一种落羽杉根，茎，叶原生质体分离、纯化及瞬时高效转化的方法

发明专利有效专利

申请号：
CN201910948163.5
IPC分类号：C12N5/04;C12N15/82
申请日期：
2019-09-30
申请人：
江苏省中国科学院植物研究所

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著录项信息

专利名称	一种落羽杉根，茎，叶原生质体分离、纯化及瞬时高效转化的方法
申请号	CN201910948163.5	申请日期	2019-09-30
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2020-01-10	公开/公告号	CN110669718A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N5/04 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N5/00 未分化的人类、动物或植物细胞，如细胞系；组织；它们的培养或维持；其培养基（用组织培养技术再生植物入A01H 4/00）〔3，5〕 C12N5/04 植物细胞或组织〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;5;/;0;4;;;C;1;2;N;1;5;/;8;2查看分类表>
申请人	江苏省中国科学院植物研究所	申请人地址	江苏省南京市玄武区前湖后村1号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	江苏省中国科学院植物研究所	当前权利人	江苏省中国科学院植物研究所
发明人	华建峰;宣磊;杨颖;郭金博;裴笑笑;王芝权;於朝广;殷云龙
代理机构	南京申云知识产权代理事务所（普通合伙）	代理人	邱兴天

摘要

本发明公开了一种落羽杉根，茎，叶原生质体分离、纯化及瞬时高效转化方法，包括以下步骤：1)选择生长出1‑3轮叶片的落羽杉幼苗，避光培养24h；先用75％酒精清洗1遍，再用去离子水清洗3遍，然后刀片分离落羽杉幼苗的叶片，茎段以及根部；2)使用纤维素酶和果胶酶将落羽杉根，茎，叶酶解成原生质体，并对所得到的原生质体进行分离、纯化和预处理；3)以不同组织原生质体为受体，利用PEG介导转化法将含有外源基因的瞬时表达载体转入原生质体中，经培养，使外源基因在原生质体中表达。该方法操作简单易行，可以获得大量、完整、纯净的落羽杉根，茎，叶原生质体，并且转化效率均高达50％以上，为落羽杉基因瞬时表达检测，原生质体融合等提供技术依据。

序号	公开(公告)号	公开(公告)日	申请日	专利名称	申请人
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