适体修饰纳米金铼催化-碲微粒共振散射光谱测定痕量Hg2+的方法

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1.适体修饰纳米金铼催化-碲微粒共振散射光谱测定痕量Hg 的方法，其特征是：测定方法包括步骤如下：
(1)制备金铼复合纳米微粒：常温下，量取40.0mL二次蒸馏水于50mL锥形瓶，磁力搅拌器搅拌的同时加入HAuCl4溶液、铼酸盐溶液、碳酸钾溶液，充分混合后，加热，使温度在
35℃左右，缓慢滴加硼氢化钠，溶液颜色从暗红色变为红黑色再变成红色，之后颜色不再改变，继续搅拌10min，最后定容到50mL，得到浓度为52.2μg/mL的金铼复合纳米微粒，金/铼的摩尔比为9∶1，4℃密封保存；
(2)制备AuRessDNA探针
在50mL锥形瓶中加入1.8mL 0.17μmol/L ssDNA，37.5mL 52.2μg/mL金铼复合纳米微粒，混合均匀室温下静置5min，使ssDNA与金铼复合纳米颗粒充分组装形成AuRessDNA备用，以Au计算，其浓度为49.8μg/mL AuRessDNA；
(3)制备滤液：在7支5mL的具塞刻度试管中，依次加入400μL pH 7.0的
Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液，393μL49.8μg/mL AuRessDNA，混合均匀室温下静置5min，然后
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加入不同量Hg 溶液，加入30.0μL2mol/L NaCl溶液，用二次蒸馏水定容到1.5mL，反应液
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用0.15μm滤膜过滤，取滤液备用，其中第一管不加Hg 溶液，作滤液的空白；
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(4)制备已知Hg 浓度的催化反应测定体系：在5mL的具塞刻度试管中，依次加入
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0.3mL0.012mol/L Na2TeO4溶液，0.15mL 0.3mol/L酒石酸溶液；30μL含不同浓度Hg 的滤液，0.7mL0.9mol/L SnCl2溶液，混匀，定容到3mL，置于恒温水浴锅中在65℃下加热10min，流水快速冷却至室温，用荧光分光光度计λex-λem＝Δλ＝0条件下同步扫描获得共振散射光谱，测定734nm波长处的共振散射光强度I734nm；
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(5)按步骤(4)的方法，以不含Hg 滤液的第一管为空白体系，并测定其共振散射强度(I734nm)0；
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(6)计算ΔI734nm＝(I734nm)0-I734nm；以ΔI对Hg 的浓度关系作工作曲线；
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(7)样品测定：依照步骤(4)的方法制备检测体系，其中加入的水样为含有Hg 但未知浓度的被测物，求出被测物的ΔI样；
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(8)依据步骤(6)的工作曲线，计算出被测物的Hg 的浓度。
2.如权利要求1所述的适体修饰纳米金铼催化-碲微粒共振散射光谱测定痕量
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Hg 的方法，其特征是：步骤(1)中所述的制备金铼复合纳米微粒，加入的HAuCl4溶液为-2 -3
0.45mL2.4×10 M，铼酸盐溶液为0.25mL 4.8×10 M，碳酸钾溶液为0.2mL 0.20M，硼氢化钠为5.0mL0.5mg/mL。
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3.如权利要求1所述的适体修饰纳米金铼催化-碲微粒共振散射光谱测定痕量Hg 的
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方法，其特征是：测定Hg 的浓度范围是1.33pM-0.267nM。

适体修饰纳米金铼催化-碲微粒共振散射光谱测定痕量
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Hg 的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及Hg2+的测定方法，特别是一种适体修饰纳米金铼催化-碲微粒共振散
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射光谱测定痕量Hg 的方法。
背景技术
[0002] 汞离子是一种具有很强毒性和分布广泛的金属离子，能够破坏人的大脑、神经系统、肾脏和内皮组织，从而导致很严重的后果。因此，建立一种简便、快速、灵敏度高和选择性好的测定方法就显得尤为重要。目前，测定汞离子的方法主要有冷原子吸收光度法，原子荧光光度法，以及基于生色团和荧光团的化学传感器测定方法等。以上这些方法有的是灵敏度不高，有的是步骤繁琐，不易操作。
发明内容
[0003] 本发明的目的是为克服现有技术的不足，而提供一种适体修饰纳米金铼催化-碲
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微粒共振散射光谱测定痕量hg 的方法，这种方法简单，灵敏度高，选择性好，试剂用量少。
[0004] 本发明的原理是：在pH 7.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液中和0.04mol/L NaCl存在时，核酸适配体ssDNA能与金铼复合纳米微粒结合形成较稳定的AuRessDNA复合物；当溶
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液中存在Hg 时，Hg 与ssDNA形成非常稳定的双链T-T错配复合物，从而使AuRessDNA中
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的AuRe纳米析出并聚集形成较大微粒，溶液颜色由红变蓝。Hg 浓度越高，金铼复合纳米微粒聚集越多。
[0005] 经过过滤可除去反应后聚集的大粒径AuRessDNA复合微粒，以滤液中的AuRe-ssDNA作为纳米催化剂，可催化NaTeO4-酒石酸-SnCl2这一反应，产物碲微粒在734nm
