一种敲除PLAC8基因的HEK293T细胞系构建方法

发明专利有效专利

申请号：
CN201810600701.7
IPC分类号：C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90;C12N5/10
申请日期：
2018-06-12
申请人：
中南民族大学

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著录项信息

专利名称	一种敲除PLAC8基因的HEK293T细胞系构建方法
申请号	CN201810600701.7	申请日期	2018-06-12
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2018-11-16	公开/公告号	CN108823205A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/113 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/11 DNA或RNA片段；其修饰形成（不用于重组技术的DNA或RNA入C07H 21/00）〔5〕 C12N15/113 调节基因表达的非编码核酸，如反义寡核苷酸〔2010.01〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;1;1;3;;;C;1;2;N;1;5;/;8;5;;;C;1;2;N;1;5;/;9;0;;;C;1;2;N;5;/;1;0查看分类表>
申请人	中南民族大学	申请人地址	湖北省武汉市洪山区民族大道708号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	中南民族大学	当前权利人	中南民族大学
发明人	薛璐;秦绪慧;刘庆华;沈金花;彭勇波;赵平;马立群;于孟飞;陈微微
代理机构	武汉华旭知识产权事务所	代理人	刘天钰

摘要

本发明提供了一种敲除PLAC8基因的HEK293T细胞系构建方法，步骤如下：(1)、sgRNA设计；(2)、重组质粒构建；(3)、细胞转染；(4)、流式细胞术分选阳性细胞；(5)、单细胞培养；(6)、测序检测。本发明利用改进型的CRISPR/Cas9系统从HEK293T细胞中敲除PLAC8基因，操作简便，效果完整而彻底，与HEK293T细胞特性一起构成了理想的细胞模型，用于研究细胞内表观遗传学的改变。本发明还突破了构建敲除细胞系过程中的转染效率低及慢病毒包装两个瓶颈，提供了一种简便高效的构建敲减细胞系的方法。

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