一种用于治疗牙周炎的乳香凝胶及其制备方法与应用

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一种用于治疗牙周炎的乳香凝胶及其制备方法与应用\n技术领域\n[0001] 本发明涉及中医药技术领域，具体而言，涉及一种用于治疗牙周炎的乳香凝胶及其制备方法与应用。\n背景技术\n[0002] 牙周炎是口腔两大疾病之一，患病率居于龋病之上，是导致成年人牙齿脱失的主要原因。2005-2007年第三次全国口腔健康流行病学调查显示，35～44岁和65～77岁两个年龄组牙周健康率仅为14.5％和14.1％。随着我国社会人口老龄化日益严重，越来越多的中老年人群面临着牙周炎治疗和维护的巨大需求，牙周炎将成为突出的保健问题。\n[0003] 牙周炎不仅损害人的咀嚼功能、发音功能和美观功能，还与全身健康和疾病有着双向的密切关联。研宄证实，治疗和控制牙周炎有利于糖尿病的治疗，牙周炎逐渐被视为糖尿病的第六并发症；此外，牙周炎还是某些全身疾病如心血管疾病、妊娠并发症、呼吸系统疾病等的危险因素等，这些均成为21世纪医学研宄的重点方向。\n[0004] 现代医学认为牙周炎是细菌侵袭和宿主防御之间的动态平衡被打破所引起的慢性感染性疾病，细菌在其发病中扮演了重要角色，但全身因素的作用也不容忽视，一些全身因素如内分泌失调、免疫缺陷等均可降低宿主的防御能力和修复能力，从而导致疾病的发生或加剧病情的进展。目前临床实践中对牙周炎主要采取局部治疗，如洁治、刮治、牙周手术等，即通过机械方法辅以外用药物控制局部致病菌，尚无有效措施改善宿主免疫状态和抗病能力，部分病因较复杂、病情较重的牙周炎患者常规治疗后存在疗效差、病情易复发的难题。因此，本领域仍需要开发一种疗效好、副作用小的用于治疗牙周炎的制剂。\n[0005] 有鉴于此，特提出本发明。\n发明内容\n[0006] 本发明涉及一种乳香凝胶，其原料组份包括：\n[0007] 第一组份：乳香水提物5～20体积份、水性凝胶基质80～95体积份；\n[0008] 第二组份：占所述第一组份0.5～3w/v％的丹酚酸B。\n[0009] 上述丹酚酸B以纯品计。\n[0010] 乳香(Frankincense)是橄榄科植物卡氏乳香树、齿叶乳香树皮部渗出的树脂，性温，味辛苦，功效活血止痛，消肿生肌。在中医古籍中47首外用生肌散类方中，单味药第一。\n主要成分乳香酸类化合物(boswellic acids)具有抗炎、抗肿瘤活性。\n[0011] 丹酚酸B(salvianolic acid B，Sal B)是我国中药丹参的水溶性提取物之一，分子式为C36H30O16，相对分子质量为718.62；有研究表明丹酚酸B主要具有促增殖、抗氧化和细胞保护等作用，广泛用于心血管疾病，且对神经细胞具有保护作用，还能防止肝纤维化。近年来研究还发现，丹酚酸B能防治糖皮质激素引起的大鼠骨质疏松，进一步研究表明其能促进间充质干细胞成骨分化。然而本领域并未有丹酚酸B与乳香水提物配合治疗牙周疾病的报道。\n[0012] 本发明将乳香和丹酚酸B配伍制成凝胶剂，使用方便，能够有效控制牙周炎，促进牙周创面的愈合，具有良好的辅助治疗作用可推广至患病率极高的牙周炎病人群中，这部分人群占到总人群的80％以上，具有较高的应用价值。且该药剂无明显毒副作用，可用作牙周炎的预防用药。\n[0013] 优选的，如上所述的乳香凝胶，其原料组份包括：\n[0014] 第一组份：乳香水提物10～15体积份、水性凝胶基质85～90体积份；\n[0015] 第二组份：占所述第一组份1～2w/v％的丹酚酸B。