一种广谱农药检测金标试纸及方法

1.一种广谱农药检测试纸，试纸具有检测线、对照线和指示剂，其特征在于：
试纸的检测线上设有胆碱酯酶，对照线上设有捕获因子；
指示剂上连接有捕获标志A和B，其中捕获标志A可被胆碱酯酶捕获，捕获标志B可被对照线上的捕获因子捕获；其中：
捕获标志A和有机磷或氨基甲酸酯类农药竞争性与胆碱酯酶结合，捕获标志A为有机磷或氨基甲酸酯类农药、有机磷或氨基甲酸酯类农药的特征性残基、或有机磷或氨基甲酸酯类农药的偶联物；
捕获标志B为蛋白类高分子、多肽聚合物、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮，对应的捕获因子为其抗体；
或捕获标志B为寡核苷酸序列，对应的捕获因子为其互补序列。
2.一种广谱农药检测试纸，试纸具有检测线、对照线和指示剂，其特征在于：
试纸的检测线上设有胆碱酯酶，对照线上设有捕获因子；
指示剂上连接有捕获标志A和B，其中捕获标志A可被胆碱酯酶捕获，捕获标志B可被对照线上的捕获因子捕获；其中：
捕获标志A和有机磷或氨基甲酸酯类农药竞争性与胆碱酯酶结合，捕获标志A为有机磷或氨基甲酸酯类农药、有机磷或氨基甲酸酯类农药的特征性残基、或有机磷或氨基甲酸酯类农药的偶联物；
捕获标志B和其捕获因子构成亲和体系对。
3.根据权利要求1或2所述的广谱农药检测试纸，其特征在于：指示剂为物理指示剂。
4.根据权利要求1或2所述的广谱农药检测试纸，其特征在于：有机磷或氨基甲酸酯类农药选自对硫磷、杀螟硫磷、甲基对硫磷、乐果、水胺硫磷、马拉硫磷、毒死蜱。
5.根据权利要求1或2所述的广谱农药检测试纸，其特征在于：有机磷或氨基甲酸酯类农药的特征性残基选自双硫基。
6.根据权利要求2所述的广谱农药检测试纸，其特征在于：捕获标志B和其捕获因子构成的亲和体系对为生物素-亲和素体系。
7.根据权利要求3所述的广谱农药检测试纸，其特征在于：指示剂为胶体金。
8.一种农药快速检测方法，包括对样品进行处理，之后取样滴加在广谱农药检测试纸上，根据指示剂的指示情况，确定检测结果，其中，广谱农药检测试纸如权利要求1～7任意一项所述。

一种广谱农药检测金标试纸及方法\n技术领域\n[0001] 本发明涉及一种农药残留检测试纸及方法，特别涉及一种广谱农药检测金标试纸及方法。\n背景技术\n[0002] 现有常用的农药有有机磷和氨基甲酸酯两大类，具体的各类多达40种，常用的也有近20种。使用农药是有效减少作物病虫害的一种方法，但是不合理的使用农药会导致农药残留，威胁人们的食品安全。\n[0003] 随着人们对食品安全的日益重视，越来越多的人开始关注农药残留。传统的农药残留检测方法有色谱法，这种方法的检测准确性高，但是耗时长，对操作和仪器的要求高，无法满足现场快速检测的需要。\n[0004] 基于抗体-抗原的免疫检测方法主要是利用抗体对抗原的特异性识别，并与之结合，具有高度精确、灵敏、特异的特点。同时对操作的要求低，可以较为快速的给出定性检测结果。基于这一原理开发的农药快速检测试剂有很多种。但是农药的种类繁多，而免疫检测方法的高特异性导致其只能检测出某一种特定的农药。如果要实现全面检测，则需要使用\n20种以上的农药免疫检测试剂，这将极大地增加农药快速检测的成本，导致农药的全面检测实际上不可能实现。大量的农药无法检测出来，存在潜在的风险。\n发明内容\n[0005] 本发明的目的在于提供一种广谱的农药检测金标试纸，该试纸可以快速检测出几乎全部有机磷和氨基甲酸酯类农药。\n[0006] 本发明所采取的技术方案是：\n[0007] 一种广谱农药检测试纸，试纸具有检测线、对照线和指示剂，\n[0008] 试纸的检测线上设有胆碱酯酶，对照线上设有捕获因子；\n[0009] 指示剂上连接有捕获标志A和B，其中捕获标志A可被胆碱酯酶捕获，捕获标志B可被对照线上的捕获因子捕获。\n[0010] 优选的，指示剂为物理指示剂。\n[0011] 优选的，捕获标志A和有机磷或氨基甲酸酯类农药竞争性与胆碱酯酶结合。\n[0012] 优选的，捕获标志A为有机磷或氨基甲酸酯类农药，有机磷或氨基甲酸酯类农药的特征性残基，或有机磷或氨基甲酸酯类农药的偶联物。