同源重组机制介导的精准序列替换基因编辑方法及其元件结构

发明专利有效专利

申请号：
CN202110325672.X
IPC分类号：C12N15/113;C12N9/22;C12N15/70;C12N15/90
申请日期：
2021-03-26
申请人：
安徽农业大学;浙江农林大学

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专利名称	同源重组机制介导的精准序列替换基因编辑方法及其元件结构
申请号	CN202110325672.X	申请日期	2021-03-26
法律状态	实质审查	申报国家	暂无
公开/公告日	2021-06-08	公开/公告号	CN112921038A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/113 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/11 DNA或RNA片段；其修饰形成（不用于重组技术的DNA或RNA入C07H 21/00）〔5〕 C12N15/113 调节基因表达的非编码核酸，如反义寡核苷酸〔2010.01〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;1;1;3;;;C;1;2;N;9;/;2;2;;;C;1;2;N;1;5;/;7;0;;;C;1;2;N;1;5;/;9;0查看分类表>
申请人	安徽农业大学;浙江农林大学	申请人地址	安徽省合肥市长江西路130号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	安徽农业大学,浙江农林大学	当前权利人	安徽农业大学,浙江农林大学
发明人	许永汉;林新春;马传喜;李金才;胡晓渝;王晓波;武德传;齐泽宇;吕蔺;蒋欣瑜;桂昊
代理机构	北京律谱知识产权代理事务所（普通合伙）	代理人	黄云铎

摘要

本发明公开了同源重组机制介导的精准序列替换基因编辑方法及元件结构，所述方法包括：(1)以靶区段300‑400bp DNA序列为基础，其中插入或缺失多个DNA片断形成MsDFID序列，同时作为向导RNA和供体模板，也被称为MsDFID向导和供体RNA；(2)在所述MsDFID供体模板3’端连接成簇且规律间隔短重复DNA回文结构，即PCRISR，或Cas9向导RNA骨架，或大肠杆菌CRISPR‑Cas3回文重复序列。后面这三种序列均作为向导RNA骨架；(3)用上述融合序列构建供体载体，转化大肠杆菌，MsDFID供体模板内供体位点所含DNA片断插入或缺失被替换到靶区段对应位点。本发明成功实现以序列替换为唯一效果的基因编辑，解决当前基因编辑系统面临的几个主要问题：对PAM序列依赖、较高脱靶风险和难以实现精准序列替换。

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