一种植物乳杆菌中亚硝酸盐还原酶基因的乳酸克鲁维酵母真核表达方法

发明专利有效专利

申请号：
CN201910118290.2
IPC分类号：C12N15/53;C12N9/06;C12N15/81
申请日期：
2019-02-15
申请人：
大连大学

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专利名称	一种植物乳杆菌中亚硝酸盐还原酶基因的乳酸克鲁维酵母真核表达方法
申请号	CN201910118290.2	申请日期	2019-02-15
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2019-05-10	公开/公告号	CN109735555A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/53 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/11 DNA或RNA片段；其修饰形成（不用于重组技术的DNA或RNA入C07H 21/00）〔5〕 C12N15/52 编码酶或酶原的基因〔5〕 C12N15/53 氧化还原酶（1）〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;5;3;;;C;1;2;N;9;/;0;6;;;C;1;2;N;1;5;/;8;1查看分类表>
申请人	大连大学	申请人地址	辽宁省大连市开发区学府大街10号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	大连大学	当前权利人	大连大学
发明人	张庆芳;李美玉;迟乃玉;王晓辉;于爽;胡善松
代理机构	大连八方知识产权代理有限公司	代理人	朱秀芬

摘要

本发明公开了一种植物乳杆菌中亚硝酸盐还原酶基因的乳酸克鲁维酵母真核表达方法。该方法以植物乳杆菌基因组为模板，设计特异性引物扩增亚硝酸盐还原酶基因序列，在其两端分别引入酶切位点，并亚克隆至表达载体pKLAC2构建得到重组质粒，酶切线性化后电转化乳酸克鲁维酵母，筛选阳性克隆转化子，最后经种子培养和液体发酵培养，取发酵液上清，即得亚硝酸盐还原酶表达产物。本发明制备得到的重组亚硝酸盐还原酶具有较高的酶活，且酶活性稳定，为亚硝酸盐还原酶的工业化生产奠定了基础，可用于食品、医药等领域。

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