一种治疗骨性关节炎的中药制剂及其制备方法

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一种治疗骨性关节炎的中药制剂及其制备方法\n技术领域\n[0001] 本发明涉及中药技术领域，特别是涉及一种治疗骨性关节炎的中药制剂及其制备方法。\n背景技术\n[0002] 骨性关节炎（osteoarthritis,OA）又称退行性关节病、增生性骨关节炎，是由于关节软骨完整性破坏以及关节边缘软骨下骨板病变，导致关节症状和体征的一组异质性疾病，以修复不良和关节结构破坏为主要病理特点，属中医学“骨痹”、“膝痹”范畴。OA是一种世界性的常见疾病，严重危害人类健康，是老年人疼痛和致残的主要原因，不仅可使劳动力丧失，而且还造成个人和社会负担加重。我国已进入老龄化国家，骨性关节炎会不断增加，因此对骨性关节炎的预防和治疗是一项全社会都要重视的工作。为此，开发一种治疗骨性关节炎的药物非常必要。\n[0003] 目前，治疗骨性关节炎的药物西药主要是非甾体类抗炎镇痛药、激素、关节腔注射润滑剂等，因其有一定的副作用而受局限，亦是治标不治本！传统的中医药对治疗骨性关节炎有明显的优势，但市场上还没有一种专门针对骨性关节炎的外用药物。\n发明内容\n[0004] 本发明所要解决的技术问题是克服现有治疗骨性关节炎的药物具有一定副作用的缺陷，提供一种治疗骨性关节炎的中药制剂及其制备方法，该中药制剂疗效确切、无副作用、使用携带方便。\n[0005] 为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：\n[0006] 按照重量份计算，本发明治疗骨性关节炎的中药制剂主要是由原料药景天三七\n1800～2200份、辣椒2800～3200份、香加皮800～1200份、白芷800～1200份、乳香\n800～1200份和没药800～1200份制备而成。\n[0007] 优选的，上述中药制剂主要是由原料药景天三七2000份、辣椒3000份、香加皮\n1000份、白芷1000份、乳香1000份和没药1000份制备而成。\n[0008] 前述治疗骨性关节炎的中药制剂的制备方法：称取景天三七超微粉碎得A料；另称取辣椒和白芷，用乙醇在60～70℃浸取后过滤，减压浓缩得B料；称取香加皮，用乙醇在\n55～65℃浸取后过滤，减压浓缩得C料；称取乳香和没药，用乙醇回流提取，过滤，减压浓缩得D料；将A料、B料、C料和D料混合均匀，制成中药制剂。\n[0009] 为了进一步增加该中药制剂的治疗效果，还可以加入原料药人工麝香8～12份和延胡索480～520份。\n[0010] 上述加入人工麝香和延胡索后的优选配方为由原料药景天三七2000份、辣椒\n3000份、香加皮1000份、白芷1000份、乳香1000份、没药1000份、人工麝香10份和延胡索\n500份制备而成。\n[0011] 加入人工麝香和延胡索后的制备方法为：称取景天三七超微粉碎得A料；另称取辣椒、白芷和延胡索，用乙醇在60～70℃浸取后过滤，减压浓缩得B料；称取香加皮，用乙醇在55～65℃浸取后过滤，减压浓缩得C料；称取乳香和没药，用乙醇回流提取，过滤，减压浓缩得D料；将人工麝香和A料、B料、C料以及D料混合均匀，制成中药制剂。\n[0012] 为了达到最好的治疗效果，本发明的中药制剂由原料药景天三七1800～2200份、辣椒2800～3200份、香加皮800～1200份、白芷800～1200份、乳香800～1200份、没药\n800～1200份、人工麝香8～12份、延胡索480～520份、樟脑380～420份、桉油180～\n220份和薄荷脑180～220份制备而成。\n[0013] 优选的，上述中药制剂是由原料药原料药景天三七2000份、辣椒3000份、香加皮\n1000份、白芷1000份、乳香1000份、没药1000份、人工麝香10份、延胡索500份、樟脑400份、桉油200份和薄荷脑200份制备而成。\n[0014] 加入樟脑、桉油和薄荷脑后，其制备方法为：称取景天三七超微粉碎，加入樟脑、桉油和薄荷脑共融得A料；另称取辣椒、白芷和延胡索，用乙醇在60～70℃浸取后过滤，减压浓缩得B料；称取香加皮，用乙醇在55～65℃浸取后过滤，减压浓缩得C料；称取乳香和没药，用乙醇回流提取，过滤，减压浓缩得D料；将人工麝香和A料、B料、C料以及D料混合均匀，制成中药制剂。\n[0015] 在前面所提供的制备方法中：B料是用8倍量85%乙醇在65℃浸取16小时后过滤，减压浓缩至60℃相对密度为1.0，即得；C料是用8倍量75%乙醇在60℃浸取8小时后过滤，减压浓缩至60℃相对密度1.05，即得；D料是用4倍量95%乙醇回流提取2小时，过滤，减压浓缩至60℃相对密度1.15，即得。\n[0016] 一、方剂分析\n[0017] 方中景天三七性平味甘酸，具有散瘀止血、安神镇痛等功效，现代药理研究证实其含有景天庚糖、齐墩果酸、熊果酸等多种有效成分；辣椒味辛、性热，具有温中散寒、开胃消食之功，现代药理研究证实辣椒中所含辣椒素具有很强的抗炎、镇痛作用和抗肿瘤作用；二药同为君药。香加皮辛、苦，温，具有祛风湿，补肝肾，强筋骨，活血脉的功效，现代报道有治疗外伤血肿的作用；白芷辛，温，祛风除湿、通窍止痛、消肿散寒，现代药理研究证实该药外敷可以治疗风湿性关节炎和关节软组织损伤；乳香、没药行气活血、消肿定痛、治跌损、金疮、筋骨诸痛、痈疽肿痛等；四药助君药祛风除湿，消肿止痛，为臣药。