一种治疗风湿病的药物组合物及制备方法和检测方法

1.一种治疗风湿病的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：制川乌
40.25重量份、制草乌70.25重量份、秦艽40.25重量份、白芷70.25重量份、甘草40.25重量份、粉萆薢120.5重量份、穿山龙80.5重量份、薏苡仁120.5重量份、炙天南星40.25重量份、红花120.5重量份、当归40.25重量份、徐长卿185.75重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：以上12味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉I；制川乌、制草乌、秦艽加6-10倍体积份的水，用盐酸调PH值为3～4，煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，得滤液I备用；徐长卿加3-6倍体积份的水蒸馏，蒸馏液在2-10℃条件下冷藏至析出白色结晶，滤过，得滤液II，结晶自然干燥，备用，将滤液II及药渣与其余红花等五味加6-10倍体积份的水煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，得滤液III，将滤液III与滤液I合并，浓缩成50℃时相对密度为1.20～
1.40的稠膏；稠膏加入细粉I，混匀，干燥，粉碎，得细粉II，加入白色结晶，再加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的制剂。
3.如权利要求2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：以上12味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉I；制川乌、制草乌、秦艽加8倍体积份的水，用盐酸调PH值为
3～4，煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液I备用；徐长卿加5倍体积份的水蒸馏，蒸馏液在2-10℃条件下冷藏至析出白色结晶，滤过，得滤液II，结晶自然干燥，备用，将滤液II及药渣与其余红花等五味加8倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液III，将滤液III与滤液I合并，浓缩成50℃时相对密度为1.30的稠膏；稠膏加入细粉I，混匀，干燥，粉碎，得细粉II，加入白色结晶，再加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的口服固体制剂。
4.如权利要求1所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：
含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以
50-80∶20-50∶1-5∶0-0.5比例的甲醇-水-氯仿-三乙胺为流动相；检测波长
240nm，理论板数按乌头碱峰计算不低于1500；对照品溶液的制备：精密称定乌头碱对照品适量，加二氯甲烷制成50-100μg/ml的溶液；供试品溶液的制备：精密称取相当于生药含量1/60-1/125的制剂内容物，加硅藻土适量，混匀，加入乙醚50ml，氨试液2ml，回流提取
1小时，放冷过滤，用乙醚洗涤滤器及残渣，洗液并入滤液；滤液置分液漏斗中加15ml水洗两次，合并水液，加乙醚20ml洗涤，弃去水层，合并乙醚，挥干乙醚，用二氯甲烷溶解转移至
5ml容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，即得；测定方法：以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；
鉴别方法：A、取相当于生药含量1/30-1/65制剂内容物，加乙醚50ml，振摇，静置30分钟，过滤，滤液蒸干；残渣加醋酸乙酯1ml溶解；另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各
4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2-4∶1-3比例的30～60℃石油醚-乙醚为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
B、取相当于生药含量1/25-1/55的制剂内容物，加乙醚30ml，加热回流提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl；分别点于同一硅胶G薄层板上，以
7.5-11.5∶0.3-0.7比例的60～90℃石油醚-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
5.如权利要求4所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：
含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以
65∶35∶3∶0.2比例的甲醇-水-氯仿-三乙胺为流动相；检测波长240nm，理论板数按乌头碱峰计算不低于1500；对照品溶液的制备：精密称定乌头碱对照品适量，加二氯甲烷制成80μg/ml的溶液；供试品溶液的制备：精密称取取相当于生药含量1/120的制剂内容物，加硅藻土适量，混匀，加入乙醚50ml，氨试液2ml，回流提取1小时，放冷过滤，用乙醚洗涤滤器及残渣，洗液并入滤液；滤液置分液漏斗中加15ml水洗两次，合并水液，加乙醚20ml洗涤，弃去水层，合并乙醚，挥干乙醚，用二氯甲烷溶解转移至5ml容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，即得；测定方法：以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；
鉴别方法：A、取相当于生药含量1/60的制剂内容物，加乙醚50ml，振摇，静置30分钟，过滤，滤液蒸干；残渣加醋酸乙酯1ml溶解；另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各
4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶2比例的30～60℃石油醚-乙醚为展开剂，在
25℃以下展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
B、取相当于生药含量1/50的制剂内容物，加乙醚30ml，加热回流提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl；分别点于同一硅胶G薄层板上，以
9.5∶0.5比例的60～90℃石油醚-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