\n[0016] 优选的，如上所述的乳香凝胶，按质量份数计，所述水性凝胶基质包括：卡波姆0.7～1.3份、三乙醇胺1.2～2.0份、甘油5～15份以及水70～90份；\n[0017] 更优选的，按质量份数计，所述水性凝胶基质包括：卡波姆0.9～1.1份、三乙醇胺\n1.5～1.7份、甘油8～12份以及水75～85份。\n[0018] 优选的，如上所述的乳香凝胶，所述水性凝胶基质还包括杀菌防腐剂0.05～0.15份；\n[0019] 优选的，如上所述的乳香凝胶，所述杀菌防腐剂为羟苯乙酯。\n[0020] 优选的，如上所述的乳香凝胶，所述乳香水提物的制备方法包括：\n[0021] 将乳香提取2次，第1次按1g：8ml～12ml的比例加水65℃～70℃回流1.2～1.8小时，第2次按1g：6ml～10ml的比例加水70～80℃回流0.8～1.2小时，放冷，滤过，合并两次滤液，离心弃沉淀，上清液调整为每毫升药液含生药0.4g～0.6g。\n[0022] 优选的，如上所述的乳香凝胶，所述第二组份还包括占所述第一组份1～4w/v％的桦褐孔菌多糖；\n[0023] 更优选的，所述桦褐孔菌多糖的制备方法包括：\n[0024] 将桦褐孔菌子实体切片后粉碎成粉，无水乙醇浸泡脱脂后过滤得到药渣；\n[0025] 将所述药渣用热水浸提，将所得滤液浓缩后加无水乙醇析出沉淀，离心后将沉淀真空冷冻干燥即得；\n[0026] 更优选的，所述无水乙醇浸泡脱脂具体为：\n[0027] 按照1g桦褐孔菌粉:4mL～6mL无水乙醇的比例混合，浸泡8h～16h。\n[0028] 更优选的，所述热水浸提具体为：\n[0029] 将所述药渣按照1g药渣:10mL～16mL水的比例浸泡12h～16h后，加热至85℃～90℃提取3h～5h；重复上述步骤2～4次。\n[0030] 桦褐孔菌Inonqqus obliquus，又名“桦褐灵芝”、“白桦茸”等，是一种属于刺革菌目的真菌。该真菌为药用真菌，在俄国和东欧民间用作药物。隶属于伞菌纲(Agaricomycetes)刺革菌目(Hymenochaetales)刺革菌科(Hymenochaetaceae)纤孔菌属(Inonotus)。\n[0031] 桦褐孔菌自十六世纪以来就用作为民间医药和草药的例子。那时的东欧国家把白桦茸当作药物，以治疗癌症、胃炎、溃疡及骨结核等疾病。有评论指出：“早在十六世纪，白桦茸就在俄罗斯和北欧被用来作为一种有效的民间医药，在没有人类所不能承受的副作用下，用于医治许多恶性肿瘤及其他疾病。”在同一份评论中，亦提到白桦茸中含有丰富的次生代谢物，包括酚类化合物、黑色素等。其中的部分成分具有抗氧化，抗肿瘤，降低病毒活性和提高人体免疫力，预防感染的作用。\n[0032] 根据本发明的一方面，本发明还涉及如上所述的乳香凝胶的制备方法，包括：\n[0033] 将卡波姆加入水中，静置使其完全吸水溶胀得到卡波姆溶胀物；将所述乳香水提液、甘油以及乙醇溶解后的羟苯乙酯加入所述卡波姆溶胀物中，搅拌均匀得到混合物，再向所述混合物中加入三乙醇胺和丹酚酸B，继续搅拌至凝胶形成，即得。\n[0034] 优选的，如上所述的制备方法，在得到所述混合物之后，搅拌至凝胶形成之前，所述方法还包括：\n[0035] 将桦褐孔菌多糖加入所述混合物中。\n[0036] 根据本发明的一方面，本发明还涉及如上所述的乳香凝胶在制备用于治疗牙周炎的药物中的应用。