人补体片段C5a基因及其克隆、重组蛋白表达方法

发明专利无效专利

申请号：
CN200910011854.9
IPC分类号：C12N15/11;C12N15/12;C12N15/70
申请日期：
2009-06-04
申请人：
辽宁师范大学

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著录项信息

专利名称	人补体片段C5a基因及其克隆、重组蛋白表达方法
申请号	CN200910011854.9	申请日期	2009-06-04
法律状态	撤回	申报国家	中国
公开/公告日	2010-12-08	公开/公告号	CN101906416A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/11 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/11 DNA或RNA片段；其修饰形成（不用于重组技术的DNA或RNA入C07H 21/00）〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;1;1;;;C;1;2;N;1;5;/;1;2;;;C;1;2;N;1;5;/;7;0查看分类表>
申请人	辽宁师范大学	申请人地址	辽宁省大连市沙河口区黄河路850号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	辽宁师范大学	当前权利人	辽宁师范大学
发明人	李庆伟;吴芬芳;张宁;王华颖
代理机构	暂无	代理人	暂无

摘要

本发明涉及人补体片段C5a在大肠杆菌表达系统中的克隆和表达，以及表达产物的纯化和生物活性。包括：根据大肠杆菌偏爱密码子设计并合成一组引物，通过重叠PCR的方法获得C5a的DNA片段，将其克隆于硫氧还蛋白融合表达载体pET32a中，表达的融合蛋白以胞浆可溶性蛋白的形式存在。通过Ni2+亲和层析、肠激酶酶切和进一步纯化，得到高纯度的C5a蛋白。该蛋白对人中性粒细胞具有明显的趋化活性，能刺激人中性粒细胞呼吸爆发和分泌乳铁蛋白，并能诱导人单核细胞分泌IL-8。

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