一种治疗风湿病的药物组合物及制备方法和检测方法\n[0001] 发明领域\n[0002] 本发明涉及一种药物组合物及制备方法和质量控制方法，特别涉及一种治疗风湿病的药物组合物及制备方法和质量控制方法。\n背景技术\n[0003] 风湿病是风湿性疾病的简称，泛指影响骨、关节、肌肉及其周围软组织，如滑囊、肌腱、筋膜、血管、神经等一大组疾病。风湿性疾病包含弥漫性结缔组织病(如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合症、炎性肌病、硬皮病、混合性结缔组织病、白塞病等)、系统性血管炎、脊柱关节病(如强直性脊柱炎、反应性关节炎、瑞特综合症等)、骨关节炎、骨质疏松症等上百种以上的以累及骨、关节等结缔组织为主的疾病总称。\n[0004] 各种风湿性疾病特别是自身免疫性风湿病，往往有全身多系统和多器官损害，具有繁复的症状，常因复杂多变的临床表现成为疑难杂症。风湿病的病程有些慢性、迁延不愈，有些爆发起病，其诊断和治疗相当烦琐和复杂。如果风湿性疾病得不到正确合理的治疗，关节，肌肉，骨骼等病变会导致功能障碍和畸形，留下终身残疾，甚至危及生命，后果极其严重。\n[0005] 目前西医治疗风湿病主要应用非甾抗炎药、免疫抑制剂及激素等药物，虽然能够暂时止痛，缓解症状，起到一定的治疗作用，然而却不能从根本上治疗风湿性疾病，而且长期用药还可能破坏人体免疫系统，最终出现不可逆转的胃、肝、肾等内脏器官严重损伤，其产生的副作用绝对不容忽视。\n[0006] 祖国医学长期以来对“风湿病”的治疗有丰富的经验，积累了许多行之有效的验方，相较西医而言，祖国医学疗效确切、使用方便、不良反应小等优势明显，因此更适宜在临床上推广应用。\n发明内容\n[0007] 本发明目的在于提供一种药物组合物；本发明另一目的在于提供一种治疗风湿病的药物组合物；本发明的第三个目的在于提供该药物组合物的制备方法；本发明的第四个目的在于提供该药物组合物的质量控制方法。\n[0008] 本发明目的是通过如下技术方案实现：\n[0009] 本发明药物组合物的原料药组成为：制川乌30-80重量份、制草乌30-80重量份、秦艽30-80重量份、白芷30-80重量份、甘草30-80重量份、粉萆薢70-130重量份、穿山龙\n70-130重量份、薏苡仁70-130重量份、天南星(炙)30-80重量份、红花70-130重量份、白芍30-80重量份、五加皮120-200重量份。\n[0010] 本发明药物组合物的原料药组成还可以为：制川乌30-80重量份、制草乌30-80重量份、秦艽30-80重量份、白芷30-80重量份、甘草30-80重量份、粉萆薢70-130重量份、穿山龙70-130重量份、薏苡仁70-130重量份、天南星(炙)30-80重量份、红花70-130重量份、当归30-80重量份、徐长卿120-200重量份。\n[0011] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：制川乌30-50重量份、制草乌60-80重量份、秦艽30-50重量份、白芷60-80重量份、甘草30-50重量份、粉萆薢110-130重量份、穿山龙70-90重量份、薏苡仁110-130重量份、天南星(炙)30-50重量份、红花110-130重量份、当归30-50重量份、徐长卿170-200重量份。\n[0012] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：制川乌40.25重量份、制草乌70.25重量份、秦艽40.25重量份、白芷70.25重量份、甘草40.25重量份、粉萆薢120.5重量份、穿山龙80.5重量份、薏苡仁120.5重量份、天南星(炙)40.25重量份、红花120.5重量份、当归\n40.25重量份、徐长卿185.75重量份。\n[0013] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：制川乌45.25重量份、制草乌65.25重量份、秦艽45.25重量份、白芷65.25重量份、甘草45.25重量份、粉萆薢115.5重量份、穿山龙85.5重量份、薏苡仁115.5重量份、天南星(炙)45.25重量份、红花115.5重量份、当归\n45.25重量份、徐长卿175.75重量份。\n[0014] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：制川乌60-80重量份、制草乌30-50重量份、秦艽60-80重量份、白芷30-50重量份、甘草60-80重量份、粉萆薢70-90重量份、穿山龙110-130重量份、薏苡仁70-90重量份、天南星(炙)60-80重量份、红花70-90重量份、当归60-80重量份、徐长卿120-150重量份。\n[0015] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：制川乌70.25重量份、制草乌40.25重量份、秦艽70.25重量份、白芷40.25重量份、甘草70.25重量份、粉萆薢80.5重量份、穿山龙120.5重量份、薏苡仁80.5重量份、天南星(炙)70.25重量份、红花80.5重量份、当归\n70.25重量份、徐长卿125.75重量份。\n[0016] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：制川乌65.25重量份、制草乌45.25重量份、秦艽65.25重量份、白芷45.250重量份、甘草65.25重量份、粉萆薢85.5重量份、穿山龙115.25重量份、薏苡仁85.5重量份、天南星(炙)65.25重量份、红花85.5重量份、当归\n65.25重量份、徐长卿145.75重量份。\n[0017] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：制川乌30-40重量份、制草乌30-40重量份、秦艽70-80重量份、白芷70-80重量份、甘草30-40重量份、粉萆薢70-80重量份、穿山龙120-130重量份、薏苡仁120-130重量份、天南星(炙)30-40重量份、红花70-80重量份、当归70-80重量份、徐长卿180-200重量份。\n[0018] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：制川乌35.25重量份、制草乌35.25重量份、秦艽75.25重量份、白芷75.25重量份、甘草35.25重量份、粉萆薢75.5重量份、穿山龙125.5重量份、薏苡仁125.5重量份、天南星(炙)35.25重量份、红花75.5重量份、当归\n75.25重量份、徐长卿190.75重量份。\n[0019] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：制川乌51-59重量份、制草乌51-59重量份、秦艽51-59重量份、白芷51-59重量份、甘草51-59重量份、粉萆薢100-109重量份、穿山龙100-109重量份、薏苡仁100-109重量份、天南星(炙)51-59重量份、红花100-109重量份、当归51-59重量份、徐长卿155-165重量份。