灭啮齿动物的诱饵凝胶中的微生物制剂

1.一种在含水凝胶中的含肉孢子虫属的孢子囊的用于灭啮齿动物的 制剂。
2.权利要求1的制剂，其特征在于，该水性凝胶基于水和增稠剂， 增稠剂选自纤维素衍生物、黄原胶、藻酸盐、聚乙烯基醇、聚乙烯基吡咯 烷酮、聚丙烯酸和无机凝胶形成剂。
3.权利要求1的制剂，其特征在于，它含有浓度为1000-10000000/ml 的肉孢子虫属的孢子囊。
4.权利要求1的制剂，其特征在于，它含30-98％的水。
5.权利要求1的制剂，其特征在于，它含有常规诱饵物质。
6.权利要求1-5中任一项的制剂在灭啮齿动物中的应用，其特征 在于，将制剂撒在啮齿动物的生活空间。

本发明涉及一种在凝胶中含有不同期致病原虫的制剂及其在灭啮 齿动物中的应用。\n人们熟知，肉孢子虫类群的原生动物(原生动物门、孢子虫纲、 球虫亚纲、真球虫目、艾美球虫亚目)对啮齿动物(家鼠类、害鼠、 水鼠平、Nosokia、鼠属)是致病菌，在足够的剂量下可使动物致死 (Rzepczyk 1974，Intern.J.Parasitol. 4，447-449；Brehm，Frank 1980，Z.Parasitenkd. 62，15-30)。一种这类群中的特别对于多种 鼠类致病的寄生虫是Singaporensis肉孢子虫(Zamman等人，1975， Z.Parasitenkd. 47，169-185)。\n寄生虫的终宿主是食肉动物或杂食动物；对于Singaporensis肉 孢子虫则是蛇亚目，例如蟒蛇。在终宿主的肠内形成孢子囊寄生虫。 这种孢子囊将持续从粪便排出。如果中间宿主，在Singaporensis肉 孢子的情况下例如鼠，通过口腔感染孢子囊，则孢子囊在鼠的肠内孵 化并穿过肠壁。通过血液循环这时到达另外的器官，在那里它们能通 过分裂(裂配生殖)繁殖。\n在这种情况下可证实有两种裂配生殖，其一是在感染后约第六 天，其二是在感染后约第14-16天。特别大量的裂殖体(裂殖子)出 现在肺中，那里它们在内皮细胞中繁殖。\n如果由于严重感染而使裂殖子在肺中大量繁殖，则鼠将在感染后 约第16天的第二个寄生虫裂配生殖期间染病，并且大多数在数小时内 死亡。\n有可能将这种病源体的孢子囊施加给啮齿动物，以致使其死于感 染。这种原理可用于灭啮齿动物(Wood 1985，J.Plant Protect.Trop. 2，67-69)。已用Singaporensis肉孢子虫成功地进行灭鼠(Jkel 等人，1996，J.Parasitol. 82 280-287)。\n鼠类和norvegicus感染20000以上孢子囊(与门类有关)照例会 致死。动物在感染后14天之前无任何症状。然后很快衰弱，并在感染 后的约第16天死于感染。\n亚致死感染的鼠也在感染后14天无任何病状，并在抗过感染后未 丧命。感染数天之后这些动物已具有抗病菌的免疫力。这些动物在以 后对用Singaporensis肉孢子虫制剂杀灭已不敏感了。\n孢子囊可在水性悬浮应付中保存两年，而不明显丧失及致病性。 这种悬浮液可通过食管饲法对鼠给药，并表明在相应剂量下的致死作 用。但是在干燥状态下孢子囊不能存活。\n为了灭鼠应利用诱饵，并被动物吞食。这种带有Singaporensis 肉孢子虫的孢子囊的诱饵在潮湿时都是致病的。在干燥后孢子囊很快 丧失其致病能力。因此通常的基于谷物的诱饵不能用于这种寄生虫的 有效施药。在申请人的研究中，亦未能在基于谷物的诱饵中保持 Singaporensis肉孢子虫的孢子囊的传染能力。在混合后仅一天，这 种诱饵已丧失作用。