一种促进精氨酸脱亚氨基酶高效水溶性表达的方法

发明专利有效专利

申请号：
CN201310473752.5
IPC分类号：C12N9/78;C12N15/70;C12R1/40
申请日期：
2013-10-11
申请人：
山东大学

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专利名称	一种促进精氨酸脱亚氨基酶高效水溶性表达的方法
申请号	CN201310473752.5	申请日期	2013-10-11
法律状态	授权	申报国家	中国
公开/公告日	2013-12-25	公开/公告号	CN103468664A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N9/78 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N9/00 酶，如连接酶（6.）；酶原；其组合物（用于清洁牙齿的含酶的制剂入A61K 8/66、A61Q 11/00；含酶或酶原的医药制剂入A61K 38/43；含酶去污剂组合物入C11D）；制备、活化、抑制、分离或纯化酶的方法〔3〕 C12N9/14 水解酶（3.）〔3〕 C12N9/78 作用在除肽键外的碳-氮键上（35）〔3〕	IPC分类号	C;1;2;N;9;/;7;8;;;C;1;2;N;1;5;/;7;0;;;C;1;2;R;1;/;4;0查看分类表>
申请人	山东大学	申请人地址	山东省济南市历城区山大南路27号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	山东大学	当前权利人	山东大学
发明人	李越中;王颖
代理机构	济南圣达知识产权代理有限公司	代理人	李健康

摘要

本发明公开了一种促进精氨酸脱亚氨基酶（ADI）高效水溶性表达的方法。是将来源于恶臭假单胞杆菌的ADI基因连接pET-30a-c(+)载体，构建重组表达质粒pET30a-ADI，并与pGro7质粒共转化入E.coliBL21(DE3)中，获得含双质粒的工程菌；将工程菌接种于含有1-10g/LD-葡萄糖的LB培养基中，并添加L-阿拉伯糖培养；当菌体培养至对数期时，再添加1-10g/L的L-精氨酸及0.1mMIPTG，在16℃，180rpm条件下诱导培养实现。本发明方法可显著提高重组ADI蛋白的水溶性产量，粗酶液活性也提高了15倍，并有效克服了重组ADI难以可溶性表达的缺陷，为工业化大规模生产瓜氨酸等应用提供了技术支持，也为其他重组蛋白的表达提供了一个新思路。

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