1.一种生产高纯度的绝经后尿促性腺素的方法,其特征 是:
(a)根据需要的尿促卵泡素和人尿黄体生成素的比例分别称 取适量的其生物效价大于8000IU/mg的尿促卵泡素和其生物效 价大于5000IU/mg的人尿黄体生成素,
(b)将其生物效价大于8000IU/mg的尿促卵泡素和其生物效 价大于5000IU/mg的人尿黄体生成素溶解在合适的缓冲液或无 热源水中,然后将得到的溶液,用有机溶剂沉淀后真空干燥或直 接冷冻干燥,即得到其尿促卵泡素生物效价大于4000IU/mg的 绝经后尿促性腺素。
2.根据权利要求1所述的一种生产高纯度的绝经后尿促性 腺素的方法,其特征在于所述的高纯度的尿促卵泡素是指尿促卵 泡素生物效价大于8000IU/mg、来源于绝经后妇女尿液的尿促 卵泡素蛋白。
3.根据权利要求1所述的一种生产高纯度的绝经后尿促性 腺素的方法,其特征在于所述的高纯度的人尿黄体生成素是指人 尿黄体生成素生物效价大于5000IU/mg、来源于绝经后妇女尿 液的黄体生成素蛋白。
4.根据权利要求1所述的一种生产高纯度的绝经后尿促性 腺素的方法,其特征在于所述的高纯度的绝经后尿促性腺素,是 指尿促卵泡素生物效价大于4000IU/mg,尿促卵泡素与人尿黄 体生成素之比例为1∶1、2∶1、3∶1或其他需要的特定比 例。
5.根据权利要求1所述的一种生产高纯度的绝经后尿促性 腺素的方法,其特征在于所述的溶解用缓冲液,pH值为4.0~ 10.0,是含有碱性金属离子或铵根离子的溶液或稀酸溶液。
6.根据权利要求5所述的一种生产高纯度的绝经后尿促性 腺素的方法,其特征在于所述的碱性金属离子为钾或钠离子。
7.根据权利要求5所述的一种生产高纯度的绝经后尿促性 腺素的方法,其特征在于所述的稀酸溶液为稀磷酸或稀盐酸或稀 醋酸。
8.根据权利要求1所述的一种生产高纯度的绝经后尿促性 腺素的方法,其特征在于所述的干燥方法,先用丙酮或乙醇有机 溶剂沉淀溶液中的蛋白质,然后真空干燥或直接冷冻干燥获得干 物质。
9.根据权利要求1所述的一种生产高纯度的绝经后尿促性腺 素的方法,其特征在于所述的干燥方法,先用丙酮或乙醇有机溶 剂沉淀溶液中的蛋白质,后采用超滤方法浓缩脱盐后冻干。
技术领域:\n本发明涉及一种生产高纯度的绝经后尿促性腺素的方法。\n背景技术:\n经研究证明,发达国家约有15~20%的夫妇不能生育,其 中三分之一不育症的病因归结于排卵功能障碍(无排卵或黄体功 能不健全),通过补充外源性促性腺素可以有效诱导排卵。\n绝经后尿促性腺素是由绝经后妇女尿液中提取的人体内源性 促性腺素,其活性成分为尿促卵泡素和人尿黄体生成素,这两种 激素对卵泡的生长起决定性作用。一个卵泡从开始发育到成熟大 约需要85天,排卵前一周期的黄体期,尿促卵泡素可以促使 颗粒细胞(GC)生长和增殖,并刺激雌激素分泌,人尿黄体生 成素则刺激髓鞘细胞合成雄激素;卵泡中晚期,入尿黄体生成素 和尿促卵泡素协同维持卵泡发育,并为月经中期人尿黄体生成素 峰准备;排卵前人尿黄体生成素峰通过阻断丘内GC的缝隙连 接,诱导卵母细胞完成第一次减数分裂,引起卵泡破裂和GC黄 体化。\n排卵功能障碍的不育妇女使用绝经后尿促性腺素制剂,可以 促使并维持卵泡的发育和成熟,使卵泡发育和受孕达到最佳效 果。但由于不同病人的内源性人尿黄体生成素水平有所不同,临 床上需要尿促卵泡素与人尿黄体生成素比例不同的制剂,对症下 药。\n意大利Serono公司于1960年首先推出尿促卵泡素与人尿黄 体生成素LH之比为1∶1的绝经后尿促性腺素,该品种后来被 美国、英国和中国药典收载。日本等国则有尿促卵泡素与人尿黄 体生成素比例为2∶1或3∶1的绝经后尿促性腺素制剂产品。 所有这些绝经后尿促性腺素产品,尿促卵泡素效价只有60~ 150IU/mg,纯度不到1%,含有大量尿源性的杂蛋白。\n传统的绝经后尿促性腺素生产方法是以1IU/mg左右的绝经 后尿促性腺素粗品为原料,同时纯化尿促卵泡素和人尿黄体生成 素。由于两者的理化性质有很大不同,纯化过程中很难保证尿促 卵泡素和人尿黄体生成素的比例恒定,对比例要求不同的产品, 必需采用不同的方法。为了保证成品中尿促卵泡素和人尿黄体生 成素的比例,最终产品往往需要添加生物活性与人尿黄体生成素 类似的绒促性素(HCG)进行调整。按照传统方法,几乎不可能 获得纯度高、比例又合适的高纯度绝经后尿促性腺素产品。\n发明内容:\n本发明的目的是用从绝经后妇女尿液中提取的高纯度尿促卵 泡素和人尿黄体生成素,生产高纯度绝经后尿促性腺素。