人类病原真菌免疫荧光诊断试剂及其制备方法与应用

1.一种人病原真菌感染免疫荧光诊断试剂，其特征在于：以引发浅层感染及系统性感染的临床病原真菌为抗原，制备多克隆抗体或单克隆抗体，该抗体与粒径0.1-10 nm的荧光纳米量子点材料缩合形成荧光纳米量子点-抗体复合物，既能直接用于检测固定在载体材料上的未知抗原，又能将荧光纳米量子点-抗体复合物包被在载体材料上，进而检测未知抗原；所述荧光纳米量子点材料激发光波长为200–700 nm。
2.根据权利要求1所述的人病原真菌感染免疫荧光诊断试剂，其特征在于：所述的载体材料为硝酸纤维素制备的膜材、片材或棒材；或PVC材料制备的24孔板或96孔板，或平皿，或反应碟。
3.如权利要求1所述的人病原真菌感染免疫荧光诊断试剂的制备方法，其特征包括：
第1、.制备抗体
第1.1、取临床病原真菌感染患者病样标本，分离病原真菌抗原标准株，确定其菌属性；
第1.2、扩大病原真菌的培养，制备可溶性抗原；并以该抗原为致敏源，免疫动物，制备特异性多克隆抗体，或利用体外培养细胞融合技术制备特异性单克隆抗体；
第2、荧光纳米量子点材料和抗体的酰胺脱水缩合
第2.1、.将粒径0.1- 10 nm荧光纳米量子点材料溶于无离子水，制成2 mg /1ml浓度的荧光纳米量子点溶液；
第2.2、.另将1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亚胺（EDC）与无离子水按1 g /1ml浓度比的EDC溶液200 μl与上述第2.1步中的荧光纳米量子点溶液200 μl混合，其中EDC:
量子点材料 = 500:1，然后于4℃摇床反应15-20 分钟，再加入0.5 mg NHSS/1ml无离子水浓度的NHSS溶液200 μl反应30分钟；
第2.3、.然后在上述反应体系中加入第1步制备、纯化的1 mg/ml 抗体100-150 μl反应，置于4℃摇床过夜，即得到酰胺脱水缩合后的荧光纳米量子点-抗体复合物溶液，并可直接用于对未知抗原的检测或包被于载体材料。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述人病原真菌感染免疫荧光诊断试剂的制备方法适用于各类动物抗体与纳米量子点材料的缩合反应。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于：所述的荧光纳米量子点材料是非金属量子点荧光材料、金属量子点荧光材料或贵金属纳米团簇荧光材料，荧光纳米量子点的粒径：0.1- 10 nm。
6.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于：所述荧光纳米量子点材料是激发光波长为200nm – 700 nm波长范围内的自发荧光物质或人工合成的荧光物质。
7.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于：所述的荧光纳米量子点材料的荧光发光色为蓝色、绿色、黄色、橙色或红色。

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