一种病毒免疫型诱导剂及其应用

1.一种草莓脱毒种苗病毒免疫型诱导剂，所述的病毒为草莓斑驳病毒，草莓皱缩病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓镶脉病毒，其特征在于，包括如下重量份的原料组成：黄芪多糖 32 份，绿原酸 26 份，丹参总酮 26 份，益母草碱 16 份。

一种病毒免疫型诱导剂及其应用\n技术领域\n[0001] 本发明涉及一种植物病毒免疫诱导剂及在草莓脱毒免疫诱导上的应用，属于植物病毒免疫诱导技术。\n背景技术\n[0002] 草莓在自然界种植的过程中容易感染多种病毒，使自然繁育的后代性状先天不良，主要表现在抗性、产量和品质退化，通常感染的病毒有四种，即草莓斑驳病毒、轻型黄边病毒、镶脉病毒和皱缩病毒。近年来，对草莓进行脱毒处理已是成熟技术。草莓脱毒种苗虽然不带病毒，但在自然界种植过程中还是容易受到病毒侵害，种苗植株对病毒的主动免疫力不足，感染病毒后会导致产量和品质的下降。因此对不带病毒的脱毒种苗进行免疫诱导，使草莓种苗本身含有抗病毒免疫因子，从而对病毒具有主动免疫力很有必要。\n发明内容\n[0003] 本发明的目的在于提供一种病毒免疫型诱导剂，具体包括如下重量份的原料组成：黄芪多糖25-35份，绿原酸20-35份，丹参总酮20-35份，益母草碱12-22份。\n[0004] 进一步优选为黄芪多糖32份，绿原酸26份，丹参总酮26份，益母草碱16份。\n[0005] 所述的黄芪多糖还可以替换为包括黄芪多糖在内的魔芋葡甘聚糖、白术多糖、香菇多糖、竹叶多糖、女贞子多糖、麻黄多糖中的一种或多种。\n[0006] 所述的丹参总酮还可以替换为包括丹参总酮在内的蒲黄酮、三七总皂苷、竹节皂苷中的一种或多种。\n[0007] 绿原酸还可以替换为原儿茶酸或表没食子酸或经灭菌后的腐殖酸。\n[0008] 所述的益母草碱还可以替换为包括益母草碱在内的麻黄生物碱、茶多酚、苦草碱中的一种或多种。\n[0009] 该病毒免疫型诱导剂还包括以所述的原料的组合物为主要成分，经添加凝胶或带抑菌剂的凝胶所形成的组合病毒免疫型诱导剂。比如以黄芪多糖，绿原酸，丹参总酮，益母草碱为主要成分，经添加凝胶或带抑菌剂的凝胶所形成的组合免疫型诱导剂[0010] 所述的凝胶为聚丙烯酸与可溶性淀粉以质量比为1：50-80的混合物；所述的带抑菌剂的凝胶为聚丙烯酸、可溶性淀粉、香兰素以质量比为1：50-80：0.1-1，所述的聚丙烯酸还可以为聚丙烯酸盐。\n[0011] 将上述病毒免疫型诱导剂或组合病毒免疫型诱导剂应用于草莓脱毒种苗病毒免疫上。\n[0012] 将上述原料按重量份混合配比均匀后在草莓脱毒种苗组织培养的生根培养基配置中，添加5-15％(进一步优选为8.5％)的上述免疫型诱导剂或组合免疫型诱导剂。\n具体实施方式\n[0013] 实验例1\n[0014] 以法兰地草莓脱毒种苗为例\n[0015] 1、按下列重量配比称取原料(KG):黄芪多糖3.2KG、绿源酸2.6KG、丹参总酮2.6KG、益母草碱1.6KG，将上述原料混合均匀。\n[0016] 2、在草莓脱毒种苗组织培养的生根培养基配制过程中添加8.5％的上述病毒免疫诱导剂。\n[0017] 3、草莓茎尖或根尖脱毒法操作，在相同的环境条件下分别培养2000株待生根的继代种苗，并用PCR法进行病毒检测确认不带病毒。