\n含孢子囊的诱饵应该以湿状态包装在薄膜中。这种湿制剂的缺点 是难于保存，因为谷物在数天内便会发霉或发芽。一种方案是在诱饵 的空腔内配入悬浮液。膏状诱饵的碎块是成功应用的例子，该诱饵内 部的空腔中皆含有致死剂量的悬浮液。但是，这种诱饵也应在制备后 数天中应用，因为水会散发，或者膏状基质吸收水并胀起或发酵，从 而使这种诱饵不能使用。\n迄今用如Singaporensis肉孢子虫的原生动物灭啮齿动物的唯一 实际可能是用含孢子囊的水性悬浮液和诱饵基质，例如谷物就在应用 前制成诱饵。但问题在于很难取出计算量的孢子囊，因为它在悬浮液 中很快下沉并浓集在容器的底部。因此，这样制成的诱饵含不确定量 的、不均匀分布的孢子囊。这种诱饵很快变干，常常在混制过程中变 干。其结果是孢子囊死亡，而诱饵则在数小时后即不再有效。\n现在发现，肉孢子虫属-孢子囊出人意料地能在某些凝胶中长期保 持其感染性，虽然过去的研究曾经表明，在谷物上、在如膨润土的膏 状物和凝胶中在数天之后不再具有感染性。它们在本文所述的凝胶中 能存活几个月是令人吃惊和意料之外的。从文献已知，在温和地区的 很强的肉孢子虫，例如gigantea肉孢子虫对pH-值的变化和化学物质 的反应敏感(McKenna等人，Veterinary Parasitology 1992， 45 1-16)。因此，特别意外的是甚至地pH-值可能变化，此外还加防腐 剂的情况下，寄生物的存活概率无明显的减小。\n因此，本发明能够将孢子囊保存在凝胶中以便以后用于灭啮齿动 物。它们的这种基质中均匀分布。从而有可能取出确定量的孢子囊。 确定量的这种凝胶能与诱饵基质混合，直至达到均匀状态，因为凝胶 只是很慢地被基质吸收。由于所采用的凝胶只是很慢地通过蒸发脱 水，诱饵在干燥气氛中应用时亦能保持潮湿，从而保留其感染性。\n通过这种方式可能将孢子囊保存数月，而不致使凝胶分离或使病 原体感染性明显降低。所引的应用Carbopol-凝胶的例子证明，这种 混合物可应用数月。\n本发明要求保护在凝胶中保存单细胞寄生虫状态的原理。这种凝 胶单独或与饵剂混合用于灭啮齿动物。\n原则上孢子虫纲的全部原生动物皆适宜作为致病生物。特别适宜 的是球虫亚纲类，最适宜的是艾美球虫亚目的代表。例如，但不限于 肉孢子虫属，如Singaporensis肉孢子虫。\n本发明的制剂可以所有常规为制备啮齿动物的饲料诱饵的配方加 工，例如加工成基于谷物的诱饵，呈膏、凝胶和蜡块形式，以及呈谷 物和配方助剂的挤压混合物。其次，病源体可以水基饮用诱饵的形式 提供。本发明意义中的诱饵可如灭有害啮齿动物的常规诱饵那样使 用。它们可放在改建的空间和野外，根据目标物和诱饵放置密度，每 个诱饵放置位置可放5g-500g。它们也可放在拟灭啮齿动物的建筑物 的入口。\n凝胶中病源体的剂量可任意调整。优选的剂量为1000-10000000 孢子囊/ml。特别优选500000-2000000孢子囊/ml。\n诱饵中病源体的剂量应为1000-200000孢子囊/g诱饵，优选 2000-100000孢子囊/g，更优选的浓度为10000-30000，特别优选 20000孢子囊/g。亦可采用更高的剂量，但通常不需要。而且既可采 用一种病源体的孢子囊，又可采用不同病源体的孢子囊的混合物。\n本发明意义上的拟灭的啮齿动物系指啮齿目的啮齿动物，特指家 鼠类、鼠属、害鼠、Nosokia和田鼠属。尤其指鼠类和害鼠的代表， 例如家鼠类、norvegicus鼠、bengalensis鼠、indica鼠。\n本发明意义上的凝胶系指水基和与相应增稠剂混合的凝胶。