\n[0020] 本发明药物组合物的原料药组成优选为：制川乌53.25重量份、制草乌53.25重量份、秦艽53.25重量份、白芷53.25重量份、甘草53.25重量份、粉萆薢106.5重量份、穿山龙106.5重量份、薏苡仁106.5重量份、天南星(炙)53.25重量份、红花106.5重量份、当归53.25重量份、徐长卿159.75重量份。\n[0021] 本发明药物组合物制备方法为：以上12味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉I；制川乌、制草乌、秦艽加6-10倍体积份的水，用盐酸调PH值为3～4，煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，得滤液I备用；徐长卿加3-6倍体积份的水蒸馏，蒸馏液在2-10℃条件下冷藏至析出白色结晶，滤过，得滤液II，结晶自然干燥，备用，将滤液II及药渣与其余红花等五味加6-10倍体积份的水煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，得滤液III，将滤液III与滤液I合并，浓缩成50℃时相对密度为1.20～1.40的稠膏；稠膏加入细粉I，混匀，干燥，粉碎，得细粉II，加入白色结晶，再加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的制剂。\n[0022] 本发明药物组合物制备方法优选为：以上12味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉I；\n制川乌、制草乌、秦艽加8倍体积份的水，用盐酸调PH值为3～4，煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液I备用；徐长卿加5倍体积份的水蒸馏，蒸馏液在2-10℃条件下冷藏至析出白色结晶，滤过，得滤液II，结晶自然干燥，备用，将滤液II及药渣与其余红花等五味加8倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液III，将滤液III与滤液I合并，浓缩成50℃时相对密度为1.30的稠膏；稠膏加入细粉I，混匀，干燥，粉碎，得细粉II，加入白色结晶，再加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的口服固体制剂。\n[0023] 本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：\n[0024] 含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以\n50-80：20-50：1-5：0-0.5比例的甲醇-水-氯仿-三乙胺为流动相；检测波长240nm，理论板数按乌头碱峰计算不低于1500；\n[0025] 对照品溶液的制备：精密称定乌头碱对照品适量，加二氯甲烷制成50-100μg/ml的溶液；\n[0026] 供试品溶液的制备：精密称取相当于生药含量1/120的制剂内容物，加硅藻土适量，混匀，加入乙醚50ml，氨试液2ml，回流提取1小时，放冷过滤，用乙醚洗涤滤器及残渣，洗液并入滤液；滤液置分液漏斗中加15ml水洗两次，合并水液，加乙醚20ml洗涤，弃去水层，合并乙醚，挥干乙醚，用二氯甲烷溶解转移至5ml容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，即得；\n[0027] 测定方法：以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；\n[0028] 本发明药物组合物每单位制剂含制川乌、制草乌以乌头碱C34H47NO11计，不得少于\n0.02mg；\n[0029] 鉴别方法：A、取相当于生药含量1/60的制剂内容物，加乙醚50ml，振摇，静置30分钟，过滤，滤液蒸干；残渣加醋酸乙酯1ml溶解；另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2-4：1-3比例的石油醚(30～60℃)-乙醚为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；\n[0030] B、取相当于生药含量1/50的制剂内容物，加乙醚30ml，加热回流提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl；分别点于同一硅胶G薄层板上，以\n7.5-11.5：0.3-0.7比例的石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。\n[0031] 本发明药物组合物质量控制方法优选如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：\n[0032] 含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以\n65：35：3：0.2比例的甲醇-水-氯仿-三乙胺为流动相；检测波长240nm，理论板数按乌头碱峰计算不低于1500；\n[0033] 对照品溶液的制备：精密称定乌头碱对照品适量，加二氯甲烷制成80μg/ml的溶液；\n[0034] 供试品溶液的制备：精密称取取相当于生药含量1/120的制剂内容物，加硅藻土适量，混匀，加入乙醚50ml，氨试液2ml，回流提取1小时，放冷过滤，用乙醚洗涤滤器及残渣，洗液并入滤液；滤液置分液漏斗中加15ml水洗两次，合并水液，加乙醚20ml洗涤，弃去水层，合并乙醚，挥干乙醚，用二氯甲烷溶解转移至5ml容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，即得；\n[0035] 测定方法：以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；\n[0036] 本发明药物组合物每单位制剂含制川乌、制草乌以乌头碱C34H47NO11计，不得少于0.02mg；\n[0037] 鉴别方法：A、取相当于生药含量1/60的制剂内容物，加乙醚50ml，振摇，静置30分钟，过滤，滤液蒸干；残渣加醋酸乙酯1ml溶解；另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3：2比例的石油醚(30～60℃)-乙醚为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；\n[0038] B、取相当于生药含量1/50的制剂内容物，加乙醚30ml，加热回流提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl；分别点于同一硅胶G薄层板上，以9.5：\n0.5比例的石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；\n供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。\n[0039] 本发明药物组合物祛风燥湿、活血通络、消肿止痛，补肾益肝、壮骨强身，能从根本上治疗风湿性疾病，诸如慢性关节炎，痛风性关节炎，坐骨神经痛，腰椎间盘(脱)突出，肥大脊椎炎，椎管狭窄，跟骨刺，大骨节病以及老年性腰腿痛，软组织损伤以及其他各类疼痛等症。