一种稳定敲除abhd16a基因的HEK293细胞系及其构建方法

发明专利有效专利

申请号：
CN202110433097.5
IPC分类号：C12N5/10;C12N15/85;C12N15/55;C12R1/91
申请日期：
2021-04-22
申请人：
河南农业大学

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专利名称	一种稳定敲除abhd16a基因的HEK293细胞系及其构建方法
申请号	CN202110433097.5	申请日期	2021-04-22
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2021-07-09	公开/公告号	CN113088497A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N5/10 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N5/08 （转入C12N 5/071） C12N5/10 经引入外来遗传物质而修饰的细胞，如病毒转化的细胞〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;5;/;1;0;;;C;1;2;N;1;5;/;8;5;;;C;1;2;N;1;5;/;5;5;;;C;1;2;R;1;/;9;1查看分类表>
申请人	河南农业大学	申请人地址	河南省郑州市金水区农业路63号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	河南农业大学	当前权利人	河南农业大学
发明人	许君;徐朝;李小玲;邢国珍;薛继初;郑文明
代理机构	北京棘龙知识产权代理有限公司	代理人	谢静

摘要

本发明涉及一种稳定敲除abhd16a基因的HEK293细胞系及其构建方法，设计靶向abhd16a基因在第三个外显子的sgRNA序列，并构建pHMG‑sgRNA‑sgabhd16a敲除表达载体；将含有靶向abhd16a基因的sgRNA表达载体通过脂质体转染至HEK293细胞，通过CTAB法提取细胞基因组扩增含有靶向sgRNA序列上下游片段，测序检测是否有基因编辑；通过嘌呤霉素筛选后，利用有限稀释法获得除abhd16a基因敲除细胞细胞株，通过免疫印迹法检测敲除细胞株中abhd16a基因敲除后蛋白表达水平。本发明通过CRISPR/Cas9构建HEK293‑ABHD16A‑/‑细胞系，为进一步研究ABHD16A功能和作用机制提供有效的工具。

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