\n[0013] 优选的，捕获标志B为蛋白类高分子、多肽聚合物、易降解的高分子聚合物，对应的捕获因子为其抗体；\n[0014] 或捕获标志B为寡核苷酸序列，对应的捕获因子为其互补序列；\n[0015] 或捕获标志B和其捕获因子构成亲和体系对。\n[0016] 优选的，有机磷或氨基甲酸酯类农药选自对硫磷、杀螟硫磷、甲基对硫磷、乐果、水胺硫磷、马拉硫磷、毒死蜱及其偶联物。有机磷或氨基甲酸酯类农药特征性残基选自双硫基。\n[0017] 优选的，捕获标志B和其捕获因子构成亲和体系对为生物素-亲和素体系。\n[0018] 优选的，指示剂为胶体金。\n[0019] 一种农药快速检测方法，包括对样品进行处理，之后取样滴加在广谱农药检测试纸上，根据指示的指示情况下，确定检测结果，其中，广谱农药检测试纸如上所述。\n[0020] 本发明的有益效果是：\n[0021] 本发明的农药检测试纸，对各种有机磷和氨基甲酸酯类农药均具有较好的检测能力，检测结果快，非常适用于蔬果的现场快速农药残留检测。\n[0022] 本发明的农药检测试纸，制备工艺简单，检测结果可靠，可以实现低成本的农药残留检测。\n具体实施方式\n[0023] 一种广谱农药检测试纸，试纸具有检测线、对照线和指示剂，\n[0024] 试纸的检测线上设有胆碱酯酶，对照线上设有捕获因子；\n[0025] 指示剂上连接有捕获标志A和B，其中捕获标志A可被胆碱酯酶捕获，捕获标志B可被对照线上的捕获因子捕获。\n[0026] 捕获标志A和B可以分别直接或间接连接在指示剂上。或者捕获标志A连接在捕获标志B上，然后再与指示剂连接。一般而言，当捕获标志A和B均为小分子时，捕获标志A和B均独立连接在指示剂上可以避免相互干扰，获得更好的检测结果。而当捕获标志B为大分子时，捕获标志A可以先连接在捕获标志B上，然后捕获标志B再与指示剂相连接。\n[0027] 本发明试纸的检测原理如下：\n[0028] 有机磷和氨基甲酸酯类农药均可与胆碱酯酶结合并抑制其活性，有机磷和氨基甲酸酯类农药、指示剂上的捕获标志A竞争性与胆碱酯酶结合。因此，当样品中含有较多量的有机磷或氨基甲酸酯类农药时，捕获标志A就较少的与胆碱酯酶结合，在检测线（T线）上聚集的指示剂就相对较少，检测信号，如颜色就相对较弱；当指示剂扩散到对照线（C线）时，指示剂上的捕获标志B被C线上的捕获因子捕捉，指示剂在C线上聚集，给出相应的检测信号。\n反之，当样品中的有机磷和氨基甲酸酯类农药含量较少，甚至是无时，则T线和C线上均会具有可观的能被检测到的信号。这样仅使用一种试纸条就实现了有机磷和氨基甲酸酯类农药的广谱检测。\n[0029] 优选的，指示剂为物理指示剂。这种指示剂可以给出可视的信号，如颜色改变。这样就可以直观的判断出检测结果。\n[0030] 优选的，捕获标志A和有机磷或氨基甲酸酯类农药竞争性与胆碱酯酶结合。\n[0031] 优选的，捕获标志A为有机磷或氨基甲酸酯类农药，有机磷或氨基甲酸酯类农药的特征性残基，或有机磷或氨基甲酸酯类农药的偶联物。有机磷或氨基甲酸酯类农药偶联物，包括有机磷或氨基甲酸酯类农药的特征性残基偶联其他生物大分子或有机化合物形成的大分子化合物，这些生物大分子可以是为蛋白类高分子、多肽聚合物、易降解的高分子聚合物，其作用在于使有机磷或氨基甲酸酯类农药易于与指示剂或另一个捕获标志偶联；此外，有机磷或氨基甲酸酯类农药的偶联物还包括有机磷或氨基甲酸酯类农药的衍生物，该衍生物同样可以与胆碱酯酶结合。\n[0032] 优选的，捕获标志B为蛋白类高分子、多肽聚合物、易降解的高分子聚合物，对应的捕获因子为其抗体；蛋白类高分子优选为白蛋白，更佳的，白蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵清白蛋白。易降解的高分子聚合物选自羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等为本领域技术人员所熟知的载体。