肝病诊断蛋白质芯片

1，肝病诊断蛋白质芯片，其特征在于，将病毒性肝炎(Viral Hepatitis) 的多项血液学检测指标相应的抗原、抗体，原发性肝癌(Primary Carcinoma of the liver)的血液学检测指标相应的抗体以及阳性对照、 阴性对照同时高密度点阵于固相载体上，蛋白质通过化学键连接于 固相载体上而被固定，所述固相载体经戊二醛活化的玻璃。
2，根据权利要求1所述的肝病诊断蛋白质芯片，其特征在于，肝病 检测指标分为抗原检测和抗体检测两部分：抗原检测指标包括乙肝 表面抗原(HBsAg)，乙肝e抗原(HbeAg)，甲胎蛋白(Alpha- fetoprotein，AFP)；抗体检测指标包括甲肝病毒抗体(anti-HAV IgG 或IgM)，乙肝表面抗体(HbsAb)，乙肝e抗体(HbeAb)，乙肝核 心抗体(HBcAb)，丙肝病毒抗体(anti-HCV IgG或IgM)，丁肝病 毒抗体(anti-HDV IgG或IgM)，戊肝病毒抗体(anti-HEV IgG或 IgM)，所述在固相载体上点阵的抗体或抗原为纯化的针对上述指标 的特征性抗体或抗原，阴性对照采用牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin，BSA)或者人血清白蛋白(Human Serum Albumin，HSA)， 抗体检测区阳性对照采用人类免疫球蛋白G或M(IgG或IgM)，抗 原检测区阳性对照采用相应的抗原。
3，根据权利要求1、2所述的肝病诊断蛋白质芯片，其特征在于， 采用多样品微阵列生物芯片技术。即是将肝病抗体检测指标相应的 抗原及阳性对照、阴性对照点阵于多样品微阵列生物芯片的同一个 腔室内；肝病抗原检测指标相应的抗体以及阳性对照、阴性对照点 阵于多样品微阵列生物芯片的另一个腔室内，多样品微阵列生物芯 片的每一个腔室均点阵了上述指标的抗原或抗体。
4，根据权利要求1、2所述的肝病诊断蛋白质芯片，其特征在于， 采用抗原—抗体—荧光二抗方法检测病人血清中的病毒性肝炎抗 体，即是将病人血清滴加于芯片表面，病人血清中的待测抗体分别 与固定在芯片上的相对应的抗原结合，洗去未结合的其他物质后， 加入荧光标记的二抗，洗去未结合的二抗，样品点的荧光强度与血 清中抗体浓度大小成正比。
5，根据权利要求1、2所述的肝病诊断蛋白质芯片，其特征在于， 采用双抗体夹心法检测病人血清中病毒性肝炎的抗原和AFP，即是 将病人血清滴加于芯片表面，病人血清中的待测抗原分别与固定在 芯片上的相对应的抗体结合，洗去未结合的其他物质后，加入荧光 标记的另一种抗体，其中，用多种荧光染料标记多种抗体，洗去未 结合的抗体，样品点的荧光强度与血清中抗原浓度大小成正比。
6，肝病诊断蛋白质芯片的制备方法，其特征在于，第一步，根据样 品数目选择合适的多样品微阵列生物芯片，确定点阵的排列方式和 点样位置；第二步，点样针从多孔板取出蛋白质样品(肝病检测多 项指标的相应抗原或抗体以及阳性对照、阴性对照)后直接高密度 点印于固相载体上；第三步，室温过夜或37℃温育1小时，以固定 样品；第四步，利用制作蛋白质芯片的常规方法封闭、洗涤、干燥、 包装、保存。
7，肝病诊断蛋白质芯片的检测方法，其特征在于，进行杂交反应： 第一步，在点好样的芯片上滴加病人血清样品，37℃温育1小时， 使抗原抗体充分反应；第二步，用低浓度钠离子盐为主的洗脱液洗 去多余样品，室温晾干；第三步，加封阻液封阻并再次洗净晾干； 第四步，滴加以封阻液稀释过的荧光标记二抗或荧光标记抗原；第 五步，37℃避光温育30分钟，洗净并室温晾干；第六步，反应结束 后，利用专业的芯片扫描分析仪进行结果的判读和分析。

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