人工麝香同麝香，辛、温，归心、脾经，具有开窍醒神，活血通经，消肿止痛功效；延胡索辛、苦，温，归肝、脾经，活血、利气、止痛，现代药理研究证实，延胡索含有的延胡索乙素为主要镇痛、镇静成分；二药气血双行助君臣发挥药力为佐药。樟脑、桉油、薄荷脑芳香通窍、祛风止痛，现代药理研究证实其皆具有较好的透皮促渗作用，引药入经同为使药。以上诸药君臣佐使配合得当，具有行气活血、逐瘀舒筋、消肿止痛之功，实为治疗筋脉瘀滞之骨性关节炎、肌筋跌打扭伤的良药。\n[0018] 二、制备工艺研究\n[0019] 1、工艺路线选择\n[0020] 1.1 本品处方中的景天三七，全草含有生物碱、齐墩果酸、景天庚糖、蔗糖、果糖、蛋白质，另含黄酮类和有机酸。有散淤止血、宁心安神、解毒的功效。景天三七净制干燥，再使用低温超微粉碎将其粉碎至超微粉，有利于药物的透皮吸收。景天三七全粉入药，使膏药呈现出了绿色；同时又使药物更有利于被皮肤吸收而发挥药效。\n[0021] 1.2 处方中辣椒、延胡索、白芷含有辣椒碱、二氢辣椒碱、延胡索甲素、延胡索乙素、呋喃香豆素等成分，具有解热、镇痛、消炎的功效。这些成份属于脂溶性成份，故采用高浓度醇提取。\n[0022] 1.3处方中香加皮含有刺五加甙、挥发油等成份，具体镇痛、消炎、滋补的功效。这些成份在低浓度醇中溶解性较好。\n[0023] 1.4处方中乳香、没药含有挥发油、树脂、树胶等成份，具有活血化淤，消炎镇痛的功效。这些成份在高浓度醇中溶解性较好，但由于乳香、没药中有树胶、树脂，与辣椒、延胡索、白芷混合提取时易将辣椒、延胡索、白芷包裹起来不利于有效成份的溶出，故此二味与其它药分开提。\n[0024] 1.5樟脑、薄荷脑、桉油等挥发性成分，具有消炎、镇痛、祛风湿等作用。经研磨后呈熔融态，直接加入鲜景天三七粉浸泡，有利于景天三七中有效成份的溶出。\n[0025] 1.6处方中人工麝香含有麝香酮等脂溶性成分，又含有蛋白质、多肽氨基酸等水溶性成份，具有舒筋活血、消炎、镇痛等功效，人工麝香以全粉加入。\n[0026] 2、工艺条件筛选\n[0027] 2.1辣椒、白芷、延胡索的提取工艺研究\n[0028] 2.1.1 辣椒、白芷、延胡素不同浓度乙醇、提取次数的考察\n[0029] 2.1.1.1 不同浓度乙醇提取对辣椒素提取量的影响\n[0030] (1) 材料与仪器\n[0031] 辣椒素对照品(中国药品生物制品鉴定所提供)，试剂均为分析纯；仪器由高效液相色谱仪、旋转蒸发仪、循环水多用真空泵、干燥箱、电子天平等。\n[0032] (2) 试验方法及数据\n[0033] ① 辣椒素含量的测定\n[0034] 照高效液相色谱法《中国药典》(2010版一部附录Ⅵ D)测定。\n[0035] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；稀磷酸溶液(1-600)﹕乙腈=57﹕43为流动相；检测波长为205nm，理论板数按辣椒素计算应不低于\n5000。\n[0036] 精密称取浸膏0.1g，加甲醇适量溶解，定容至25ml或精密量取浸出液1ml，定容至\n5ml，经0.45μm的滤膜过滤，滤液即为供试品。另精密称取辣椒素对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含0.03mg的溶液，作为对照品溶液。\n[0037] 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积值用外标法计算含量，即得。\n[0038] ② 乙醇浓度的选择\n[0039] 实验方法：称取1／5处方量药材，分别以6倍量的65％、75％、85％、95％乙醇于\n65℃温浸提取24小时，测定提取液中辣椒素的含量。结果见表1。\n[0040] 表1 醇提浓度的选择\n[0041] \n[0042] 由表l可见，辣椒素的含量随着乙醇浓度的增大而增大，浓度在85％和95％时提取的辣椒素含量较接近，从能耗上考虑，乙醇浓度选择85％。\n[0043] ③ 醇浸膏得率的测定\n[0044] 称取l/5处方量药材，按设定方案进行提取，滤过，滤液合并，浓缩，定容至一定体积。精密吸取20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于l05℃干燥3小时，置干燥器中冷却0.5小时，迅速称重，按下式计算浸膏得率：\n[0045] \n[0046] 2.1.1.2 提取次数对辣椒素提取量的影响\n[0047] 称取1/5处方量的药材，加6倍量85％的乙醇，于65℃温浸提取24小时，共提取二次，测定第一、二次醇浸膏得率及提取液中辣椒素的提取量。结果见表2。\n[0048] 表2 醇提次数的选择试验\n[0049] \n[0050] * 指第二次醇提取占总浸膏的比例。\n[0051] 试验结果表明，以浸膏得率为指标，第二次醇提所占比例为9.92%；以辣椒素提取量为考察指标,第二次醇提所占比例为13.46%,说明一次醇提已基本完全，故采用一次醇提工艺。\n[0052] 2.1.2 辣椒、白芷、延胡索提取温度、时间、加醇量考察\n[0053] 采用正交试验对提取温度、时间、加醇量进行探讨。