尤其适宜治疗骨质增生，风湿性关节炎或风湿痛。本发明药物组合物经实验研究证实：有效成份可通过神经系统间接刺激脑垂体，使肾上腺皮质机能亢进，皮质激素分泌增加，抗组织胺分泌以止痛；方中制川乌、制草乌、秦艽对风湿，类风湿因子有较强的亲和力，可以直接杀伤致病因子，祛风除湿，湿经止痛，消肿排脓；抑制关节滑膜细胞增殖，阻断病情持续发展；改善人体微循环、抑制炎症反应，减轻疼痛；迅速增强骨髓的免疫机能，激活骨髓健康循环系统，消除风湿，软化骨刺。\n[0040] 本发明组合物相比现有制剂骨刺片具备很好的药效，并且本发明所述的范围在可以实现本发明药效的同时，经过筛选，意外的发现，在组合物的某些范围内，具备更为突出的药效。\n[0041] 本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品相比其他方法测定的产品在药效上表现的更为稳定。\n[0042] 以下实验例和实施例用于进一步说明本发明但不限于本发明\n[0043] 实验例1白芷的薄层鉴别方法试验\n[0044] 1、本发明鉴别方法A中样品溶液制备中乙醚浸泡时间的优选：\n[0045] 取本发明药物制剂5g共5份，用乙醚浸泡不同时间，时时振摇，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，测定其中欧前胡素含量，结果见下表：\n[0046] 表1 乙醚浸泡时间优选实验结果\n[0047] \n浸泡时间(min) 10 20 30 40 50\n欧前胡素含量(mg) 65.3 84.2 97.6 97.7 97.6\n[0048] 由表1可以看出，乙醚浸提30min就可以将其中的欧前胡素提取完全，所以本实验优选浸提时间为30min。\n[0049] 2、本发明鉴别方法A中展开剂用量配比的优选：\n[0050] 取供试品溶液5μl，点于不同的硅胶G薄层板上，分别用石油醚(30-60℃)-乙醚配比为2：3、3：3、4∶3、3：2、2：1的展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视，观察各薄层板上供试品各斑点展开的效果，结果见下表：\n[0051] 表2 展开剂用量配比优选实验结果\n[0052] \n展开剂配比 2：3 3：3 4∶3 3：2 2：1\n展开效果 很差 差 较差 好 差\n[0053] 从表2可以看出展开剂配比为3：2时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾、主斑点分离不好等现象。\n[0054] 3、本发明鉴别方法A中样品溶液点样量的优选：\n[0055] 取供试品溶液1μl、2μl、3μl、4μl，对照品溶液4μl，点于同一硅胶G薄层板上，用石油醚(30-60℃)-乙醚配比为(3：2)的展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视，观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：\n[0056] 表3 样品溶液点样量优选实验结果\n[0057] \n点样量 1μl 2μl 3μl 4μl\n效果 供试品在相应对照品位置供试品在相应对照品位置供试品在相应对照品位置供试品在相应对照品位置无斑点 斑点颜色很浅 斑点颜色浅 斑点显色效果好\n[0058] 从表3可以看出供试品点样量在4μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。\n[0059] 4、阴性对照试验\n[0060] 取缺白芷的阴性样品，照上述鉴别方法A中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。\n[0061] 实验例2当归的鉴别方法试验\n[0062] 1、本发明鉴别方法B中样品溶液制备中加乙醚30ml，加热回流与超声提取方法的优选：\n[0063] 取本发明药物制剂5g共5份，加乙醚30ml，加热回流与超声提取30min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(9.5：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，考察薄层板供试品斑点的分离与显色情况，结果见下表：\n[0064] 表4 样品溶液制备提取方法优选实验结果\n[0065] \n提取方法 回流提取 超声提取显色效果不好\n供试品斑点的分离与显色情况 分离与显色情况好 \n[0066] 由表4可以看出，回流提取薄层斑点效果比超声提取效果好。\n[0067] 2、本发明鉴别方法B中展开剂用量配比的优选：\n[0068] 取供试品溶液5μl，点于不同的硅胶G薄层板上，分别用石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯配比为7.5：0.3、8.5：0.4、9.5：0.5、10.5：0.6、11.5：0.7的展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，观察各薄层板上供试品斑点展开的效果，结果见下表：\n[0069] 表5 展开剂用量配比优选实验结果\n[0070] \n展开剂配比 7.5：0.3 8.5：0.4 9.5：0.5 10.5：0.6 11.5：0.7\n展开效果 很差 差 好 差 很差\n[0071] 从表5可以看出展开剂配比为9.5：0.5时，供试品溶液展开效果最好，没有出现显色不清楚、主斑点分离不好、拖尾等现象。\n[0072] 3、本发明鉴别方法B中样品溶液点样量的优选：\n[0073] 取供试品溶液1μl、2μl、3μl、4μl、5μl，对照品溶液5μl，点于同一硅胶G薄层板上，用用石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯配比为9.5：0.5的展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：\n[0074] 表6 样品溶液点样量优选实验结果\n[0075] \n点样量 2μl 3μl 4μl 5μl\n效果 供试品在相应对照品位置供试品在相应对照品位置供试品在相应对照品位置供试品在相应对照品位置无斑点 斑点显色很浅 斑点显色浅 斑点显色效果好\n[0076] 从表6可以看出供试品点样量在5μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。\n[0077] 4、阴性对照试验\n[0078] 取缺当归的阴性样品，照上述鉴别方法B中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应荧光斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。\n[0079] 实验例3乌头碱的含量测定方法试验\n[0080] 采用高效液相法测定本发明药物中的乌头碱的含量，以完善本发明的质量检测方法。