一种内源性高表达miRNA的大肠杆菌胞外囊泡的制备方法

发明专利有效专利

申请号：
CN201911054070.4
IPC分类号：C12N15/70;C12N1/21;A61K9/50
申请日期：
2019-10-31
申请人：
郑州大学

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专利名称	一种内源性高表达miRNA的大肠杆菌胞外囊泡的制备方法
申请号	CN201911054070.4	申请日期	2019-10-31
法律状态	实质审查	申报国家	中国
公开/公告日	2020-02-18	公开/公告号	CN110804621A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/70 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/63 使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节〔5〕 C12N15/70 专门适用于大肠杆菌的载体或表达系统〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;7;0;;;C;1;2;N;1;/;2;1;;;A;6;1;K;9;/;5;0查看分类表>
申请人	郑州大学	申请人地址	河南省郑州市高新区科学大道100号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	郑州大学	当前权利人	郑州大学
发明人	翁海波;崔晨阳;郭婷婷;张帅;程家琪;杨明研;王婉佳
代理机构	郑州联科专利事务所（普通合伙）	代理人	张晓萍

摘要

本申请属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种内源性高表达miRNA的大肠杆菌胞外囊泡的制备方法。制备外囊泡时，具体包括：设计引物及PCR扩增、酶切、连接、转化、筛选和鉴定、重组载体的自连、连接目的miRNA、诱导目的miRNA表达和提取Evs等步骤。本申请以Lys‑tRNA的序列和pET‑31b(+)载体序列为基础，以特定miRNA为例，通过利用tRNA、rRNA的支架保护作用，重组构建了相关表达载体。初步实验结果表明，改造细菌较好实现了内源性、高效、大量表达功能性的miRNA的目的，同时较好实现了包含有miRNA的大肠杆菌Evs的高效收集，较好实现了以Evs作为miRNA载体的技术目标。

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