\n[0054] (1) 材料与仪器\n[0055] 辣椒素对照品(中国药品生物制品鉴定所提供)，试剂均为分析纯；仪器由高效液相色谱仪、旋转蒸发仪、循环水多用真空泵、干燥箱、电子天平等。\n[0056] (2) 方法与结果\n[0057] 表3 正交试验因素水平表\n[0058] \n[0059] (3) 试验方法及数据\n[0060] ①醇浸膏得率的测定\n[0061] 用L9(34)正交表安排试验，称取1/5处方量药材，按设定方案进行提取，滤过，滤液合并，浓缩，定容至一定体积。精密吸取20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于l05℃干燥3小时，置干燥器中冷却0.5小时，迅速称重，按下式计算浸膏得率，结果见表4。\n[0062] \n[0063] ②辣椒素含量的测定\n[0064] 照高效液相色谱法《中国药典》(2000版一部附录1 I)测定。\n[0065] 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；稀磷酸溶液(1→600)：乙腈=55：45为流动相；检测波长为205nm，理论板数按辣椒素计算应不低于\n13377。\n[0066] 精密称取流浸膏0.1g，加甲醇适量溶解，定容至25m]，经0.45μm的滤膜过滤，滤液即为供试品。另精密称取辣椒素对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含0.03的溶液，作为对照品溶液。\n[0067] 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20µl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积值用外标法计算含量，即得。\n[0068] 表4 正交试验设计表及结果\n[0069] \n[0070] A.方差分析\n[0071] 将正交试验结果进行方差分析，结果见表5，表6。\n[0072] 表5 醇浸膏得率方差分析表\n[0073] \n[0074] 表6 辣椒素含量方差分析表\n[0075] \n[0076] 注：*P<0.05\n[0077] 由表4至6分析可知，A1B2C2为最佳工艺，故选择A1B2C2进行验证。\n[0078] B.验证试验\n[0079] 由于优选工艺未包括在正交设计表的九次试验中，故对其进行了验证试验。\n用同一批药材，称取1/5处方量，据此条件验证三批，测醇浸膏得率及辣椒素含量，结果见表7。\n[0080] 表7 验证试验结果\n[0081] \n[0082] 从表7验证试验可知，验证结果同正交试验结果一致。根据以上实验结果，确定辣椒、白芷、延胡索提取工艺条件为8倍量85％乙醇，65℃l6小时水浴温浸。\n[0083] 2.2 香加皮的提取工艺研究\n[0084] 香加皮为本品中的臣药，其主要成份为刺五加甙等成份，具有镇痛、消炎、滋补的功效，与功能主治关系密切。这些成份在低浓度醇中溶解性较好，故采用一定浓度的乙醇提取。在提取工艺中，以醇浸膏、4-甲氧基水杨醛为考察指标，对乙醇浓度、提取次数进行了考察，并采用正交试验对提取时间、加醇量、提取温度进行了探讨。\n[0085] 2.1.1 不同浓度乙醇提取对含量的影响\n[0086] (1) 材料与仪器\n[0087] 4-甲氧基水杨醛对照品(中国药品生物制品鉴定所提供)，试剂均为分析纯；\n仪器由高效液相色谱仪、旋转蒸发仪、循环水多用真空泵、干燥箱、电子天平等。\n[0088] (2) 试验方法及数据\n[0089] ① 醇浸膏得率的测定\n[0090] 用L9(34)正交表安排试验，称取1/5处方量药材，按设定方案进行提取，滤过，滤液合并，浓缩，定容至一定体积。精密吸取20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却0.5小时，迅速称重，按下式计算浸膏得率：\n[0091] \n[0092] ② 4-甲氧基水杨醛含量的测定\n[0093] 照高效液相色谱法《中国药典》(2000版二部附录ⅥD)测定。\n[0094] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-醋酸(70﹕30﹕2)为流动相；检测波长为278nm，理论板数按4-甲氧基水杨醛峰计算应不低于l000。\n[0095] 精密量取浸出液lml，至5ml量瓶中，加60％甲醇至刻度，摇匀，再吸取lml，至25ml量瓶中，加60％甲醇至刻度，摇匀，经0.45μm的滤膜过滤，滤液即为供试品。另精密称取4-甲氧基水杨醛对照品适量,至棕色量瓶中,加60％甲醇使溶解并定量稀释成每lml含20mg的溶液，作为对照品溶液。\n[0096] 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μ1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积值用外标法计算含量，即得。\n[0097] (3) 方法与结果\n[0098] 称取1/5处方量药材，分别以6倍量的35%、55%、75%、95%乙醇于60℃温浸提取8小时，测定提取液中4-甲氧基水杨醛的含量及醇浸膏得率。结果见表8。\n[0099] 表8乙醇浓度的提取试验\n[0100] \n[0101] *每克生药中4-甲氧基水杨醛的提取量，以下同。