙蚕、红虫、牡蛎、鱿鱼作为饵料，饵料日投喂量为雄虾体重的15%；\n[0034] b．水质管理：培育用水符合GB 11607标准，且经过严格的过滤消毒，其中，溶解氧保持在5mg/L，海水比重1.016-1.025，pH值8.0-8.5；\n[0035] （4）雌虾的催熟与单独培育：经强化培育后用于定向交配的雌虾用眼柄套环进行个体标记，在步骤（1）的强化培育池中按以下方法进行催熟培育：控制培育密度每平方米10尾，逐步提高水温，每天升温幅度不超过0.5℃，至28-29℃时保持恒温，用烫灼法将雌虾单侧眼柄夹烫，促使雌虾性腺成熟；\n[0036] （5）定向交配亲虾的挑选：雌、雄亲本经催熟培育后性腺发育成熟，定向交配时，根据性腺的发育情况判断当天能够产卵的成熟雌虾，并进行选择，性腺成熟的雌虾从表面观察生殖腺颜色为红色，每体节卵巢分叶清晰，性腺在第一、二腹节的突起大，卵粒饱满，当天可以产卵；观察雄虾第五步足基部的精荚囊饱满，精荚呈乳白色时，选出，单独放入体积为1立方米的小水槽中；\n[0037] （6）定向交配：每天下午，将选定的雌虾，按交配设计要求，从雌虾池移入对应的雄虾网框中进行自然交配，第二天早晨观察雌虾交配情况，将交配成功雌虾移入产卵池中；未交配则将雌虾放入原强化培育池中继续培育至性腺成熟到可产卵状态后，重复定向交配步骤；\n[0038] （7）产卵受精：将步骤（6）交配成功的雌虾放于200L的塑料桶中，桶内注有消毒过滤的新鲜海水，水温保持29±0.5℃，充气微沸状，桶孔用黑色塑料布遮挡，防止雌虾跳出或外界影响；翌日早晨6:00-7:00，搅动水体使卵子均匀分布于水体，后每隔2h搅拌水体一次，捞出雌虾，用10ppm的聚维酮碘消毒后放于原来的培育池；下午13:00-15:00用200目筛绢网排水收集养殖池中无节幼体，并计算无节幼体的量，进行标准化家系育苗培养。