\n[0081] 1、供试品溶液的提取方法的选择\n[0082] (1)提取溶媒量的考察：\n[0083] 精密称取本品本发明药物制剂三份，每份5g，分别加硅藻土适量，混匀，分别加入乙醚30ml、50ml、100ml，制备供试品溶液。按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。\n[0084] 以每克药品中乌头碱的含量为指标确定加入乙醚量。测定结果见下表：\n[0085] 表7加乙醚试验结果\n[0086] \n[0087] 以上结果表明：加乙醚50ml、100ml所得每克本发明药物乌头碱含量基本相同，根据实际需要选用加乙醚50ml。\n[0088] (2)回流时间考察：\n[0089] 精密称取本发明药物三份，每份5g，分别回流提取30分钟、1小时、2小时，制备供试品溶液，按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。\n[0090] 以每克药品中乌头碱的含量为指标确定提取时间。测定结果见下表：\n[0091] 表8 回流时间试验结果\n[0092] \n[0093] 以上结果表明：提取时间1小时、2小时所得每克本发明药品乌头碱含量基本相同，根据实际需要选用1小时。\n[0094] 2、含量测定方法的方法学考察\n[0095] 对本发明药物所采用的含量检测方法，从线性关系、稳定性、精密度、重现性、回收率等方面进行了相关方法学考察，具体结果如下：\n[0096] (1)线性关系考察 取对照品溶液(4mg→50ml)摇匀，分别精密吸取4、6、8、10、\n12、14μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，并绘制标准曲线，表明乌头碱在\n0.32μg-1.12μg间呈线性关系，其回归方程为：\n[0097] Area＝1250.08121*Amt-15.982788(r＝0.99965)\n[0098] \n[0099] (2)稳定性试验 对照品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表：\n[0100] 表9稳定性试验结果\n[0101] \n[0102] (3)精密度试验 精密吸取供试品溶液10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差<2％，结果见下表：\n[0103] 表10精密度试验结果\n[0104] \n[0105] (4)重现性试验 按正文方法，取同一剂型的本发明药物五份，对每份进行测定，求得相对标准偏差<2％，结果见下表：\n[0106] 表11重现性试验结果\n[0107] \n[0108] (5)回收率试验 精密称取已知含量的同一剂型的本发明药物2.5g，再分别精密称取乌头碱对照品0.50mg，按供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见下表：\n[0109] 表12回收率试验结果\n[0110] \n[0111] 从表12试验结果可以看出，本发明药物所采用的含量测定方法其线性关系、稳定性、精密度、重现性等均良好，能够有效控制本发明药物质量。\n[0112] 实验例4 药物对大鼠佐剂性关节炎的影响\n[0113] 将大鼠随机分为五组即\n[0114] 药物组I(制川乌40.25g、制草乌70.25g、秦艽40.25g、白芷70.25g、甘草40.25g、粉萆薢120.5g、穿山龙80.5g、薏苡仁120.5g、天南星(炙)40.25g、红花120.5g、当归\n40.25g、徐长卿185.75g)\n[0115] 药物组II(制川乌45.25g、制草乌65.25g、秦艽45.25g、白芷65.25g、甘草\n45.25g、粉萆薢115.5g、穿山龙85.5g、薏苡仁115.5g、天南星(炙)45.25g、红花115.5g、当归45.25g、徐长卿175.75g)\n[0116] 药物组III(制川乌53.25g、制草乌53.25g、秦艽53.25g、白芷53.25g、甘草\n53.25g、粉萆薢106.5g、穿山龙106.5g、薏苡仁106.5g、天南星(炙)53.25g、红花106.5g、当归53.25g、徐长卿159.75g)\n[0117] 药物组IV制川乌53.25g、制草乌53.25g、秦艽53.25g、白芷53.25g、甘草53.25g、粉萆薢106.5g、穿山龙106.5g、薏苡仁106.5g、天南星(炙)53.25g、红花106.5g、白芍\n53.25g、五加皮159.75g\n[0118] 将药物组I、药物组II分别与药物组III比较祛风除湿作用。取大鼠60只，体重\n160±20g，随机分为3组，大鼠于乙醚麻醉下，以Freund’s完全佐剂0.05毫升注射于右后足垫内，第8日开始给药治疗，一日3次，连续给药15天，停药后观察3天，观察不同时间足肿胀值，结果见表13。\n[0119] 表13 药物对大鼠佐剂性关节炎的影响(X±SD)\n[0120] \n1 *5 *1\n4.0 2.0 3.0\n± ± ±\n天8 10. 81. 62.\n1 1 1 1\n3 *7 *7\n4.0 3.0 2.0\n± ± ±\n天5 28. 68. 29.\n1 0 0 0\n4 *7 *6\n2.0 2.0 2.0\n± ± ±\n天2 78. 59. 79.\n1 0 0 0\n7 *5 *8\n3.0 3.0 3.0\n± ± ±\n天0 09. 59. 89.\n1 0 0 0\n5 *8 *7\n2.0 2.0 2.0\n± ± ±\n天 19. 90. 01.\n8 0 1 1\n8 *1 *6\n1.0 3.0 3.0\n± ± ±\n天 89. 01. 81.\n2 0 1 1\n9 *9 *8\n3.0 2.0 2.0\n± ± ±\nh 62. 92. 53.\n3 1 1 1\n)\n只\n(\ngk/\ng\n量 5. 5. 5.\n剂 0 0 0\nI\nI I\n组 组\n别 物 物 物\n组 药 药 药\n[0121] \n193\n.0\n±5\n0.\n 1\n14\n.0\n±0\n 8.0\n62\n.0\n±5\n 8.0\n93.\n0\n±98\n .0\n2\n2.\n0\n±\n39\n .0\n5\n1.0\n±\n89.\n 0\n04\n.0\n±5\n2.\n 1\n 5.0\nVI\nII 组\nI 物\n组 药\n[0122] 注：*与药物组III相比P<0.05\n[0123] 表13结果表明：本发明药物组合物I、II、IV胶囊剂祛风湿功能与药物组III有显著差异(P<0.05)，药物组I、II、IV对大鼠佐剂性关节炎的影响明显高于药物III。\n[0124] 实验例5疗效实验\n[0125] 1、性别与年龄\n[0126] 男性239例，女性261例，最小16岁，最大65岁，以20-50岁年龄组最为多见。\n[0127] 2、病程\n[0128] 最短者25天，最长者20年，三年以内最多，共500例。