一种人类免疫缺陷病毒P24抗原酶联免疫检测试剂盒

1.“一种人类免疫缺陷病毒p24抗原酶联免疫检测试剂盒”，其特征在于该试剂盒包括：
(1)用亲和素预先包被酶标板，并加入生物素标记的抗P24抗原抗体二次包被反应，制成抗体预包被反应条48-96孔；
（2）酶标记抗P24抗原抗体；
（3）阳性对照液1支、阴性对照液1支；
（4）20倍浓缩洗液1瓶；
（5）底物缓冲液甲1瓶；
（6）底物缓冲液乙1瓶；
（7）终止液1瓶组成。
2.一种如权利1所描述的一种“人类免疫缺陷病毒p24抗原酶联免疫检测试剂盒”的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：
（1）利用人类免疫缺陷病毒p24抗原基因片段，通过原核表达或者真核表达制备抗原；
（2）制备抗体的制备和纯化：
用上述重组抗原免疫豚鼠、兔子或者羊，得抗P24抗血清或免疫Balb/C小鼠得阳性鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，筛选阳性克隆株，得腹水；抗血清或腹水用盐析、离子交换层析、或者亲和层析法进行纯化，得纯抗P24抗体，其纯度95%以上，效价大于10万；
（3）用亲和素预先包被酶标板，并加入生物素标记的抗人类免疫缺陷病毒P24单克隆抗体或者多克隆抗体进行二次包被反应，制成抗体预包被反应条48-96孔；
（4）辣根过氧化物酶（HRP）与纯化的抗人类免疫缺陷病毒P24抗体酶联，制成酶标抗体；
（5）配制阳性对照液、阴性对照液；
（6）配制20倍浓缩洗液；
（7）配制底物缓冲液甲；
（8）配制底物缓冲液乙；
（9）配制终止液；
（10）分装上述试剂盒除预包被板其余七种成分，按需要分装在小瓶或尖底离心管中；
（11）检定试剂盒的特异性、灵敏度、精密性、稳定性合格；
（12）组装成成品。
3.根据权利1所述的一种“人类免疫缺陷病毒p24抗原酶联免疫检测试剂盒”，其特征在于其中所述的抗体预包被反应条48-96孔、酶标记P24抗体、阳性对照液为HIV阳性血清，阴性对照液为正常人血清、浓洗涤液为磷酸-Tween-20缓冲液，底物缓冲液甲为H2O2、底物缓冲液乙为3.3’,5.5’-四甲基联苯胺和终止液为（4N H2SO4）。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述亲和素包被固相载体酶标板采用一下方法：
用0.05M的pH值为4.5-5.0的柠檬酸缓冲液配制所需浓度的亲和素包被液，将包被液加入固相载体酶标上，并洗涤、封闭，再加入生物素化的人类免疫缺陷病毒P24单克隆抗体进行反应后，经洗涤、抽湿干燥后用铝箔袋密封。
5.如权利要求2所述方法，其特征在于，所述浓缩洗涤液配方为：含0.02MPBS、
8.9%NaCl和0.5%Tween-20。

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