\n附图说明\n[0037] 为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。\n[0038] 图1为本发明实验例中分子学检测结果图；图中柱子从左到右依次为实施例4、实施例3、对比例2、对比例1和对照组；\n[0039] *，p＜0.05，versus对照组；**，p＜0.01，versus对照组；#，p＜0.05，versus实施例\n3，统计方法为ANOVA。\n具体实施方式\n[0040] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。\n[0041] 实施例1\n[0042] 本实施例涉及一种乳香凝胶的制备方法，具体为：\n[0043] 1.将乳香提取2次，第1次按1g：8ml的比例加水65℃回流1.8小时，第2次按1g：10ml的比例加水70℃回流0.8小时，放冷，滤过，合并两次滤液，离心弃沉淀，上清液调整为每毫升药液含生药0.6g得到乳香水提物；\n[0044] 2.将卡波姆0.7g加入70ml水中，静置使其完全吸水溶胀得到卡波姆溶胀物；将所述乳香水提液10ml、甘油5g以及乙醇溶解后的羟苯乙酯0.05g加入所述卡波姆溶胀物中，搅拌使均匀，再加入三乙醇胺1.2g得到混合液，再加入占所述混合液1w/v％的桦褐孔菌多糖、占所述混合液3w/v％的丹酚酸B，继续搅拌至凝胶形成，即得乳香凝胶。\n[0045] 实施例2\n[0046] 本实施例涉及一种乳香凝胶的制备方法，具体为：\n[0047] 1.将乳香提取2次，第1次按1g：12ml的比例加水70℃回流1.2小时，第2次按1g：6ml的比例加水80℃回流1.2小时，放冷，滤过，合并两次滤液，离心弃沉淀，上清液调整为每毫升药液含生药0.4g得到乳香水提物；\n[0048] 2.将卡波姆1.3g加入90ml水中，静置使其完全吸水溶胀得到卡波姆溶胀物；将所述乳香水提液15ml、甘油15g以及乙醇溶解后的羟苯乙酯0.15g加入所述卡波姆溶胀物中，搅拌使均匀，再加入三乙醇胺2.0g得到混合液，再加入占所述混合液0.5w/v％的丹酚酸B，继续搅拌至凝胶形成，即得乳香凝胶。\n[0049] 实施例3\n[0050] 本实施例涉及一种乳香凝胶的制备方法，具体为：\n[0051] 1.将乳香提取2次，第1次按1g：10ml的比例加水67℃回流1.5小时，第2次按1g：8ml的比例加水75℃回流1小时，放冷，滤过，合并两次滤液，离心弃沉淀，上清液调整为每毫升药液含生药0.5g得到乳香水提物；\n[0052] 2.将卡波姆1g加入80ml水中，静置使其完全吸水溶胀得到卡波姆溶胀物；将所述乳香水提液13ml、甘油10g以及乙醇溶解后的羟苯乙酯0.1g加入所述卡波姆溶胀物中，搅拌使均匀，再加入三乙醇胺1.6g得到混合液，再加入占所述混合液1.5w/v％的丹酚酸B，继续搅拌至凝胶形成，即得乳香凝胶。\n[0053] 实施例4\n[0054] 本实施例涉及一种乳香凝胶的制备方法，具体为：\n[0055] 1.同实施例3。\n[0056] 2.将卡波姆1g加入80ml水中，静置使其完全吸水溶胀得到卡波姆溶胀物；将所述乳香水提液13ml、甘油10g以及乙醇溶解后的羟苯乙酯0.1g加入所述卡波姆溶胀物中，搅拌使均匀，再加入三乙醇胺1.6g得到混合液，再加入占所述混合液2w/v％的桦褐孔菌多糖、占所述混合液1.5w/v％的丹酚酸B，继续搅拌至凝胶形成，即得乳香凝胶。