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处有一共振散射峰；随着Hg 浓度的增加，使更多的金铼复合纳米微粒聚集，过滤后滤液中AuRe-ssDNA纳米微粒减少，增强作用减弱，共振散射强度降低。据此建立了一个简便、灵敏
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检测Hg 的AuRe纳米催化Te(VI)增强共振散射光谱法。
[0006] 应用催化共振散射光谱法快速测定Hg2+的方法，包括如下步骤：
[0007] (1)制备金铼复合纳米微粒：常温下，量取40.0mL二次蒸馏水于50mL锥形-2
瓶，磁力搅拌器搅拌的同时加入0.45mL 2.4×10 M HAuCl4溶液(1％氯金酸)，0.25mL -3
4.8×10 M铼酸盐溶液；0.2mL0.20M碳酸钾溶液，充分混合后，加热，使温度在35℃左右，缓慢滴加5.0mL 0.5mg/mL的硼氢化钠，溶液颜色从暗红色变为红黑色再变成红色，之后颜色不再改变，继续搅拌10min。最后定容到50mL，得到浓度为52.2μg/mL(以Au计)的金铼复合纳米微粒，金/铼的摩尔比为9∶1，4℃密封保存；
[0008] (2)制备AuRessDNA探针
[0009] 在50mL锥形瓶中加入1.8mL 0.17μmol/L ssDNA，37.5mL 52.2μg/mL金铼复合纳米微粒，混合均匀室温下静置5min，使ssDNA与金铼复合纳米微粒充分组装形成AuRessDNA备用。以Au计算，其浓度为49.8μg/mL AuRessDNA；
[0010] (3)制备滤液：在7支5mL的具塞刻度试管中，依次加入400μL pH 7.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液，393μL49.8μg/mL AuRessDNA，混合均匀室温下静置5min，然后
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加入不同量Hg 溶液，加入30.0μL2mol/LNaCl溶液，用二次蒸馏水定容到1.5mL。反应液
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用0.15μm滤膜过滤，取滤液备用，其中第一管不加Hg 溶液，作溶液的空白；
[0011] (4)制备已知Hg2+浓度的催化反应测定体系：在5mL的具塞刻度试管中，依次加入
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0.3mL0.012mol/LNa2TeO4溶液，0.15mL 0.3mol/L酒石酸溶液；30μL含不同浓度Hg 的滤液，0.7mL0.9mol/L SnCl2溶液，混匀，定容到3mL。置于恒温水浴锅中在65℃下加热10min。
流水快速冷却至室温；用荧光分光光度计，在λex-λem＝Δλ＝0条件下同步扫描获得共振散射光谱，测定734nm波长处的共振散射光强度I734nm；
[0012] (5)按步骤(4)的方法，以不含Hg2+滤液的第一管作为空白体系，并测定其空白体系值(I734nm)0；
[0013] (6)计算ΔI734nm＝(I734nm)0-I734nm，以ΔI对Hg2+的浓度关系作工作曲线；
[0014] (7)样品测定：依照步骤(4)的方法制备检测体系，其中加入的漓江水样为含有
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Hg 但未知浓度的被测物，求出被测物的ΔI样；
[0015] (8)依据步骤(6)的工作曲线，计算出被测物的Hg2+的浓度。
[0016] 本方法Hg2+的检出范围为1.33pM-0.267nM。
[0017] 本发明的优点是：
[0018] (1)与已有的方法相比，本测定方法的仪器简单，操作简便，灵敏度高，选择性好，反应条件容易达到。
[0019] (2)所用Hg2+溶液和核酸适体溶液浓度较低，试剂用量少。
附图说明
[0020] 图1为本发明具体实施方式AuRe ssDNA催化体系的共振散射光谱图。
[0021] 图 中：a：0.0012M Na2TeO4-0.015M 酒 石 酸 -0nmol/L Hg2+-AuRessDNA 滤
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液-0.21MSnCl2b：a-0.00133nmol/L Hg c：a-0.0066nmol/L Hg d：a-0.0133nmol/L Hg
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e：a-0.066nmol/L Hg f：a-0.133nmol/LHg g：a-0.267nmol/L Hg .
具体实施方式
[0022] (1)按照前述步骤(1)所述方法制备金铼复合纳米微粒；
[0023] (2)按照前述步骤(2)所述方法制备AuRessDNA探针；
[0024] (3)按前述步骤(3)制备滤液；
[0025] (4)制备已知Hg2+浓度的催化反应测定体系：在5mL的具塞刻度试管中，依次加
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入0.3mL0.012mol/L Na2TeO4溶液，0.15mL 0.3mol/L酒石酸溶液；30μL含不同浓度Hg的滤液，0.7mL0.9mol/L SnCl2溶液，混匀，定容到3mL。置于恒温水浴锅中在65℃下加热
10min。流水快速冷却至室温。用荧光分光光度计volt＝400v，入射狭缝宽度＝出射缝宽度＝5nm，，λex-λem＝Δλ＝0条件下同步扫描获得共振散射光谱，测定734nm波长处的共振散射光强度I734nm；
[0026] (5)按步骤(4)的方法，以不含Hg2+滤液的第一管作为空白体系，并测定其空白体系值(I734nm)0；
[0027] (6)计算ΔI734nm＝(I734nm)0-I734nm，以ΔI对Hg2+的浓度关系作工作曲线，工作曲线
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为ΔI＝786.4c+4.4，c-Hg 浓度，单位是nmol/L，线性范围从1.33pmol/L到0.267nmol/L。
[0028] (7)样品测定：依照步骤(4)的方法制备检测体系，其中加入的水样为含有Hg2+但未知浓度的被测物，求出被测物的ΔI样，ΔI样＝12.3。
[0029] (8)依据步骤(6)的工作曲线，计算出被测物的Hg2+的浓度，样品的的浓度为
0.010nmol/L。