一种综合检测HE4、CA125的试剂盒及其应用

1.一种综合检测HE4、CA125的试剂盒，把两种卵巢癌肿瘤标志物HE4、CA125综合在同一微孔的同一反应体系内，采用时间分辨荧光免疫法检测，其特征在于：该试剂盒包括：分
3+ 3+
别抗HE4、CA125的第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Sm 标记的抗HE4、Eu 标记的抗CA125的第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；荧光增强剂；洗涤液；质控品。
2.根据权利要求1所述的综合检测HE4、CA125的试剂盒，其特征在于：所述的第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的制备方法为：把分别抗HE4、CA125的第一株单克隆抗体混合抗体用包被缓冲液稀释，制得抗体包被液，然后向微孔板的每个孔中分别加入50μl的所述抗体包被液，于37℃包被2小时，然后用生理盐水冲洗微孔板三次，然后再向微孔板的每个孔中分别加入100μl的封板液，于室温封闭2小时，然后用生理盐水冲洗微孔板两次，冷冻干燥，制得混合抗体包被的微孔板。
3.根据权利要求2所述的综合检测HE4、CA125的试剂盒，其特征在于：所述抗体包被液中，分别抗HE4、CA125的第一株单克隆抗体的浓度均为0.014～0.026g/L。
4.根据权利要求1所述的综合检测HE4、CA125的试剂盒，其特征在于：所述荧光增强剂的制备方法为：将1L pH值为3.2、浓度为0.1mol/L的醋酸缓冲液与1g Triton X-100、
5～10μmolβ-萘甲酰三氟丙酮、50～100μmol三辛基氧化磷混合，摇匀，制得荧光增强剂。
5.根据权利要求1所述的综合检测HE4、CA125的试剂盒，其特征在于：所述洗涤液的制备方法为：在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温-20，混匀，制得吐温-20质量百分比浓度为0.05%的PBS溶液，然后用质量百分比浓度为0.2%的NaN3溶液防腐处理，制得洗涤液。
6.根据权利要求1所述的综合检测HE4、CA125的试剂盒，其特征在于：所述质控品为HE4、CA125标准品的混合物。
7.一种权利要求1-6任一所述的综合检测HE4、CA125的试剂盒在综合检测卵巢癌肿瘤标志物HE4、CA125中的应用。
8.根据权利要求7所述的试剂盒在综合检测卵巢癌肿瘤标志物HE4、CA125中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）用分析缓冲液稀释质控品，制成具有系列浓度梯度包含有HE4、CA125标准品的混合溶液；
（2）将待测样品与步骤（1）制备的标准品混合溶液分别加入抗HE4、CA125第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的不同孔中，然后再向孔中加入能分别与HE4、CA125结合的标记有稀土离子螯合物的第二株单克隆抗体混合抗体，之后加入荧光增强剂，进行时间分辨荧光免疫检测，得到发光值；
（3）根据测定的具有系列浓度梯度的包含HE4、CA125标准品的混合溶液的发光值做标准曲线；
（4）以测定的待测样品中的HE4、CA125发光值和标准品中HE4、CA125各自的标准曲线的发光值做比较，得出待测样品中HE4、CA125各自的含量。
9.根据权利要求8所述的试剂盒在综合检测卵巢癌肿瘤标志物HE4、CA125中的应用，其特征在于：所述待测样品为人体血清。

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