\n[0129] 治疗方法：按说明书服用，伴月为一疗程，一般需服2-3个疗程，共分为两组，本发明药物组IV(制川乌53.25g、制草乌53.25g、秦艽53.25g、白芷53.25g、甘草53.25g、粉萆薢106.5g、穿山龙106.5g、薏苡仁106.5g、天南星(炙)53.25g、红花106.5g、白芍\n53.25g、五加皮159.75g)200例、本发明药物组III(制川乌53.25g、制草乌53.25g、秦艽\n53.25g、白芷53.25g、甘草53.25g、粉萆薢106.5g、穿山龙106.5g、薏苡仁106.5g、天南星(炙)53.25g、红花106.5g、当归53.25g、徐长卿159.75g)200例和对照药物组(骨刺片)100例。\n[0130] 3、疗效判定标准：\n[0131] (1)临床治愈\n[0132] 症状全部消失，功能活动恢复正常，主要参考指标(血沉，抗链0，类风湿因子)正常。\n[0133] (2)显效\n[0134] 全部症状消失或主要症状消除，关节功能基本恢复，能参加正常工作和劳动，主要参考指标(各种理化检查)基本正常。观察结果：\n[0135] 表14总疗效统计.分析\n[0136] \n[0137] 本发明组与对照药物组比较P<0.05\n[0138] 表14结果表明本发明药物组III与本发明药物组IV治疗效果显著，有效率分别为93％、93.5％，治愈率分别为25.5％、25.0％。\n[0139] (3)疗程与疗效比较\n[0140] 表15疗效与疗程比较分析表\n[0141] \n[0142] \n[0143] 本发明药物组与对照药物组比较P<0.05\n[0144] 表15结果表明本发明药物组III与本发明药物组IV与对照组药物比较对本病治疗效果不论病程长短，疗效均有显著提高。\n[0145] (4)主症指标与疗效比较\n[0146] 表16主症指标与疗效比较表\n[0147] \n[0148] 本发明组与对照药物组比较P<0.05\n[0149] 从表16治疗前后症状对比分析，可见本发明药物组III与本发明药物组IV与对照组药物比较对消除关节疼痛，减轻红肿热，恢复运动机能等方面均有显著疗效，可使抗0和血沉下降或恢复正常，部分类风湿因子试验转阴，对有环形红斑或硬结者，有消除作用。\n[0150] 4、副作用\n[0151] 本观察组200例使用本药均无副作用。\n[0152] 下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果\n具体实施方式\n[0153] 实施例1\n[0154] 制川乌40.25g、制草乌70.25g、秦艽40.25g、白芷70.25g、甘草40.25g、粉萆薢\n120.5g、穿山龙80.5g、薏苡仁120.5g、天南星(炙)40.25g、红花120.5g、当归40.25g、徐长卿185.75g\n[0155] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成丸剂。\n[0156] 实施例2\n[0157] 制川乌45.25g、制草乌65.25g、秦艽45.25g、白芷65.25g、甘草45.25g、粉萆薢\n115.5g、穿山龙85.5g、薏苡仁115.5g、天南星(炙)45.25g、红花115.5g、当归45.25g、徐长卿175.75g\n[0158] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成片剂。\n[0159] 实施例3\n[0160] 制川乌70.25g、制草乌40.25g、秦艽70.25g、白芷40.25g、甘草70.25g、粉萆薢\n80.5g、穿山龙120.5g、薏苡仁80.5g、天南星(炙)70.25g、红花80.5g、当归70.25g、徐长卿\n125.75g\n[0161] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成颗粒剂。实施例4\n[0162] 制川乌65.25g、制草乌45.25g、秦艽65.25g、白芷45.250g、甘草65.25g、粉萆薢\n85.5g、穿山龙115.25g、薏苡仁85.5g、天南星(炙)65.25g、红花85.5g、当归65.25g、徐长卿145.75g\n[0163] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成注射液。\n[0164] 实施例5\n[0165] 制川乌35.25g、制草乌35.25g、秦艽75.25g、白芷75.25g、甘草35.25g、粉萆薢\n75.5g、穿山龙125.5g、薏苡仁125.5g、天南星(炙)35.25g、红花75.5g、当归75.25g、徐长卿190.75g\n[0166] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成合剂。\n[0167] 实施例6\n[0168] 制川乌53.25g、制草乌53.25g、秦艽53.25g、白芷53.25g、甘草53.25g、粉萆薢\n106.5g、穿山龙106.5g、薏苡仁106.5g、天南星(炙)53.25g、红花106.5g、当归53.25g、徐长卿159.75g\n[0169] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成胶囊剂。\n[0170] 实施例7\n[0171] 制川乌40.25g、制草乌70.25g、秦艽40.25g、白芷70.25g、甘草40.25g、粉萆薢\n120.5g、穿山龙80.5g、薏苡仁120.5g、天南星(炙)40.25g、红花120.5g、当归40.25g、徐长卿185.75g\n[0172] 以上12味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉I；制川乌、制草乌、秦艽加8倍体积份的水，用盐酸调PH值为3～4，煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液I备用；徐长卿加5倍体积份的水蒸馏，蒸馏液在？条件下冷藏至析出白色结晶，滤过，得滤液II，结晶自然干燥，备用，将滤液II及药渣与其余红花等五味加8倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液III，将滤液III与滤液I合并，浓缩成50℃时相对密度为1.30的稠膏；稠膏加入细粉I，混匀，干燥，粉碎，得细粉II，加入白色结晶，再加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的软胶囊。