一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法

1.一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，其特征在于：采用高效液相色谱仪，选用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；以乙腈‑磷酸盐缓冲液为流动相，流速为
1.0‑2.0mL/min；柱温为40℃；紫外检测器波长为220nm；进样体积为10μL，在下列梯度下，实现一种罗替戈汀及其重要中间体RG02和RG03的HPLC分离分析；所述梯度洗脱条件为：
时间，分钟 流动相A，体积％ 流动相B，体积％
0 80 20
30 30 70
35 30 70
所述RG02的结构是：
所述RG03的结构是：
2.如权利要求1所述的一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，其特征在于：所述的色谱柱为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱Phenomenex Gemini C18，色谱柱的规格为4.6mm×150mm，5μm。
3.如权利要求1所述的一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，其特征在于：所述的流动相流速为1.0mL/min，色谱柱温度为40℃，检测波长为220nm。

一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法\n技术领域\n[0001] 本发明涉及药物分析，尤其涉及一种分离分析罗替戈汀及其重要中间体的方法。\n背景技术\n[0002] 罗替戈汀的英文通用名为Rotigotine，化学名为(6S)‑6‑{丙基‑[2‑(2‑噻吩基)乙基]‑氨基}‑5,6,7,8‑四氢‑1‑萘酚，分子式为C19H25NOS，属于非麦角类选择性多巴胺受体激动药(D1/D2/D3)，用于早期及晚期帕金森病(PD)的辅助治疗，通过刺激体内的多巴胺受体并模拟神经递质多巴胺而起作用，罗替戈汀的结构式如下所示。\n[0003]\n[0004] 据罗替戈汀的文献报道，合成罗替戈汀是通过手性中间体(S)‑5‑甲氧基‑1,2,3,\n4‑四氢‑N‑丙基‑2‑萘胺和2‑(噻吩‑2‑基)乙基对甲苯磺酸酯反应制得(S)‑5‑甲氧基‑N‑丙基‑N‑(2‑(噻吩‑2‑基)乙基)‑1,2,3,4‑四氢萘‑2‑胺，在HBr酸性条件下脱甲基得到的，具体如下所示：\n[0005]\n[0006] 罗替戈汀合成分析：\n[0007] 在罗替戈汀合成过程中会涉及以上三种重要中间体，在原料药合成中必须严格控制反应过程中间体含量，进而达到监控反应，提高收率以及保证原料药质量的目的。对于提高帕金森病类药物的质量，保证广大患者用药的安全性具有重要的意义。通过大量的文献检索，目前虽有罗替戈汀分离分析的相关文献报道，如欧洲药典：以辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈(0.02％三氟乙酸)和水(0.03％三氟乙酸)为流动相，采用梯度洗脱方式，但是本申请人根据欧洲药典检测得到的峰形严重拖尾，峰形不佳。\n发明内容\n[0008] 本发明的目的，在于解决现有技术存在的上述问题，提供一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法。本发明得到的峰形无拖尾，峰形好，可准确定量，解决了罗替戈汀及重要中间体的质量控制问题。\n[0009] 本发明目的是这样实现的：一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，采用高效液相色谱仪，选用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；以乙腈‑磷酸盐缓冲液为流动相，流速为1.0‑2.0mL/min；柱温为40℃；紫外检测器波长为220nm；进样体积为10μL。\n[0010] 所述的一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，所述的色谱柱为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱Phenomenex Gemini C18，色谱柱的规格为4.6mm×150mm，\n5μm。\n[0011] 所述的一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，所述的流动相乙腈‑磷酸盐缓冲液(30mm KH2PO4，H3PO4调pH为4.2‑4.3)，乙腈‑磷酸盐缓冲液梯度洗脱条件如下：\n[0012] 时间，分钟 流动相A，体积％ 流动相B，体积％\n0 80 20\n30 30 70\n35 30 70\n。