\n[0057] 所述桦褐孔菌多糖的制备方法为：将桦褐孔菌子实体切片后粉碎成粉，按照1g桦褐孔菌粉:5mL无水乙醇的比例混合，浸泡12h脱脂后过滤得到药渣；将所述药渣按照1g药渣:13mL水的比例浸泡14h后，加热至87℃提取4h；重复上述步骤3次，将所得滤液浓缩后加无水乙醇析出沉淀，离心后将沉淀真空冷冻干燥得到桦褐孔菌多糖。\n[0058] 对比例1\n[0059] 本实施例涉及一种乳香凝胶的制备方法，具体为：\n[0060] 1.将乳香提取2次，第1次按1g：10ml的比例加水67℃回流1.5小时，第2次按1g：8ml的比例加水75℃回流1小时，放冷，滤过，合并两次滤液，离心弃沉淀，上清液调整为每毫升药液含生药0.5g得到乳香水提物。\n[0061] 2.将卡波姆1g加入80ml水中，静置使其完全吸水溶胀得到卡波姆溶胀物；将所述乳香水提液13ml、甘油10g以及乙醇溶解后的羟苯乙酯0.1g加入所述卡波姆溶胀物中，搅拌使均匀，再加入三乙醇胺1.6g得到混合液，继续搅拌至凝胶形成，即得乳香凝胶。\n[0062] 对比例2\n[0063] 本实施例涉及一种丹酚酸B桦褐孔菌凝胶的制备方法，具体为：\n[0064] 1.将桦褐孔菌子实体切片后粉碎成粉，按照1g桦褐孔菌粉:5mL无水乙醇的比例混合，浸泡12h脱脂后过滤得到药渣；将所述药渣按照1g药渣:13mL水的比例浸泡14h后，加热至87℃提取4h；重复上述步骤3次，将所得滤液浓缩后加无水乙醇析出沉淀，离心后将沉淀真空冷冻干燥得到桦褐孔菌多糖。\n[0065] 2.将卡波姆1g加入93ml水中，静置使其完全吸水溶胀得到卡波姆溶胀物；将甘油\n10g以及乙醇溶解后的羟苯乙酯0.1g加入所述卡波姆溶胀物中，搅拌使均匀，再加入三乙醇胺1.6g得到混合液，再加入占所述混合液2w/v％的桦褐孔菌多糖、占所述混合液1.5w/v％的丹酚酸B，继续搅拌至凝胶形成，即得丹酚酸B桦褐孔菌凝胶。\n[0066] 实验例\n[0067] 一、研究内容\n[0068] 1.乳香凝胶对慢性牙周炎临床症状的改善作用：在干预后1周、1月，分别检测分析慢性牙周炎常规治疗组和乳香水提物干预组牙周炎症各项临床指标(包括菌斑指数、自觉出血等症状、牙齿松动度)的差异。3月后检查出血指数、探诊深度、临床附着丧失水平和骨吸收状况的差异。\n[0069] 2.乳香凝胶对慢性牙周炎局部炎症的抑制作用：在干预后1周、1月、3月，提取受试人群龈沟液，检测分析慢性牙周炎常规治疗组和实施例3制备得到的乳香凝胶，以及对比例制备得到的凝胶，凝胶干预组龈沟液中炎症因子(MMP-2，MMP-9、TIMP-1)的水平及其相关关系。\n[0070] 二、研究方法\n[0071] 1.1临床样本收集：按照一定纳入和排除标准选取中重度牙周炎患者50例。\n[0072] 1.1.1牙周炎纳入标准：临床诊断为中重度慢性牙周炎(口内存留牙不少于20颗，口内至少有6个位点牙周袋≥6mm，附着丧失≥4mm，X线片显示多个位点牙槽骨吸收超过根长的1/3)。无其他系统感染性疾病。\n[0073] 1.1.2签订知情同意书\n[0074] 1.1.3收集样本的临床资料、\n[0075] (1)一般情况(年龄、性别、家族史等)\n[0076] (2)检测牙周炎患者牙周临床指标：菌斑指数(PLI)、出血指数(BI)、探诊深度(PD)、临床附着丧失水平(CAL)、牙齿松动度和骨吸收状况。