白细胞介素-2基因整合表达载体的构建及定位方法

发明专利无效专利

申请号：
CN201010199334.8
IPC分类号：C12N15/66;C12N15/26;C12N15/63;C12Q1/68;C12Q1/02;G01N21/64
申请日期：
2010-06-12
申请人：
西北农林科技大学

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法律信息

引证文献

著录项信息

专利名称	白细胞介素-2基因整合表达载体的构建及定位方法
申请号	CN201010199334.8	申请日期	2010-06-12
法律状态	撤回	申报国家	中国
公开/公告日	2010-12-22	公开/公告号	CN101921797A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/66 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/63 使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节〔5〕 C12N15/66 经裂解和连接将基因插入载体中以形成重组载体的一般方法；非功能性衔接子或连接物（如含限制性核酸内切酶顺序的衔接子）的使用〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;6;6;;;C;1;2;N;1;5;/;2;6;;;C;1;2;N;1;5;/;6;3;;;C;1;2;Q;1;/;6;8;;;C;1;2;Q;1;/;0;2;;;G;0;1;N;2;1;/;6;4查看分类表>
申请人	西北农林科技大学	申请人地址	陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	西北农林科技大学	当前权利人	西北农林科技大学
发明人	曹斌云;安小鹏;杨莎;王韵斐;侯金星;陈秋菊;崔易虹;王建刚;宋宇轩
代理机构	西安恒泰知识产权代理事务所	代理人	李郑建

摘要

人白细胞介素-2基因整合表达载体的构建，以人静脉血为试验材料，提取总RNA，反转录成cDNA，针对人白介素2基因的编码区，设计一对含酶切位点的特异性引物，分别引入白介素-2基因的编码区的ApaI酶切位点和SalI酶切位点，PCR扩增并克隆到pMDTM19-TVector载体中；以pBC1质粒为模板，扩增β-酪蛋白5′同源短臂和β-酪蛋白3′同源长臂，以pIRES质粒为模板，扩增新霉素抗性筛选标记基因序列；以pBluskm为载体骨架，分别与5′同源短臂、3′同源长臂和新霉素抗性筛选标记基因序列相连，构建重组载体5′-3′-E-neor，双酶切含IL-2基因的pMDTM19-TVector载体，凝胶回收目的片段并与5′-3′-E-neor相连，构建IL-2基因整合表达载体；利用脂质体将构建的IL-2基因整合表达载体转染胎儿成纤维细胞，定位在β-酪蛋白基因序列中。

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