\n[0013] 所述的一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，所述的流动相流速为\n1.0mL/min，色谱柱温度为40℃，检测波长为220nm。\n[0014] 所述的一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，所述的方法用于罗替戈汀合成过程中罗替戈汀及重要中间体含量的监测。\n[0015] 本发明采用了高效液相色谱法对罗替戈汀及重要中间体进行分离，能够快速有效的将罗替戈汀及其重要中间体在色谱图中彻底分离，得到良好色谱峰形。所述流动相选择对于液相色谱极其重要，关系到弱酸弱碱化合物的峰形以及是否可以准确定量，含量测定要求主成分的拖尾因子小于2.0，用该方法可以快速分离分析罗替戈汀及重要中间体并且得到优于欧洲药典的峰形，灵敏度高，可准确定量，解决了罗替戈汀及重要中间体的质量控制问题。而且，本发明的罗替戈汀的高效液相色谱分析方法用普通的液相色谱仪即可，设备要求不高，流动相选用的两个介质普通易得，可行性高，操作过程简单方便，适用性好。本发明的方法和欧洲药典的相关技术相比，灵敏度高，结果准确可靠，操作简便，分析方法稳定可靠，适用于罗替戈汀及重要中间体的质量控制。\n附图说明\n[0016] 图1为实施例1中罗替戈汀及其重要中间体的色谱分离图；\n[0017] 图2为实施例2中罗替戈汀及其重要中间体的色谱分离图；\n[0018] 图3为实施例3中罗替戈汀及其重要中间体的色谱分离图；\n[0019] 图4为实施例4中罗替戈汀及其重要中间体的的色谱分离图；\n[0020] 图5为对比例5中罗替戈汀及其重要中间体的的色谱分离图。\n具体实施方式\n[0021] 一种分离分析罗替戈汀及重要中间体的HPLC方法，采用高效液相色谱仪，选用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；以一定比例的乙腈‑磷酸盐缓冲液为流动相，流速为\n1.0mL/min；柱温为40℃；紫外检测器波长为220nm；进样体积为10μL。下面通过具体实施例子并结合附图对本发明进一步阐述，但并不限制本发明。\n[0022] 实施例所用到的仪器与条件：Agilent 1260(美国安捷伦科技公司)；Ultra Sonic Cleaner USK Type超声波清洗器；XS105电子天平(梅特勒‑托利多国际贸易(上海)有限公司)；色谱柱：Phenomenex Gemini C(18)(150×4.6mm,5μm)(广东菲罗门科技仪器有限公司)。\n[0023] 实施例1\n[0024] 一种分离分析罗替戈汀及其重要中间体的HPLC方法，其步骤如下：\n[0025] 分别取25.43mg的罗替戈汀，25.11mg RG03,24.96mg RG02置于50mL的容量瓶中，加乙腈‑水溶解稀释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，以十八烷基键合硅胶为填充剂的Phenomenex Gemini C18(150×4.6mm,5μm)为色谱柱，以乙腈‑磷酸盐缓冲液(30mm KH2PO4，H3PO4调pH为4.2)组成的混合液为流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：\n[0026] 流动相流速为1.0mL/min；\n[0027] 色谱柱温度为40℃；\n[0028] 进样量为10μL；\n[0029] 检测波长为220nm；\n[0030] 所述流动相中，按体积百分比计算，梯度洗脱条件如下：\n[0031] 时间，分钟 流动相A，体积％ 流动相B，体积％\n0 80 20\n30 30 70\n35 30 70\n。\n[0032] 色谱分离结果见图1所示，罗替戈汀及其重要中间体的色谱峰具体信息如下表：\n[0033]\n  RG03 罗替戈汀RG01 RG02\n保留时间(min) 6.32 10.33 15.41\n拖尾因子 1.77 1.75 1.50\n峰宽 0.51 0.86 0.84\n[0034] 实施例2\n[0035] 一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，其步骤如下：\n[0036] 分别取25.43mg的罗替戈汀，25.11mg RG03,24.96mg RG02置于50mL的容量瓶中，加乙腈‑水溶解稀释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，以十八烷基键合硅胶为填充剂的Phenomenex Gemini C(18)(150×4.6mm,5μm)为色谱柱，以乙腈‑磷酸盐缓冲液(30mm KH2PO4，H3PO4调pH为4.3)组成的混合液为流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：\n[0037] 流动相流速为1.0mL/min；\n[0038] 色谱柱温度为40℃；\n[0039] 进样量为10μL；\n[0040] 检测波长为220nm；\n[0041] 所述流动相中，按体积百分比计算，梯度洗脱条件如下：\n[0042] 时间，分钟 流动相A，体积％ 流动相B，体积％\n0 80 20\n30 30 70\n35 30 70\n。