一种生产杂合型N糖链修饰糖蛋白细胞株DFKO及其制备方法

发明专利有效专利

申请号：
CN202110286330.1
IPC分类号：C12N5/10;C12N15/85;C12N15/12;C12N15/11
申请日期：
2021-03-17
申请人：
江南大学

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专利名称	一种生产杂合型N糖链修饰糖蛋白细胞株DFKO及其制备方法
申请号	CN202110286330.1	申请日期	2021-03-17
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2021-08-06	公开/公告号	CN113215103A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N5/10 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N5/08 （转入C12N 5/071） C12N5/10 经引入外来遗传物质而修饰的细胞，如病毒转化的细胞〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;5;/;1;0;;;C;1;2;N;1;5;/;8;5;;;C;1;2;N;1;5;/;1;2;;;C;1;2;N;1;5;/;1;1查看分类表>
申请人	江南大学	申请人地址	江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	江南大学	当前权利人	江南大学
发明人	藤田盛久;冷继雄;高晓冬;杨刚龙;柳艺石;任伟伟
代理机构	南京禹为知识产权代理事务所（特殊普通合伙）	代理人	刘峰

摘要

本发明公开了一种生产杂合型N糖链修饰糖蛋白细胞株DFKO及其制备方法，其制备方法包括，将靶序列连接到CRISPR‑Cas9敲除系统的PX330‑EGFP质粒中，转染于HEK293野生型细胞中，转染后利用流式分选仪进行筛选富集和有限稀释，得到DFKO单克隆细胞。本发明在哺乳动物细胞HEK293中，利用CRISPR‑Cas9技术敲除N糖基化路径的MAN2A1、MAN2A2和FUT8基因，建立了三基因敲除细胞DFKO，该细胞可生产以杂合型且不含核心岩藻糖修饰为主要N糖链。该细胞株可应用于生产生物医药糖蛋白，能大大提高其稳定性和生物活性；特别地，由于DFKO细胞株丧失了核心岩藻糖修饰，利用该细胞株生产抗体，可以大大提高该抗体的ADCC效力。

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