抗重茬修复三七连作土壤生态菌剂的制备方法

1.抗重茬修复三七连作土壤生态菌剂的制备方法，包括发酵步骤，是将抗重茬病益生菌菌剂的生产菌种接种先分别培养，然后用以玉米粉-马铃薯-豆粕为主要成分的培养基中进行混合扩大发酵培养，其特征在于所述的发酵过程是在30℃、pH值为7.2-7.6的条件下进行的混合好氧发酵过程。生产菌种选用枯草芽孢杆菌CGMCC1.1630(Bacillus subtilis)，地 衣 芽 孢 杆 菌CGMCC1.518(Bacillus licheniformis)，多 粘 芽 孢 杆菌 CGMCC1.516(Paenibacillus polymyxa)，粪 链 球 菌 CGMCC1.101(Streptococcus feaculis)，热 带 假 丝 酵 母 CGMCC2.1773(Candida tropicalis)，淡 紫 拟 青 霉CGMCC3.4034(Paecilomyces lilacinus)，细 黄 链 霉 菌 CGMCC4.399(Streptomyces microflavus)等7株细菌-真菌；将发酵终产物吸附、固定化于用草炭在无氧或少氧、
400℃下炭化的草炭生物炭上而制备成的固体粉末菌剂。
2.根据权利要求1所述的预防三七重茬病益生菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述的二级、三级扩大培养的培养基以玉米粉-马铃薯-豆粕为主要成分的培养基。培养基组成：玉米粉30g，去皮马铃薯20g，豆粕2g，蔗糖2g，硝酸钾1.0g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁
0.5g，氯化钠0.5g，硫酸亚铁0.001g，蒸馏水1000mL，用过饱和氢氧化钙调pH值7.2-7.6。
3.根据权利要求1所述的抗重茬修复三七连作土壤生态菌剂的制备方法，其特征在于所述的发酵过程包括下列工艺步骤：
(1)、将保存的各斜面菌种先用平板划线法活化后，挑取单菌落，分别经试管(约
10mL)、小三角瓶(100-150mL)到大三角瓶(1000-1500mL)逐级扩大培养制成一级种子液(每株菌各1000-1500mL)；
(2)、将(1)步骤中制备的一级种子液进行等质量混合，转接于二级扩大培养液(30-35L)。以5％-10％的接种量接入发酵培养基，进行混合好氧发酵，温度30℃，搅拌转速
150-200r/min，通气压力保持0.05Mpa，发酵培养20-24h，制备成二级种子液； (3)、将(2)步骤中制备的二级种子液转接于三级扩大培养液(300-350L)， 培养基同(2)。以5％-10％的接种量导入发酵培养基进行好氧发酵，温度30℃，搅拌转速200-250r/min，通气压力保持0.05Mpa，发酵培养20-24h，制备成发酵终产物；发酵终点用分光光度法测定以660nm波长吸光值最大(发酵液稀释100倍，用灭菌发酵培养基作空白对照)或用血球计数板显微计数法(稀释100倍)以菌群数最多为发酵终点。
4.根据权利要求3所述的抗重茬修复三七连作土壤生态菌剂的制备方法，其特征在于所述的(1)步骤一级种子的制备过程中，枯草芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，多粘芽孢杆菌，粪链球菌和细黄链霉菌的培养基采用牛肉膏蛋白胨培养基(配方：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，pH值7.2-7.6，水1000mL)；热带假丝酵母和淡紫拟青霉采用马铃薯-蔗糖培养基(配方：去皮马铃薯200g水煮20-30min，双层纱布过滤去渣留液，蔗糖20g，用水补足
1000mL，自然pH值)。培养条件：温度为28-30℃，时间为24-48h。
5.根据权利要求3所述的预防三七重茬病益生菌菌剂的制备方法，其特征在于所述的(1)、(2)、(3)、(4)步骤中的培养基的灭菌条件是：压力0.1Mpa、温度121℃、时间30min。
6.根据权利要求1所述的抗重茬修复三七连作土壤生态菌剂的制备方法，其特征在于所述的吸附菌液的载体选用占发酵终产物总质量4-5倍的草炭生物炭，将发酵终产物-菌液直接喷洒、搅拌于载体上，制备成固体粉末菌剂。
7.根据权利要求1或6所述的发酵菌剂的制备方法，其特征在于将吸附、固定化于草炭生物炭上制成的发酵固体菌剂密封于内衬聚乙烯膜的包装袋内。

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