检测磺胺二甲基嘧啶的免疫胶体金试剂及制备方法

1、检测磺胺二甲基嘧啶的免疫胶体金试剂及制备方法，该试剂包括 样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬，PVC背衬一端依 次粘附样品垫、结合垫，中间粘附硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫， 其特征在于结合垫上包被了抗磺胺二甲基嘧啶特异性单克隆抗体—胶 体金标记物，硝酸纤维素膜上包被了磺胺二甲基嘧啶-BSA偶联物和羊 (兔)抗鼠IgG。
2、根据权利要求1所述的检测磺胺二甲基嘧啶的免疫胶体金试剂 及制备方法，其特征在于该试剂的制备方法包括以下步骤：(1)制备磺 胺二甲基嘧啶-BSA偶联物：将磺胺二甲基嘧啶与BSA按1∶5～50 (mol/mol)比例混匀，使磺胺二甲基嘧啶与BSA形成稳定的颗粒，通过 纯化形成磺胺二甲基嘧啶-BSA偶联物；(2)制备抗磺胺二甲基嘧啶特异 性单克隆抗体：用磺胺二甲基嘧啶-BSA偶联物多次免疫Balb/c纯系小 鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞在体外融合形成杂交瘤细胞，经选择性 培养基筛选可得阳性杂交瘤细胞株。通过将杂交瘤注入小鼠腹腔获取腹 水或体外细胞培养收集培养上清液等方式，大量制备抗磺胺二甲基嘧啶 特异性单克隆抗体；(3)制备羊(兔)抗鼠IgG：用磺胺二甲基嘧啶-BSA 多次免疫小鼠，提取抗血清免疫山羊或家兔，纯化后得羊抗鼠IgG或兔 抗鼠IgG。(4)制备胶体金：用柠檬酸三钠等还原剂将氯金酸还原成 20nm～40nm的胶体金颗粒；(5)制备单克隆抗体胶体金标记：将胶体金 与抗磺胺二甲基嘧啶特异性单克隆抗体按1∶0.005～0.015(ml/mg)比 例混匀，使胶体金与抗磺胺二甲基嘧啶特异性单克隆抗体形成稳定的胶 体颗粒，通过纯化、浓缩形成抗磺胺二甲基嘧啶特异性单克隆抗体—胶 体金标记物；(6)将抗磺胺二甲基嘧啶特异性单克隆抗体--胶体金标记物 包被在胶体金结合垫上，将磺胺二甲基嘧啶-BSA偶联物和羊(兔)抗鼠 IgG包被在硝酸纤维素膜的检测区和控制区，充分干燥。

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