海水寄生纤毛虫刺激隐核虫的外泌体提取分离方法及应用

发明专利有效专利

申请号：
CN202110170946.2
IPC分类号：C12N1/10;C12N1/02;A61K47/46;C12R1/90
申请日期：
2021-02-08
申请人：
自然资源部第四海洋研究所（中国—东盟国家海洋科技联合研发中心）

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专利名称	海水寄生纤毛虫刺激隐核虫的外泌体提取分离方法及应用
申请号	CN202110170946.2	申请日期	2021-02-08
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2021-05-14	公开/公告号	CN112795484A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N1/10 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N1/00 微生物本身，如原生动物；及其组合物（含有由原生动物、细菌或病毒得到的材料的药物的制备入A61K35/66；从藻类材料制备药物的入A61K36/02；从真菌中材料制备药物的入A61K36/06；药用细菌的抗原或抗体组合物的制备，如细菌菌苗入A61K39/00）；繁殖、维持或保藏微生物或其组合物的方法；制备或分离含有一种微生物的组合物的方法；及其培养基〔3，2006.01〕 C12N1/10 原生动物；其培养基〔3〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;/;1;0;;;C;1;2;N;1;/;0;2;;;A;6;1;K;4;7;/;4;6;;;C;1;2;R;1;/;9;0查看分类表>
申请人	自然资源部第四海洋研究所（中国—东盟国家海洋科技联合研发中心）	申请人地址	广西壮族自治区北海市银海区新世纪大道26号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	自然资源部第四海洋研究所（中国—东盟国家海洋科技联合研发中心）	当前权利人	自然资源部第四海洋研究所（中国—东盟国家海洋科技联合研发中心）
发明人	乔莹;马笑晚;陈旭阳;陈佳;潘莹
代理机构	北京远大卓悦知识产权代理有限公司	代理人	李开成

摘要

本发明公开了一种海水寄生纤毛虫刺激隐核虫的外泌体提取分离方法，其包括以下步骤：一、收集刺激隐核虫包囊后，将包囊清洗干净，置于含有抗生素的无菌海水中进行孵化；二、使用无菌滤网收集感染期幼虫，在含有抗生素、无外泌体胎牛血清的培养基中，孵育培养；三、离心去除感染期幼体，收集上清液；四、上清液通过滤膜除菌，浓缩滤液；五、浓缩液离心收集外泌体粗沉淀；六、外泌体粗沉淀使用无菌预冷的PBS重悬，并加入蛋白酶抑制剂；七、离心去除上清液，使用重悬沉淀，获得所述外泌体。本发明能够有效分离提取刺激隐核虫的外泌体，提取后的外泌体具有典型的碟形或茶托形囊泡状结构，粒径大小整体符合标准，且外泌体提取浓度较高。

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