作为 增稠剂可采用如纤维素衍生物的高分子，例如羟丙基纤维素、羟乙基 纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基甲 基纤维素、羟乙基丙基纤维素或黄原胶、藻酸盐、聚乙烯基醇、聚乙 烯基吡咯烷酮、聚丙烯酸和它们的衍生物或无机凝胶形成剂如高分散 的二氧化硅(参见，例如，Rudolf Voigt，Pharmazeutische Technologie(药物工业)，362-385页，Ulstein Mosby)。特别适 宜的是纤维素衍生物和聚丙烯酸。\n凝胶的水含量变化宽，例如30-98重量％，尤其是50-90重量％， 更优选70-80重量％。\n凝胶的pH-值变化也宽，例如pH 2-10，尤其是pH 4-9，更优选 pH 6-8。\n凝胶可添加防府剂如对羟基苯甲酸酯、苯甲酸盐、山梨酸、柠檬 酸盐或对羟基苯甲酸酯；保湿剂如甘油或丙二醇；氧化稳定剂如丁基 羟甲苯或丁基羟苯甲醚、维生素E、抗坏血酸、调味剂或其它配方助剂。\n在本发明的制剂中，病源原生物的孢子囊还可与另一些如对灭啮 齿动物有作用的化学活性物组合使用。这里可列举，但不限于香豆素 的例子。\n本发明的制剂通过相应量的组分的混合来制备。混合可采用机械 的，例如在搅拌罐或其它适合此目的的设备中实现。\n下列实施例应对本发明作出阐明，但不作限制。\n实施例：\n方法\n所采用的S5菌株(Stamm S5)的孢子囊(由Hohenheim大学， 寄生虫系提供)在1998年8月17日取自泰国的一个海峡。计数采用 Neubauer-Hmozytometer计。凝胶用1％Carbopol 974P(Carbopole： 弱交联的聚丙烯酸)和水(342ppm)制备。pH值采用2N NaOH滴定。 作为防腐剂采用0.02％Solbrol P和0.14％Solbrol M(Solbrole： 对-羟基苯甲酸酯(-甲基，-乙基，-丁基)。一个试样含20％甘油。 向所有的凝胶加入50000孢子囊/ml，并剧烈搅拌，以便达到均匀分 布。凝胶在约6℃下保存在冷箱中，并按相应的试验计划按各种试验日 期进行施药。\n用野生的norvegicus鼠作试验动物。在喂孢子囊诱饵前14小时 动物不随意进食和水。诱饵基于麦屑。每只鼠得到5g与1ml凝胶混合 的麦屑。只是在鼠吞食孢子囊诱饵之后，鼠才能再随意得到标准饲料。 每种剂量采用2只鼠，对它们在接受剂量后观察21天。死亡率按与凝 胶配方和贮存时间的关系来确定。在预期的病源体作用期(第13-第 17天)内症状表现重的鼠在自然条件下不能活下来，因此被灭掉。\n结果\n表1：\n摄取含50000孢子囊(*为100000孢子囊)的不同凝胶的麦屑诱 饵后的死亡率与凝胶贮存时间的关系。   凝胶   pH   Solbrol   甘油   贮存期(周)内的死亡率(％)   0   2  4   6   8   10   12   14   19   24   6,17   7,04   7,05       8,19   +   +   -       +   -   +   -       -   100   100   100       100        100         100   50         100     0   100         100         100       0         50   0       0     0   0       0       50*