\n[0102] 由表8可见，醇浸膏得率随着乙醇浓度的增大而减小；而当乙醇浓度为75％时，4-甲氧基水杨醛接近最高提取率，考虑4-甲氧基水杨醛含量这一主要指标，故选择\n75％乙醇浓度提取。\n[0103] 2.2.2提取次数的选择\n[0104] 称取1/5处方量药材,以6倍量75％乙醇于60℃温浸提取8小时，共提取二次，测定第一、二次醇浸膏得率及4-甲氧基水杨醛提取量。结果见表9。\n[0105] 表9 醇提次数的选择试验\n[0106] \n[0107] *指第二次醇提取占总浸膏的比例。\n[0108] 试验结果表明，以浸膏得率为指标，第二次醇提所占比例为11.04%；以4-甲氧基水杨醛提取量为考察指标，第二次醇提所占比例为ll.41%，说明一次醇提已趋完全,为了省时节能，故采用一次醇提工艺。\n[0109] 2.2.3 提取时间、加醇量、提取温度的考察\n[0110] 以醇浸膏、4-甲氧基水杨醛为考察指标，采用正交试验对提取时间、加醇量、提取温度进行考察，结果见表10。\n[0111] 醇浸膏得率、4-甲氧基水杨醛的测定方法同2.1.1，结果见表11。\n[0112] 表10 正交试验因素水平表\n[0113] \n[0114] 表11 正交试验设计表及结果\n[0115] \n[0116] A.方差分析\n[0117] 将正交试验结果进行方差分析，结果见表12，表13。\n[0118] 表12 醇浸膏得率方差分析表\n[0119] \n[0120] 表13 4-甲氧基水杨醛方差分析表\n[0121] \n[0122] 由表12分析可知，A1B3C3为最佳工艺，由表13分析可知A1B3C1为最佳，以4-甲氧基水杨醛为主要评价指标，故选择A1B3C1进行验证。\n[0123] B．验证试验\n[0124] 由于优选工艺未包括在正交设计表的九次试验中，故对其进行了验证试验。\n用同一批药材，称取1/5处方量，据此条件验证三批，测醇浸膏得率及4-甲氧基水杨醛的量，结果见表14。\n[0125] 表14 验证试验结果\n[0126] \n[0127] 从表14验证试验可知，验证结果同正交试验结果一致。根据以上实验结果，确定\n o\n香加皮提取工艺条件为8倍量75％乙醇，60 C温浸8小时。\n[0128] 2.3 乳香、没药的提取工艺研究\n[0129] 乳香、没药为本品中的佐药，其主要成分有乳香脂酸、没药酸、树胶、挥发油等成分，具有镇痛、消炎、活血化淤等功效，与功能主治关系密切。这些成份在高浓度醇中溶解性较好，故采用95％乙醇提取。在提取工艺中，以醇浸膏为考察指标，对乙醇浓度、提取次数进行了考察，并采用正交试验对提取时间、加醇量进行了探讨。\n[0130] 2.3.1 乳香、没药不同浓度乙醇、提取次数的考察\n[0131] 2.3.1.1 乳香、没药醇提条件考察\n[0132] (1) 材料与仪器\n[0133] 试剂均为分析纯；仪器由循环水多用真空泵、干燥箱、电子天平等。\n[0134] (2) 试验方法及数据\n[0135] ① 乳香、没药各50克，放于400ml，95％乙醇中冷浸24小时，然后滤出残渣，残渣称重。\n[0136] ② 取乳香、没药各50克，加4倍量，95％乙醇回流提取2小时，然后滤出残渣，残渣称重考察。见表15。\n[0137] 表15 乳香、没药醇提条件考察\n[0138] \n[0139] 从表15中可看出，乳香、没药冷浸与回流提取所得浸出物几乎没有差别，故选用\n95%乙醇回流提取。\n[0140] 2.3.2 不同浓度乙醇提取的选择\n[0141] 称取1/5处方量药材，分别以4倍量的65%、75%、85%、95%乙醇回流提取，提取后滤过，滤液合并，浓缩，定容至一定体积。精密吸取20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于l05℃干燥3小时，置干燥器中冷却0．5小时，迅速称重，按下式计算浸膏得率，结果见表16。\n[0142] \n[0143] 表16乙醇浓度的提取试验\n[0144] \n[0145] 由上表可知，浸膏得率随着乙醇浓度的增大而增大，乙醇浓度为95％时最高，故采用95％乙醇回流提取。\n[0146] 2.3.3 提取次数的选择\n[0147] 称取l/5处方量药材，以4倍量95％乙醇回流提取，共提取二次，测定第一、二次醇浸膏得率及薄层鉴别，结果见表17。\n[0148] 表17 醇提次数的选择试验\n[0149] \n[0150] 试验结果表明，以浸膏得率为指标，第二次醇提所占比例为10.6％，薄层鉴别观察，薄层板上与对照品对应的斑点，第一次提取的斑点面积深而大，第二次提取的斑点面积淡而小，说明一次醇提已基本完全，故采用醇提一次的工艺。\n[0151] 2.3.4 乳香、没药提取时间及加醇量考察\n[0152] (1) 材料与仪器\n[0153] 试剂均为分析纯；仪器由循环水多用真空泵、干燥箱、电子天平等。\n[0154] (2) 方法与结果\n[0155] 表18 正交试验因素水平表\n[0156] \n[0157] (3) 试验方法及数据\n[0158] ①．醇浸膏得率的测定\n[0159] 用L4(23)正交表安排试验，称取l/5处方量药材，按设定方案进行提取，滤过，滤液合并，浓缩，定容至一定体积。