\n[0043] 色谱分离结果见图2所示，罗替戈汀及其重要中间体的色谱峰具体信息如下表：\n[0044]\n  RG03 罗替戈汀RG01 RG02\n保留时间(min) 6.11 10.18 15.47\n拖尾因子 1.85 1.65 1.25\n峰宽 0.48 0.62 0.86\n。\n[0045] 实施例3\n[0046] 一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，其步骤如下：\n[0047] 分别取25.43mg的罗替戈汀，25.11mg RG04,24.96mgRG03置于50mL的容量瓶中，加乙腈‑水溶解稀释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，参考欧洲药典方法，以辛烷基键合硅胶为填充剂的Agilent XDB‑C8(150×4.6mm,5μm)为色谱柱，以乙腈(0.02％三氟乙酸)和水(0.03％三氟乙酸)组成的混合液为流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：\n[0048] 流动相流速为2.0mL/min；\n[0049] 色谱柱温度为40℃；\n[0050] 进样量为10μL；\n[0051] 检测波长为220nm；\n[0052] 所述流动相中，按体积百分比计算，梯度洗脱条件如下：\n[0053] 时间，分钟 流动相A，体积％ 流动相B，体积％\n0 82 18\n2 82 18\n24 50 50\n。\n[0054] 色谱分离结果见图3所示，罗替戈汀及其重要中间体的色谱峰具体信息如下表：\n[0055]   RG03 罗替戈汀RG01 RG02\n保留时间(min) 5.69 9.99 15.34\n拖尾因子 2.14 2.02 1.90\n峰宽 1.07 1.16 1.24\n。\n[0056] 实施例4\n[0057] 一种分离分析罗替戈汀及其重要中间体的HPLC方法，其步骤如下：\n[0058] 分别取罗替戈汀制备过程反应液0.5mL置于10mL的容量瓶中，加乙腈‑水溶解稀释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，以十八烷基键合硅胶为填充剂的Phenomenex Gemini C(18)(150×4.6mm,5μm)为色谱柱，以乙腈‑磷酸盐缓冲液(30mm KH2PO4，H3PO4调pH为4.2)组成的混合液为流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：\n[0059] 流动相流速为1.0mL/min；\n[0060] 色谱柱温度为40℃；\n[0061] 进样量为10μL；\n[0062] 检测波长为220nm；\n[0063] 所述流动相中，按体积百分比计算，梯度洗脱条件如下：\n[0064]\n时间，分钟 流动相A，体积％ 流动相B，体积％\n0 80 20\n30 30 70\n35 30 70\n；\n[0065] 色谱分离结果见图4所示，反应液中重要中间体RG02保留时间14.90min，拖尾\n1.33，峰宽1.14min。\n[0066] 对比例\n[0067] 一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，其步骤如下：\n[0068] 分别取罗替戈汀制备过程反应液0.5mL置于10mL的容量瓶中，加乙腈‑水溶解稀释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，依照EP药典方法，以辛烷基键合硅胶为填充剂的Agilent XDB‑C8(150×4.6mm,5μm)为色谱柱，以乙腈和水组成的混合液为流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：\n[0069] 流动相流速为2.0mL/min；\n[0070] 色谱柱温度为40℃；\n[0071] 进样量为10μL；\n[0072] 检测波长为220nm；\n[0073] 所述流动相中，按体积百分比计算，梯度洗脱条件如下：\n[0074] 时间，分钟 流动相A，体积％ 流动相B，体积％\n0 82 18\n2 82 18\n24 50 50\n30 50 50\n。\n[0075] 色谱分离结果见图5所示，反应液中重要中间体RG02保留时间14.87min，拖尾\n3.33，峰宽1.80min。\n[0076] 综上所述，本发明的一种罗替戈汀及其重要中间体的HPLC分离分析方法，可以有效的将罗替戈汀及其重要中间体很好的分离。\n[0077] 以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。