一种利用CRISPR-Cas9系统对间充质干细胞定点敲入外源基因的方法

发明专利有效专利

申请号：
CN201911233881.0
IPC分类号：C12N5/10;C12N15/864;C12N15/90;C12N15/12;A61K35/28;A61P19/02;A61P29/00;A61P19/08
申请日期：
2019-12-05
申请人：
北京兴元和济生命医学科技有限公司

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专利名称	一种利用CRISPR-Cas9系统对间充质干细胞定点敲入外源基因的方法
申请号	CN201911233881.0	申请日期	2019-12-05
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2020-04-03	公开/公告号	CN110951693A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N5/10 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N5/08 （转入C12N 5/071） C12N5/10 经引入外来遗传物质而修饰的细胞，如病毒转化的细胞〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;5;/;1;0;;;C;1;2;N;1;5;/;8;6;4;;;C;1;2;N;1;5;/;9;0;;;C;1;2;N;1;5;/;1;2;;;A;6;1;K;3;5;/;2;8;;;A;6;1;P;1;9;/;0;2;;;A;6;1;P;2;9;/;0;0;;;A;6;1;P;1;9;/;0;8查看分类表>
申请人	北京兴元和济生命医学科技有限公司	申请人地址	北京市门头沟区美安路7号德山大厦5层变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	北京兴元和济生命医学科技有限公司	当前权利人	北京兴元和济生命医学科技有限公司
发明人	崔俊生;王本旭;刘树涛
代理机构	北京方安思达知识产权代理有限公司	代理人	陈琳琳;武玥

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种利用CRISPR‑Cas9系统对间充质干细胞定点敲入外源基因的方法。所述方法包括以下步骤：1)构建包含外源基因的载体质粒，并且针对人的AAVS1位点设计构建AAVS1sgRNA/Cas9质粒；2)将包含外源基因的载体质粒和AAVS1sgRNA/Cas9质粒混合，将混合物转染间充质干细胞，将外源基因定点敲入间充质干细胞基因的AAVS1位点。本发明根据人的IL1R1、IL1R2、IL1Ra、TNFR1、TNFR2基因，构建基于CRISPR‑Cas9系统的同源重组质粒，然后将携带CRISPR‑Cas9质粒，将含外源基因的质粒共转染受体细胞，从而获得能够分泌表达外源基因所对应蛋白的间充质干细胞。获得的间充质干细胞持续表达上述蛋白，抑制体内IL‑1β或TNF‑α与其受体结合，从而抑制体内炎症进行，缓解或治疗类风湿性关节炎或骨关节炎。

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