精密吸取20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于l05℃干燥3小时，置干燥器中冷却0．5小时，迅速称重，按下式计算浸膏得率，结果见表\n19。\n[0160] \n[0161] 表19 正交试验设计表及结果\n[0162] \n[0163] ②．方差分析\n[0164] 将正交试验结果进行方差分析，结果见表20。\n[0165] 表20 醇浸膏得率方差分析表\n[0166] \n[0167] ③．验证试验\n[0168] 优选A2B1但从经济考虑，最佳工艺选A1 B1。经验证确定乳香、没药提取工艺为\n4倍量95％乙醇，回流2小时。\n[0169] 三、临床试验研究\n[0170] 将本发明的中药制剂制成巴布膏剂进行临床试验：\n[0171] 香筋骨通巴布膏临床试验一览表\n[0172] \n[0173] 1.主要研究内容总结：\n[0174] 1.1 Ⅱ期临床试验概要\n[0175] 1.1.1病例选择\n[0176] 症状分级量化表\n[0177] \n[0178] 纳入病例标准：符合膝、脊柱骨性关节炎西医疾病诊断标准及中医证候诊断标准者；就诊前一周内未用过治疗关节炎药物者；受试者年龄在38～65岁之间；疼痛程度为中度以上，疼痛强度VAS评分≥4分者；同意参加本次临床研究，并签署知情同意书者。\n[0179] 排除病例标准：不符合骨性关节炎诊断标准者。不属于药物作用范围内病例。近一周内使用过其它治疗本病药物或其它相关治疗方法者。病情危重，难以对新药的有效性和安全性作确切评价者。妊娠期、哺乳期妇女及准备妊娠者。合并重度高血压，重度心肺功能不全，重度心律失常，肝、肾、造血系统等严重原发性疾病，精神病患者；ALT、AST超过正常值1．5倍以上，Cr超过正常值者。过敏体质及对本药已知成分过敏者。近一个月内参加过其它临床试验者。\n[0180] 1.1.2试验方法：\n[0181] 分组及样本量：采用分层区组随机、双盲、阳性药平行对照法。由5家国家药品临床研究机构协同完成。\n[0182] (1) Ⅱ期临床试验的试验药与对照药，按1:1的比例安排例数。\n[0183] (2) 例数的统计学估算：从有效性角度，根据统计学要求，采用非劣性检验，单侧检验，α=0.05，β=0.2（功效=80%)，预期平均有效率为0.80（80%），其例数估计结果为88例。\n[0184] (3) 本次试验例数的确定及其依据：再根据SFDA关于II期临床试验组最低例数不少于100例的规定，考虑可脱落因素，再增加20%的病例。决定本次Ⅱ期临床试验的例数为：治疗组120例，对照组120例，共240 例。\n[0185] 对照药选用骨友灵巴布膏，由哈药集团世一堂制药厂生产。对照药物功能主治为活血化瘀，消肿止痛。用于骨质增生引起的功能障碍，软组织损伤及大骨节病所引起的肿胀疼痛。与本品的功能主治比较接近，而且在外形、气味、包装、标签等特征上能达到与试验药一致，可以达到双盲效果，符合公认可比原则。借助DAS统计分析系统产生240例受试者所接受处理（试验药和对照药）的随机安排，即列出药物流水编号001-240所对应的治疗分配，受试者可为住院病人和门诊病人，各中心按受试者的就诊顺序发给相应编号的药品。\n[0186] 临床试验用药物（包括对照药）的给药途径、方法、剂量：外用，贴于患部；一日一贴，每日贴8-12小时。\n[0187] 临床试验用药物（包括对照药）来源、生产企业及批号：\n[0188] Ⅱ期试验药物：七香筋骨通巴布膏，贵州苗仁堂生物医药科技有限责任公司与上海百岁行药业有限公司提供，系委托上海雷允上药业有限公司生产，产品批号060928。\n[0189] 对照药物：骨友灵巴布膏。哈药集团世一堂制药厂生产，批准文号：国药准字Z20026057，规格为每片7cm×10cm,产品批号 061201。\n[0190] 疗程及确定依据：疗程为14天。根据治疗骨性关节炎的临床实践，通常做法１0天一个疗程，１-２个疗程可取得疗效，结合二个回访期的要求，因此设定７天（一个星期）为一个回访期，两个回访期为１４天，故设定疗程为１４天。 疗效指标：疼痛缓解率、疼痛强度差(PID)、疼痛缓解度(PAR)、中医症候、止痛起效时间。其中疼痛缓解率为主要疗效指标。\n[0191] 疼痛缓解率（主要疗效指标）\n[0192] 疼痛缓解率=(治疗前评分一治疗后评分)／治疗前评分×100％。开始用药后第7，14天的评分对比用药前一天的评分各分析一次。观察时间窗：±2天\n[0193] 疼痛强度差(P I D)\n[0194] 0-10数字疼痛强度(PI)视觉模拟评分法(VAS评分法)。0为无痛，1-3表示轻度疼痛，4-6表示中度疼痛，7-1 0表示重度疼痛。于用药前1天和开始用药后第7，14天各记录分析一次。疼痛强度差(P I D)为开始用药后第7，14天的疼痛强度与用药前一天疼痛强度差值。\n[0195] 疼痛缓解度(PAR) \n[0196] O度：未缓解(疼痛缓解率0%-24%)：l度：轻度缓解(疼痛缓解率25%-49%)：\n2度：中度缓解(疼痛缓解率50%-74%)：3度：明显缓解(疼痛缓解率75%-99%)；4度：完全缓解(疼痛缓解率100%)。开始用药后第7，14天的评分对比用药前一天的评分各分析一次。\n[0197] 中医症候：\n[0198] 症状分级量化表\n[0199] \n[0200] 依据上表在第0天，第7天，第14天评分一次。