\n[0173] 实施例8\n[0174] 制川乌45.25g、制草乌65.25g、秦艽45.25g、白芷65.25g、甘草45.25g、粉萆薢\n115.5g、穿山龙85.5g、薏苡仁115.5g、天南星(炙)45.25g、红花115.5g、当归45.25g、徐长卿175.75g\n[0175] 以上12味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉I；制川乌、制草乌、秦艽加8倍体积份的水，用盐酸调PH值为3～4，煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液I备用；徐长卿加5倍体积份的水蒸馏，蒸馏液在2-10℃条件下冷藏至析出白色结晶，滤过，得滤液II，结晶自然干燥，备用，将滤液II及药渣与其余红花等五味加8倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液III，将滤液III与滤液I合并，浓缩成50℃时相对密度为1.30的稠膏；稠膏加入细粉I，混匀，干燥，粉碎，得细粉II，加入白色结晶，再加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的浓缩水丸。\n[0176] 实施例9\n[0177] 制川乌70.25g、制草乌40.25g、秦艽70.25g、白芷40.25g、甘草70.25g、粉萆薢\n80.5g、穿山龙120.5g、薏苡仁80.5g、天南星(炙)70.25g、红花80.5g、当归70.25g、徐长卿\n125.75g\n[0178] 以上12味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉I；制川乌、制草乌、秦艽加8倍体积份的水，用盐酸调PH值为3～4，煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液I备用；徐长卿加5倍体积份的水蒸馏，蒸馏液在2-10℃条件下冷藏至析出白色结晶，滤过，得滤液II，结晶自然干燥，备用，将滤液II及药渣与其余红花等五味加8倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液III，将滤液III与滤液I合并，浓缩成50℃时相对密度为1.30的稠膏；稠膏加入细粉I，混匀，干燥，粉碎，得细粉II，加入白色结晶，再加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的片剂。\n[0179] 实施例10\n[0180] 制川乌65.25g、制草乌45.25g、秦艽65.25g、白芷45.250g、甘草65.25g、粉萆薢\n85.5g、穿山龙115.25g、薏苡仁85.5g、天南星(炙)65.25g、红花85.5g、当归65.25g、徐长卿145.75g\n[0181] 以上12味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉I；制川乌、制草乌、秦艽加8倍体积份的水，用盐酸调PH值为3～4，煎煮1次，每次3小时，合并煎液，滤过，得滤液I备用；徐长卿加5倍体积份的水蒸馏，蒸馏液在2-10℃条件下冷藏至析出白色结晶，滤过，得滤液II，结晶自然干燥，备用，将滤液II及药渣与其余红花等五味加8倍体积份的水煎煮1次，每次3小时，合并煎液，滤过，得滤液III，将滤液III与滤液I合并，浓缩成50℃时相对密度为1.25的稠膏；稠膏加入细粉I，混匀，干燥，粉碎，得细粉II，加入白色结晶，再加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的散剂。\n[0182] 实施例11\n[0183] 制川乌35.25g、制草乌35.25g、秦艽75.25g、白芷75.25g、甘草35.25g、粉萆薢\n75.5g、穿山龙125.5g、薏苡仁125.5g、天南星(炙)35.25g、红花75.5g、当归75.25g、徐长卿190.75g\n[0184] 以上12味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉I；制川乌、制草乌、秦艽加6倍体积份的水，用盐酸调PH值为3～4，煎煮3次，每次1小时，合并煎液，滤过，得滤液I备用；徐长卿加4倍体积份的水蒸馏，蒸馏液在2-10℃条件下冷藏至析出白色结晶，滤过，得滤液II，结晶自然干燥，备用，将滤液II及药渣与其余红花等五味加6倍体积份的水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，滤过，得滤液III，将滤液III与滤液I合并，浓缩成50℃时相对密度为1.35的稠膏；稠膏加入细粉I，混匀，干燥，粉碎，得细粉II，加入白色结晶，再加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的颗粒剂。\n[0185] 实施例12\n[0186] 制川乌53.25g、制草乌53.25g、秦艽53.25g、白芷53.25g、甘草53.25g、粉萆薢\n106.5g、穿山龙106.5g、薏苡仁106.5g、天南星(炙)53.25g、红花106.5g、当归53.25g、徐长卿159.75g\n[0187] 以上12味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉I；制川乌、制草乌、秦艽加8倍体积份的水，用盐酸调PH值为3～4，煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液I备用；徐长卿加6倍体积份的水蒸馏，蒸馏液在2-10℃条件下冷藏至析出白色结晶，滤过，得滤液II，结晶自然干燥，备用，将滤液II及药渣与其余红花等五味加6倍体积份的水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，得滤液III，将滤液III与滤液I合并，浓缩成50℃时相对密度为1.28的稠膏；稠膏加入细粉I，混匀，干燥，粉碎，得细粉II，加入白色结晶，再加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的胶囊剂。\n[0188] 实施例13本发明制剂的质量控制方法\n[0189] 取实施例2内容物进行含量测定：\n[0190] 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以65：35：3：\n0.2比例的甲醇-水-氯仿-三乙胺为流动相；检测波长240nm，理论板数按乌头碱峰计算不低于1500；\n[0191] 对照品溶液的制备：精密称定乌头碱对照品适量，加二氯甲烷制成80μg/ml的溶液；\n[0192] 供试品溶液的制备：精密称取本发明药物组合物片剂素片粉末2.5g，加硅藻土适量，混匀，加入乙醚50ml，氨试液2ml，回流提取1小时，放冷过滤，用乙醚洗涤滤器及残渣，洗液并入滤液；滤液置分液漏斗中加15ml水洗两次，合并水液，加乙醚20ml洗涤，弃去水层，合并乙醚，挥干乙醚，用二氯甲烷溶解转移至5ml容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，即得；\n[0193] 测定方法：以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；\n[0194] 本发明药物组合物每单位片剂含制川乌、制草乌以乌头碱C34H47NO11计，不得少于\n0.02mg。