\n[0018] 4、配制添加了免疫诱导剂的生根培养基，培养得到1000株生根原种苗为实验组A。\n观察发现，添加免疫诱导剂时草莓脱毒苗生根无影响，生根原种苗正常。\n[0019] 5、配置未添加免疫诱导剂的生根培养基，培养得到1000株生根原种苗为对照组B。\n[0020] 6、在相同实验环境条件下，用实验室分离的草莓常见4种病毒进行主动感染实验，并用PCR法进行病毒检测，记录感染情况。\n[0021] 实验结果记录数据如下：\n[0022]\n[0023] 实验例2\n[0024] 以红颜草莓脱毒种苗为例\n[0025] 1、按下列重量配比称取原料(kg):黄芪多糖3.2kg、绿源酸2.6kg、丹参总酮2.6kg、益母草碱1.6kg，将上述原料混合均匀。\n[0026] 2、在草莓脱毒种苗组织培养的生根培养基配制过程中添加8.5％的上述病毒免疫诱导剂。\n[0027] 3、草莓茎尖或根尖脱毒法操作，在相同的环境条件下分别培养2000株待生根的继代种苗，并用PCR法进行病毒检测确认不带病毒。\n[0028] 4、草莓茎尖或根尖脱毒法操作，在相同的环境条件下分别培养2000株待生根的继代种苗，并用PCR法进行病毒检测确认不带病毒。\n[0029] 5、配制添加了免疫诱导剂的生根培养基，培养得到1000株生根原种苗为实验组A。\n观察发现，添加免疫诱导剂时草莓脱毒苗生根无影响，生根原种苗正常。\n[0030] 6、配置未添加免疫诱导剂的生根培养基，培养得到1000株生根原种苗为对照组B。\n[0031] 7、在相同实验环境条件下，用实验室分离的草莓常见4种病毒进行主动感染实验，并用PCR法进行病毒检测，记录感染情况。\n[0032] 实验结果记录数据如下：\n[0033]\n[0034] 实验结果表明：在草莓脱毒种苗组培的生根培养基中添加本免疫诱导剂，能有效提高草莓脱毒种苗对病毒的抗性，对草莓斑驳病毒、皱缩病毒、镶脉病毒具有显效免疫力，对轻型黄边病毒具有弱效免疫力。\n[0035] 实施例3\n[0036] 1、按下列重量配比称取原料(kg):黄芪多糖1.8kg、魔芋葡甘聚糖1.6kg、经灭菌后的腐殖酸3.5kg、丹参总酮1.2kg、蒲黄酮1.6kg、益母草碱1.6kg，将上述原料混合均匀。\n[0037] 2、在草莓脱毒种苗组织培养的生根培养基配制过程中添加12.5％的上述病毒免疫诱导剂。\n[0038] 实施例4\n[0039] 1、按下列重量配比称取原料(kg)：白术多糖1.4kg、麻黄多糖0.8kg、女贞子多糖\n0.8kg、原儿茶酸2.6kg、三七总皂苷1.1kg、竹节皂苷1.3kg、麻黄生物碱0.6kg、茶多酚\n0.8kg，将上述原料混合均匀。\n[0040] 2、在草莓脱毒种苗组织培养的生根培养基配制过程中添加7.2％的上述病毒免疫诱导剂。\n[0041] 实施例5\n[0042] 1、按下列重量配比称取原料(kg):魔芋葡甘聚糖1.75kg、香菇多糖1.4kg、表没食子酸3.4kg、益母草碱1.6kg、麻黄生物碱0.3kg、丹参总酮3.2kg，将上述原料混合均匀。\n[0043] 将上述组分混合均匀后，均匀分散于聚丙烯酸、可溶性淀粉、香兰素以质量比为1:\n75:0.5的混合物中即成组合病毒免疫型诱导剂。\n[0044] 2、在草莓脱毒种苗组织培养的生根培养基配制过程中添加10.5％的上述组合病毒免疫诱导剂。