\n[0201] 止痛起效时间：记录一次。\n[0202] 疗效评价方法及依据\n[0203] 疼痛强度差(P I D) 为开始用药后第7，14天的疼痛强度与用药前一天疼痛强度差值。\n[0204] 疼痛缓解度(PAR)：0度：未缓解(疼痛未减轻)，l度：轻度缓解(疼痛减轻约1／\n4)，2度：中度缓解(疼痛减轻约1/2)，3度：明显缓解(疼痛减轻约3/4以上)，4度：完全缓解(疼痛消失)。开始用药后第7，14天的评分对比用药前一天的评分各分析一次。\n[0205] 疼痛缓解率：疼痛缓解率=(治疗前评分-治疗后评分)／治疗前评分×100％。\n开始用药后第7，14天的评分对比用药前一天的评分各分析一次。\n[0206] 中医证侯疗效评定标准：临床痊愈：症状、体征消失或基本消失，证候积分减少≥95%。显效：症状、体征明显改善，证候积分减少≥70%，＜95%。有效：症状、体征有所好转，证候积分减少≥30%，＜70%。无效：症状、体征均无明显改善，甚至加重，证候积分减少＜30%。\n[0207] 注：计算公式（尼莫地平法）为n=（疗前证候积分值—疗后证候积分值）÷疗前证候积分×100%。\n[0208] 采用SAS 9.1.3软件分析。\n[0209] 1.1.3试验结果\n[0210] 病例分布\n[0211] 试验共入组240例，其中对照组入组120例，完成112例，脱落4例，剔除4例；试验组入组120例，完成118例，脱落1例，剔除1例。见表21、表22、表23.\n[0212] 表21 病例分布\n[0213] \n[0214] 表22 脱落病例详细列表\n[0215] \n[0216] 表23剔除病例详细列表\n[0217] \n[0218] 基线分析\n[0219] 两组入组时年龄、既往史、现病史、生命体征、病程等一般资料均具可比性（P＞\n0.05）。治疗前中医证候症状、及疼痛强度VAS评分等基线指标具有可比性（P＞0.05）。性别不具有可比性（P＜0.05）\n[0220] 依从性分析\n[0221] 除剔除、脱落病例外，两组病例依从性均良好（P＞0.05）。\n[0222] 合并用药、伴随治疗情况：见表24\n[0223] 表24 合并用药列表\n[0224] \n[0225] 疗效分析:\n[0226] （1）疼痛缓解率（%）评定结果(主要疗效指标)\n[0227] PP分析：治疗后14天，对照组疼痛缓解率为64.96±28.55%（n=101），试验组疼痛缓解率为75.05±18.10%（n=118），试验组疼痛缓解率大于对照组（P＜0.05）。\n[0228] ITT分析：治疗后14天，对照组疼痛缓解率为64.45±28.76%（n=104），试验组疼痛缓解率为75.26±18.17%（n=119），试验组疼痛缓解率大于对照组（P＜0.05）。\n[0229] （2）疼痛强度差评定结果\n[0230] PP分析：治疗后14天，对照组疼痛强度差为-4.28±2.04（n=101），试验组疼痛强度差为-4.84±1.64（n=118），试验组疼痛强度差大于对照组（P＜0.05）。\n[0231] ITT分析：治疗后14天，对照组疼痛强度差为-4.23±2.05（n=104），试验组疼痛强度差为-4.85±1.63（n=119），试验组疼痛强度差大于对照组（P＜0.05）。\n[0232] （3）疼痛缓解度评定结果\n[0233] PP分析：治疗后14天，疼痛完全缓解率、明显缓解率、总中度缓解率对照组（n=112）分别为17.9%、47.3%、83.9% ，试验组（n=118）分别为26.3% 、48.3%、98.3%，试验组总中度缓解率大于对照组（P＜0.05）。\n[0234] ITT分析：治疗后14天，疼痛完全缓解率、明显缓解率、总中度缓解率对照组（n=116）分别为17.2%、46.6%、83.6% ，试验组（n=119）分别为26.9%、48.7%、98.3%，试验组总中度缓解率大于对照组（P＜0.05）。\n[0235] （4） 中医证候疗效综合评定结果\n[0236] PP分析：治疗后14天，中医证候疗效痊愈率、显效率、有效率对照组（n=112）分别为8.0、33.0、83.9 ，试验组（n=118）分别为12.7 、44.9、94.9，试验组显效率、有效率大于对照组（P＜0.05）。\n[0237] ITT分析：治疗后14天，中医证候疗效痊愈率、显效率、有效率对照组（n=116）分别为7.8、31.9、83.6 ，试验组（n=119）分别为12.6 、45.4、95.0，试验组显效率、有效率大于对照组（P＜0.05）。\n[0238] 安全性分析评定结果\n[0239] 对照组无不良反应， 试验组不良反应1例，先后表现为瘙痒、红斑，程度轻，已缓解，本例病人的红斑瘙痒均位于试验药使用的固定胶布的边缘，疑为患者对巴布膏的固定胶布过敏所致。本试验证实，七香筋骨通巴布膏无毒副作用。\n[0240] 1.1.3Ⅱ期临床试验结论：\n[0241] 根据Ⅱ期临床试验结果分析，根据疼痛缓解率（%）、疼痛强度差、疼痛缓解度、中医证候疗效等疗效指标进行综合统计分析，证明七香筋骨通巴布膏对骨性关节炎，肿胀，关节活动受限有较好的治疗效果，并且有效性大于对照药，七香筋骨通巴布膏试验组均优于对照组（P＜0.05），本试验证明七香筋骨通巴布膏其功能有行气活血、逐瘀舒筋、消肿止痛。