\n[0033] 或捕获标志B为寡核苷酸序列，对应的捕获因子为其互补序列；\n[0034] 或捕获标志B和其捕获因子构成亲和体系对。\n[0035] 优选的，有机磷或氨基甲酸酯类农药选自对硫磷、杀螟硫磷、甲基对硫磷、乐果、水胺硫磷、马拉硫磷、毒死蜱及其偶联物。有机磷或氨基甲酸酯类农药特征性残基选自双硫基。\n[0036] 优选的，捕获标志B和其捕获因子构成亲和体系对为生物素-亲和素体系。\n[0037] 优选的，指示剂被集中捕获在检测线和对照线时，可以直接显示出信号，或经过一定处理后显示出信号。指示剂可以是物理指示剂、化学指示剂或荧光指示剂，特别的，物理显示剂为胶体金时，可以给出肉眼可见的颜色变化。荧光指示剂可以是各种荧光蛋白。荧光蛋白可以在紫外光的照射上发出可见的荧光信号。\n[0038] 一种农药快速检测方法，包括对样品进行处理，之后取样滴加在广谱农药检测试纸上，根据指示的指示情况下，确定检测结果，其中，广谱农药检测试纸如上所述。\n[0039] 下面结合实施例，进一步说明本发明的技术方案。\n[0040] 实施例1\n[0041] 一种广谱农药检测金标试纸，其指示剂为胶体金，胶体金连接的捕获标志A为杀螟硫磷，捕获标志B为BSA，杀螟硫磷偶联在BSA上，BSA偶联在胶体金上；T线上负载有胆碱酯酶，C线上负载有抗BSA抗体。\n[0042] 实施例2\n[0043] 一种广谱农药检测金标试纸，其指示剂为胶体金，胶体金连接的捕获标志A为水胺硫磷-卵清白蛋白偶联物，捕获标志B为生物素，水胺硫磷-卵清白蛋白偶联物和生物素分别连接在在胶体金上；T线上负载有胆碱酯酶，C线上负载有链霉亲和素。\n[0044] 实施例3\n[0045] 一种广谱农药检测金标试纸，其指示剂为胶体金，胶体金连接的捕获标志A为毒死蜱，毒死蜱通过连接基团连接在胶体金上，捕获标志B为核酸序列AAAAAAAAAA，直接连接在胶体金上，T线上负载有胆碱酯酶，C线上固定有核酸序列TTTTTTTTTTTTTTTT。\n[0046] 实施例4\n[0047] 一种广谱农药检测金标试纸，其指示剂为胶体金，胶体金连接的捕获标志A为甲基对硫磷，捕获标志B为生物素酰化的胰岛素，捕获标志A和捕获标志B分别连接在胶体金上；T线上负载有胆碱酯酶，C线上负载有以亲和素为配体的琼脂糖。\n[0048] 实施例5\n[0049] 一种广谱农药检测金标试纸，其指示剂为红色荧光蛋白，红色荧光蛋白直接连接的捕获标志A为乐果，捕获标志B为N-乙酰氨基葡萄糖，T线上负载有胆碱酯酶，C线上负载有麦胚凝集素。\n[0050] 下面结合实验，进一步说明本发明的技术方案。\n[0051] 分别配置不同浓度的农药水溶液，使用实施例1的广谱农药检测金标试纸进行检测，确定其检测限，检测结果如下：\n[0052] 表1、不同农药的检测限\n[0053]\n农药名称 最低检出限（mg/kg） 农药名称 最低检出限（mg/kg）\n甲胺磷 0.2 久效磷 0.2\n毒死蜱 0.2 涕灭威 0.1\n乐果 0.5 克百威 0.1\n敌百虫 0.05 敌敌畏 0.05\n马拉硫磷 0.5 灭多威 0.1\n[0054] 从表1可知，本发明的检测试纸具有较好的检出限，可以满足蔬果样品的农药残留快速检测。\n[0055] 分别使用蔬果样品中常见的杂质，配置浓度为10mg/kg标准溶液，使用实施例1的广谱农药检测金标试纸进行检测，以确定杂质对检测结果的干扰情况。检测结果如表2所示：\n[0056] 表2、不同杂质的检测结果\n[0057]\n杂质类型 浓度 测试结果 杂质类型 浓度 测试结果\n维生素A 10mg/kg 阴性 β-胡萝卜素 10mg/kg 阴性\n维生素B1 10mg/kg 阴性 叶绿素 10mg/kg 阴性\n维生素B2 10mg/kg 阴性 叶黄素 10mg/kg 阴性\n维生素B3 10mg/kg 阴性 葡萄糖 10mg/kg 阴性\n维生素C 10mg/kg 阴性 果糖 10mg/kg 阴性\n氯化钠 10mg/kg 阴性      \n[0058] 从表2的实验数据可知，本发明的检测试纸具有较好多的特异性，蔬果样品中常见的物质对检测结果均无影响。