\n[0077] 1.1.5用滤纸条法取受试者龈沟液，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测MMP-2，MMP-\n9，TIMP-1的表达水平。\n[0078] 1.2随机分组进行牙周治疗后，各项指标变化的分析\n[0079] 采用随机对照方法将受试者分为凝胶干预组(实施例3、4或对比例1、2)和对照组(每组10例)。对照组只进行常规系统牙周治疗(牙周洁治、刮治)，凝胶干预组在牙周治疗的同时，用实施例3、4或对比例1、2制成的凝胶，在牙周袋内注射，连续应用5天。采取治疗措施后1周、1月和3月后观察受试者各项指标的变化：\n[0080] (1)牙周临床指标：干预后1周、1月后，分别检测菌斑指数(PLI)、自觉出血症状、牙齿松动度(TM)的差异。3月后检查出血指数(BI)、探诊深度(PD)、临床附着丧失水平(CAL)和骨吸收状况。\n[0081] (2)龈沟液中MMP-2，MMP-9，TIMP-1的检测。\n[0082] 1.3统计分析\n[0083] 统计学分析采用SPSS 11.5软件进行统计学处理。计量资料采用 表示，两组间比较采用Student t检验，计数资料采用χ2检验。p<0.05作为统计学显著性标准。\n[0084] 三、研究结果\n[0085] 表1各组治疗前后牙周指标变化情况\n[0086]\n[0087]\n[0088] 1.从表1可知对比例1、2，实施例3、4的临床指标PLI、PD、TM较治疗前显著降低，治疗期间，我们对每位患者都进行了细致耐心的口腔卫生指导(OHI)，患者的依从性良好，所以各组指标均低于各自治疗前水平。\n[0089] 对比例2和对照组的治疗效果相比，在PL1、PD指标上均有明显改善，但在CAL和TM指标上没有明显变化；对比例1和对照组的治疗相比更好一些，说明单独使用乳香凝胶可改善治疗效果；实施例3组的PLI、PD、TM较治疗前比另外三组更加显著，说明在乳香凝胶中添加一部分丹酚酸B后会取得更佳的治疗效果；而实施例4与实施例3组相比，治疗效果又有进一步的提高，特别是在菌斑指数这一项有显著的提升。结合各组实验结果，可知丹酚酸B能明显提高乳香的疗效，而桦褐孔菌多糖则会进一步增加其增效效果。鉴于之前的研究表明丹酚酸B具有稳定细胞膜、抗脂质过氧化等作用，而桦褐孔菌多糖具有免疫调节的作用，三者的组合可能产生了对改善口腔环境有益的混合作用。\n[0090] 2.为了进一步探明产生上述病理学变化的分子基础，申请人对各组检测了与牙周炎相关的分子学检测指标(TNF-α、IL-10、MMP-2、MMP-9、TIMP-1)，干预前各组的基线水平均无明显的统计学差异(data not shown)，说明各组间具有良好的可比性。治疗后结果如图1所示。治疗后对比例1组和对比例2组的MMP-2、MMP-9水平显著低于对照组，TIMP-1的水平则显著高于对照组，TNF-α、IL-10水平对比例1组与对照组相比有差异，而对比例2组无差异。\n[0091] 治疗后实施例3、4组中TNF-α、IL-10、MMP-2、MMP-9水平显著低于对照组和对比例\n1、2组，TIMP-1的水平显著高于对照组和对比例1、2组，这表明采用牙周常规治疗+乳香+丹酚酸B和/或桦褐孔菌多糖凝胶对牙周炎的治疗效果显著优于单纯的牙周常规治疗或者牙周常规治疗+单纯的乳香凝胶。\n[0092] 最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。