\n同时证明七香筋骨通巴布膏无毒副作用，安全有效，可以进行Ⅲ期临床试验。\n[0242] 1.2 Ⅲ期临床试验概要\n[0243] 1.2.1病例选择\n[0244] 症状分级量化表同Ⅱ期临床试验\n[0245] 纳入病例标准：符合膝、脊柱骨性关节炎西医疾病诊断标准及中医证候诊断标准者；就诊前一周内未用过治疗关节炎药物者；受试者年龄在38～70岁之间；疼痛程度为中度以上，疼痛强度VAS评分≥4分者：同意参加本次临床研究，并签署知情同意书者。\n[0246] 排除病例标准：不符合骨性关节炎诊断标准者。不属于药物作用范围内病例。因结核或肿瘤引起的骨性关节炎。近一周内使用过其它治疗本病药物或其它相关治疗方法者。病情危重，难以对新药的有效性和安全性作确切评价者。妊娠期、哺乳期妇女及准备妊娠者。合并重度高血压，重度心肺功能不全，重度心律失常，肝、肾、造血系统等严重原发性疾病，精神病患者；ALT超过正常值1．5倍以上，Cr超过正常值者。过敏体质及对本药已知成分过敏者。近一个月内参加过其它临床试验者。\n[0247] 1.2.2试验方法\n[0248] 分组及样本量：采用分层区组随机、双盲、阳性药平行对照法。由5家国家药品临床研究机构协同完成。\n[0249] (1)本次Ⅲ期临床试验的试验药与对照药，按3:1的比例安排例数。\n[0250] (2)以用药14天的疼痛缓解率为主要疗效指标（ITT分析），II期临床试验试验组疗效为75.26±18.17（%），对照组为64.45±28.76（%），试验组优于对照组为10（%），采用单侧检验，α=0.025，β=0.2（功效=80%)，公共标准差为25(%)，其例数估计结果为试验组\n195例，对照组为65例。\n[0251] (3)本次试验例数的确定及其依据：再根据SFDA关于Ⅲ期临床试验组最低例数不少于300例的规定，考虑可脱落因素，再增加20%的病例。决定本次Ⅲ期临床试验的例数为：\n治疗组360例，对照组120例，共480例。\n[0252] 对照药选用骨友灵巴布膏，由哈药集团世一堂制药厂生产。对照药物功能主治为活血化瘀，消肿止痛。用于骨质增生引起的功能障碍，软组织损伤及大骨节病所引起的肿胀疼痛。与本品的功能主治比较接近，而且在外形、气味、包装、标签等特征上能达到与试验药一致，可以达到双盲效果，符合公认可比原则。\n[0253] 借助DAS统计分析系统产生480例受试者所接受处理（试验药、对照药）的随机安排，即列出药物流水编号001-480所对应的治疗分配，受试者可为住院病人和门诊病人，各中心按受试者的就诊顺序发给相应编号的药品。\n[0254] 临床试验用药物（包括对照药）的给药途径、方法、剂量：外用，贴于患部；一日一贴，每日贴8-12小时。\n[0255] 临床试验用药物（包括对照药）来源、生产企业及批号\n[0256] 试验药物：七香筋骨通巴布膏。贵州苗仁堂生物医药科技有限责任公司与上海百岁行药业有限公司提供，委托西安千禾药业有限公司生产，产品批号：20080501。 [0257] 对照药物：骨友灵巴布膏。哈药集团世一堂制药厂生产，批准文号：国药准字Z20026057，规格为每片7cm×10cm,产品批号：080101。\n[0258] 疗程：14天，根据治疗骨性关节炎的临床实践，通常做法10天一个疗程，1～2个疗程可取得疗效，结合二个回访期的要求，因此设定7天（一个星期为一个回访期），两个回访期为14天，故设定疗程为14天。 合并用药规定：受试者在治疗期间不得使用其他任何镇痛药物。\n[0259] 疗效指标：同Ⅱ期临床试验。\n[0260] 中医症候：同Ⅱ期临床试验。\n[0261] 疗效评价方法及依据：同Ⅱ期临床试验。\n[0262] 中医证侯疗效评定标准：同Ⅱ期临床试验。\n[0263] 采用SAS 9.1.3软件分析。\n[0264] 1.2.3试验结果\n[0265] 病例分布\n[0266] 试验共入组480例，其中试验组入组360例， PPS 354例，FAS 359例，SS 360例；\n对照组入组120例，PPS 118例，FAS 119例，SS 120例。见表25、表26、表27.[0267] 表25 病例分布\n[0268] \n[0269] 表26未入PPS病例详细列表\n[0270] \n[0271] 注：93、15号无用药后疗效记录，按无效纳入统计\n[0272] 表27 剔除病例详细列表\n[0273] \n[0274] 基线分析\n[0275] 两组入组时年龄、性别、既往史、现病史、生命体征、病程、等一般资料均具可比性（P＞0.05）。治疗前中医症状体征总分、及疼痛强度VAS评分等基线指标具有可比性（P＞\n0.05）。\n[0276] 依从性分析\n[0277] 除剔除、脱落病例外，两组病例依从性均良好（P＞0.05）。\n[0278] 合并用药情况\n[0279] 表28 合并用药列表\n[0280] \n[0281] 疗效分析\n[0282] （1）疼痛缓解率\n[0283] PP分析：治疗后14天，试验组疼痛缓解率为77.15±18.73%（n=354），对照组疼痛缓解率为65.58±24.14%（n=118），试验组疼痛缓解率大于对照组（P＜0.05）。\n[0284] ITT分析：治疗后14天，试验组疼痛缓解率为76.83±19.36%（n=359），对照组疼痛缓解率为65.03±24.78%（n=119），试验组疼痛缓解率大于对照组（P＜0.05）。