\n[0195] 实施例14本发明制剂的质量控制方法\n[0196] 取实施例7内容物进行鉴别：\n[0197] A、取本发明药物组合物软胶囊剂内容物5g，加乙醚50ml，振摇，静置30分钟，过滤，滤液蒸干；残渣加醋酸乙酯1ml溶解；另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，30～60℃时以3：2比例的石油醚-乙醚为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；\n[0198] B、取本发明药物组合物软胶囊剂内容物56g，加乙醚30ml，加热回流提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl；分别点于同一硅胶G薄层板上，60～\n90℃时以9.5：0.5比例的石油醚-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。\n[0199] 实施例15本发明制剂的质量控制方法\n[0200] 取实施例11内容物进行鉴别和含量测定：\n[0201] 含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以\n65：35：3：0.2比例的甲醇-水-氯仿-三乙胺为流动相；检测波长240nm，理论板数按乌头碱峰计算不低于1500；\n[0202] 对照品溶液的制备：精密称定乌头碱对照品适量，加二氯甲烷制成80μg/ml的溶液；\n[0203] 供试品溶液的制备：精密称取本发明药物组合物颗粒剂内容物2.5g，加硅藻土适量，混匀，加入乙醚50ml，氨试液2ml，回流提取1小时，放冷过滤，用乙醚洗涤滤器及残渣，洗液并入滤液；滤液置分液漏斗中加15m l水洗两次，合并水液，加乙醚20ml洗涤，弃去水层，合并乙醚，挥干乙醚，用二氯甲烷溶解转移至5ml容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，即得；\n[0204] 测定方法：以上溶液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；\n[0205] 本发明药物组合物每单位颗粒剂含制川乌、制草乌以乌头碱C34H47NO11计，不得少于0.02mg；\n[0206] 鉴别方法：A、取本发明药物组合物颗粒剂内容物5g，加乙醚50m l，振摇，静置30分钟，过滤，滤液蒸干；残渣加醋酸乙酯1ml溶解；另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，30～60℃时以3：2比例的石油醚-乙醚为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；\n[0207] B、取本发明药物组合物颗粒剂6g，加乙醚30ml，加热回流提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl；分别点于同一硅胶G薄层板上，60～90℃时以\n9.5：0.5比例的石油醚-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。\n[0208] 实施例16\n[0209] 制川乌53.25g 制草乌53.25g 秦艽53.25g 白芷\n[0210] 53.25g 甘草53.25g 粉萆薢106.5g 穿山龙106.5g 薏苡仁\n[0211] 106.5g 天南星(炙)53.25g 红花106.5g 当归53.25g 徐长卿\n[0212] 159.75g\n[0213] 以上十二味，白芷、薏苡仁、当归粉碎成细粉；制川乌、制草乌、秦艽加水(用盐-\n酸调PH值为34)煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液备用；徐长卿加水蒸馏，蒸馏液冷藏至析出白色结晶，滤过，结晶自然干燥，备用，滤液及药渣与其余红花等五味加水煎煮两次，每次两小时，合并煎液，滤过，滤液与上述滤液合并，浓缩成相对密度为1.28～\n1.30(50℃)的稠膏，加入上述白芷等的细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，加入上述白色结晶，混匀制成1000粒，即得。\n[0214] 【鉴别】\n[0215] (1)取本品5g，加乙醚50ml，振摇，静置30分钟，过滤，滤液蒸干。残渣加醋酸乙酯1ml溶解。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层-\n板上，以石油醚(3060℃)-乙醚(3：2)为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。\n[0216] (2)取本品6g，加乙醚30ml，加热回流提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，-\n吸取上述两种溶液各5μl。分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(6090℃)-醋酸乙酯(9.5：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。\n[0217] 【含量测定】照高效液相色谱法，色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以甲醇-水-氯仿-三乙胺(65：35：3：0.2)为流动相；检测波长240nm。\n理论板数按乌头碱峰计算不低于1500。\n[0218] 对照品溶液的制备：精密称定乌头碱对照品适量，加二氯甲烷制成80μg/ml的溶液。\n[0219] 供试品溶液的制备：精密称取本品胶囊内容物2.5g，加硅藻土适量，混匀，加入乙醚50ml，氨试液2ml，回流提取1小时，放冷过滤，用乙醚洗涤滤器及残渣，洗液并入滤液。滤液置分液漏斗中加15ml水洗两次，合并水液，加乙醚20ml洗涤，弃去水层，合并乙醚，挥干乙醚，用二氯甲烷溶解转移至5ml容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，即得。\n[0220] 测定方法以上溶液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定即得。本品中每粒含制川乌、制草乌以乌头碱(C34H47NO11)计，不得少于0.02mg。\n[0221] 实施例17\n[0222] 制川乌53.25g、制草乌53.25g、秦艽53.25g、白芷53.25g、甘草53.25g、粉萆薢\n106.5g、穿山龙106.5g、薏苡仁106.5g、天南星(炙)53.25g、红花106.5g、白芍53.25g、五加皮159.75g\n[0223] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成胶囊剂。\n[0224] 实施例18\n[0225] 制川乌40.25g、制草乌70.25g、秦艽40.25g、白芷70.25g、甘草40.25g、粉萆薢\n120.5g、穿山龙80.5g、薏苡仁120.5g、天南星(炙)40.25g、红花120.5g、白芍40.25g、五加皮185.75g\n[0226] 本药物组合物加入常规辅料，通过常规工艺制成丸剂。