\n为了实现上述的目的本发明的解决方法是:本发明的原料为 绝经后健康妇女尿液中提取的高纯度尿促卵泡素蛋白和高纯度人 尿黄体生成素蛋白,高纯度尿促卵泡素是指尿促卵泡素生物效价 大于8000IU/mg,高纯度人尿黄体生成素是指人尿黄体生成素 生物效价大于5000IU/mg,先根据需要的尿促卵泡素与人尿黄 体生成素的比例和高纯度尿促卵泡素、人尿黄体生成素的生物效 价,计算所需高纯度的尿促卵泡素和人尿黄体生成素的重量,按 计算结果分别称取高纯度尿促卵泡素、人尿黄体生成素,并先后 溶解于合适的缓冲液或无热源水中,缓冲液pH值为4.0~10.0, 含有碱性金属离子如钾、钠离子等,或含有铵根离子。也可以是 稀酸溶液,如稀磷酸、稀盐酸或稀醋酸,搅拌使蛋白溶解充分, 溶解充分后的溶液,用适宜的方法干燥,可以是丙酮、乙醇有机 溶剂沉淀溶液中的蛋白质,若是无水乙醇,终浓度为70~ 90%,以80%为优,收集沉淀后脱水、真空干燥,也可以直接冷 冻干燥或用超滤等方法浓缩脱盐后冻干,干燥以冻干为优。经过 以上步骤得到的绝经后尿促性腺素蛋白,尿促卵泡素生物效价大 于每毫克4000国际单位,尿促卵泡素与人尿黄体生成素生物活 性的比例根据需要,可以是1∶1、2∶1或3∶1,也可以是其 他合适的比例,所获得的绝经后尿促性腺素蛋白质,可以按照已 知的方法指标成冻干制剂,制剂含有适当的赋形剂,可以是甘露 醇、乳糖、甘氨酸、葡萄糖、蔗糖或它们的混合物,也可含有适 当的保护剂,如人血白蛋白。\n由于本发明选用了从绝经后妇女尿液中提取得到的高纯度尿 促卵泡素蛋白和高纯度人尿黄体生成素蛋白为原料,生产出绝经 后尿促性腺素,从而确保了绝经后尿促性腺素质量的高纯度。\n具体实施方式:\n下面对本发明的生产高纯度的绝经后尿促性腺素的方法的实 施例作进一步详细描述。\n本实施例中所用的高纯度尿促卵泡素和人尿黄体生成素原 料,来自上海天伟生物制药有限公司,其中尿促卵泡素效价 9250IU/m,尿促卵泡素与人尿黄体生成素之比大于100∶1,人 尿黄体生成素效价8100IU/mg,人尿黄体生成素与尿促卵泡素 之比大于100∶1。\n实施例1:\n尿促卵泡素与人尿黄体生成素之比为1∶1的高纯度绝经后 尿促性腺素生产,称取100毫克高纯度尿促卵泡素,114毫克高 纯度人尿黄体生成素,溶解于50毫升0.01M NH4AC,pH7.0 无热原缓冲液,于12℃下磁力搅拌30分钟,成澄清、透明溶 液,分装于无热原不锈钢盘中,液面高1厘米,-40℃速冻。 溶液冻结后冷冻干燥。24小时后出箱,得干粉208毫克。尿促卵 泡素生物效价为4320IU/mg,人尿黄体生成素生物效价为4450 IU/mg。尿促卵泡素与人尿黄体生成素之比等于0.97∶1。\n实施例2:\n尿促卵泡素与人尿黄体生成素之比为2∶1的高纯度绝经后 尿促性腺素生产,称取100毫克高纯度尿促卵泡素,57毫克高纯 度人尿黄体生成素,溶解于50毫升0.01M NH4AC,pH7.0无 热原缓冲液,于12℃下磁力搅拌30分钟,成澄清、透明溶液, 分装于无热原不锈钢盘中,液面高1厘米,-40℃速冻。溶液 冻结后冷冻干燥。24小时后出箱,得干粉150毫克。尿促卵泡素 生物效价为5920IU/mg,人尿黄体生成素生物效价为2918IU/ mg。尿促卵泡素与人尿黄体生成素之比等于2.02∶1。\n实施例3:\n尿促卵泡素与人尿黄体生成素之比为3∶1的高纯度绝经后 尿促性腺素生产,称取100毫克高纯度尿促卵泡素,38毫克高纯 度人尿黄体生成素,溶解于50毫升0.01M NH4AC,pH7.0无 热原缓冲液,于12℃下磁力搅拌30分钟,成澄清、透明溶液, 分装于无热原不锈钢盘中,液面高1厘米,-40℃速冻。溶液 冻结后冷冻干燥。24小时后出箱,得干粉132毫克。尿促卵泡素 生物效价为6750IU/mg,人尿黄体生成素生物效价为2300IU/ mg。尿促卵泡素与人尿黄体生成素之比等于2.94∶1。\n以上实施例可以进一步说明本发明,但本发明覆盖的范围应 不限于此,其条件可以在本发明的范围内作各种变化。
法律信息
- 2022-08-30
专利权有效期届满
IPC(主分类): C07K 14/59
专利号: ZL 02136493.1
申请日: 2002.08.14
授权公告日: 2006.03.22
- 2006-03-22
- 2004-06-02
- 2003-04-30
引用专利(该专利引用了哪些专利)
序号 | 公开(公告)号 | 公开(公告)日 | 申请日 | 专利名称 | 申请人 | 该专利没有引用任何外部专利数据! |
被引用专利(该专利被哪些专利引用)
序号 | 公开(公告)号 | 公开(公告)日 | 申请日 | 专利名称 | 申请人 | 该专利没有被任何外部专利所引用! |