\n[0285] （2）疼痛强度差\n[0286] PP分析：治疗后14天，试验组疼痛强度差为-4.90±1.61（n=354），对照组疼痛强度差为-4.22±1.78（n=118），试验组疼痛强度差大于对照组（P＜0.05）。\n[0287] ITT分析：治疗后14天，试验组疼痛强度差为-4.89±1.64（n=359），对照组疼痛强度差为-4.18±1.81（n=119），试验组疼痛强度差大于对照组（P＜0.05）。\n[0288] （3）疼痛缓解度\n[0289] PP分析：治疗后14天，疼痛完全缓解率、明显缓解率、总中度缓解率试验组（n=354）分别为27.4%、60.7%、95.5% ，对照组（n=118）分别为17.8%、40.7%、82.2%，试验组疼痛缓解度优于对照组（P＜0.05）。\n[0290] ITT分析：治疗后14天，疼痛完全缓解率、明显缓解率、总中度缓解率试验组（n=359）分别为27.6%、60.4%、94.7% ，对照组（n=119）分别为17.6%、40.3%、81.5%，试验组疼痛缓解度优于对照组（P＜0.05）。\n[0291] （4）中医证候疗效综合分析\n[0292] PP分析：治疗后14天，中医证候疗效痊愈率、总显效率、有总效率试验组（n=354）分别为11.9%、56.2%、98.3% ，对照组（n=118）分别为11.0% 、41.5%、84.7%，试验组总显效率、有总效率大于对照组（P＜0.05）。\n[0293] ITT分析：治疗后14天，中医证候疗效痊愈率、总显效率、总有效率试验组（n=359）分别为12.0%、56.0%、97.8% ，对照组（n=119）分别为10.9%、41.2%、84.0%，试验组总显效率、有总效率大于对照组（P＜0.05）。\n[0294] （5）安全性分析\n[0295] 试验组有2例不良反应，表现为红疹、红斑、瘙痒，程度轻，已缓解；对照组无不良反应。见表29。\n[0296] 本期临床试验出现的红疹、红斑、瘙痒为预期的不良反应，程度轻，自行缓解，对实验没有产生影响，临床观察讨论认为是固定用胶布过敏所致，提示固定胶布过敏是值得注意的问题，应在说明书中加以提示注意。\n[0297] 表29 不良事件详细列表\n[0298] \n[0299] 1.2.3 Ⅲ期临床试验结论：\n[0300] 根据Ⅲ期扩大病例数进行的临床试验结果，在确定的疼痛强度差、疼痛缓解率（%）、疼痛缓解度、中医证候疗效综合分析等疗效指标方面试验组均优于对照组（P＜0.05），进一步证明七香筋骨通巴布膏对骨性关节炎，肿胀，关节活动受限有较好的治疗效果确切，而且本品完全无毒副作用。\n[0301] 2 分析与评价：\n[0302] Ⅱ期、Ⅲ期临床试验统计表明，证实七香筋骨通巴布膏止痛效果明显，优于对照药约１０%，本临床试验的疼痛缓解率等主要指标与中医症候指标明显优于对照组，Ⅱ期与Ⅲ期统计结论相吻合，说明Ⅱ期与Ⅲ期临床试验可信。\n[0303] Ⅱ期与Ⅲ期疼痛缓解率对照表\n[0304] \n[0305] Ⅱ期与Ⅲ期临床试验均证明，七香筋骨通巴布膏止痛效果明显，能够全面缓解骨性关节性的中医筋脉瘀滞症候。\n[0306] Ⅱ期与Ⅲ期中医证候疗效对照表　\n[0307] \n[0308] 本品Ⅱ期与Ⅲ期临床试验的病例入选情况，研究观察周期，研究终点的选择合理，完全达到统计学要求。\n[0309] 与现有技术相比，本发明的中药制剂由景天三七、辣椒、白芷、乳香、没药、人工麝香等组成，具有行气活血、逐瘀舒筋、消肿止痛的功效，局部应用可更有效地使药力直达病所、改善骨内微循环、有效地消除关节炎症，通过药效学、临床研究结果表明，该中药制剂确实为一种有效的治疗药物，无明显毒副作用，安全有效。\n具体实施方式\n[0310] 实施例1：\n[0311] 处方：景天三七2000g、辣椒(辣椒素>1.2mg/g)3000g、香加皮l000g、白芷l000g、乳香l000g、没药l000g、延胡索500g、人工麝香10g、樟脑400g、桉油200g、薄荷脑200g、明胶360g、 聚维酮100g、白陶土400g、甘油4850g、聚丙烯酸钠1700g、山梨醇2500g、防腐剂\n50g、色素适量，制成巴布贴膏1000片。\n[0312] 制备方法：称取景天三七超微粉碎，加入樟脑、桉油和薄荷脑共融，再加入防腐剂和色素得A料；另称取辣椒、白芷和延胡索，粉碎成粗粉，用8重量倍85%乙醇在65℃浸取\n16小时后过滤，减压浓缩至60℃相对密度为1.0得B料；称取香加皮，粉碎成粗粉，用8重量倍75%乙醇在60℃浸取8小时后过滤，减压浓缩至60℃相对密度1.05得C料；称取乳香和没药，粉碎成粗粉，用4重量倍95%乙醇回流提取2小时，过滤，减压浓缩至60℃相对密度1.15得D料；将人工麝香和A料、B料、C料以及D料混合均匀，即得药料，称取明胶、聚维酮，加适量蒸馏水浸润，待充分溶胀，置水浴上溶解后加入白陶土，另取聚丙烯酸钠加甘油、山梨醇、水加至量（处方总量）搅拌混合均匀后，加入上述已溶解的溶液、药料，搅拌均匀，制成涂料，进行涂膏，盖衬，切成小块，即得巴布膏。\n[0313] 【功能主治】行气活血、逐瘀舒筋、消肿止痛。用于筋脉瘀滞之骨性关节炎、肌筋跌打扭伤。症见：全身肢体关节疼痛，脊柱关节疼痛，骨刺疼痛，胫软膝酸，活动不利，运动牵