一种米根霉脂肪酶的表面展示系统及其制备方法和应用

发明专利无效专利

申请号：
CN201210333817.1
IPC分类号：C12N1/19;C12N11/16;C12N15/81;C12N9/20;C12R1/84;C12R1/845
申请日期：
2012-09-11
申请人：
南京林业大学

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专利名称	一种米根霉脂肪酶的表面展示系统及其制备方法和应用
申请号	CN201210333817.1	申请日期	2012-09-11
法律状态	权利终止	申报国家	中国
公开/公告日	2013-01-16	公开/公告号	CN102876594A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N1/19 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N1/00 微生物本身，如原生动物；及其组合物（含有由原生动物、细菌或病毒得到的材料的药物的制备入A61K35/66；从藻类材料制备药物的入A61K36/02；从真菌中材料制备药物的入A61K36/06；药用细菌的抗原或抗体组合物的制备，如细菌菌苗入A61K39/00）；繁殖、维持或保藏微生物或其组合物的方法；制备或分离含有一种微生物的组合物的方法；及其培养基〔3，2006.01〕 C12N1/14 真菌（蘑菇的培养入 A01G 18/00；作为新植物本身入A01H15/00）；其培养基〔3〕 C12N1/16 酵母；其培养基〔3〕 C12N1/19 引入外来遗传材料修饰的〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;/;1;9;;;C;1;2;N;1;1;/;1;6;;;C;1;2;N;1;5;/;8;1;;;C;1;2;N;9;/;2;0;;;C;1;2;R;1;/;8;4;;;C;1;2;R;1;/;8;4;5查看分类表>
申请人	南京林业大学	申请人地址	江苏省南京市龙蟠路159号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	南京林业大学	当前权利人	南京林业大学
发明人	王飞;王烨;李迅
代理机构	南京苏高专利商标事务所（普通合伙）	代理人	邱兴天

摘要

本发明公开了一种米根霉脂肪酶的表面展示系统及其制备方法和应用。表面展示系统将米根霉脂肪酶ProROL基因连接于锚定蛋白Pir1p基因的C端，通过表达菌株KM71H的正常分泌表达，以Pir1p的N端重复序列为锚定区域，将融合蛋白通过共价键方式固定于毕赤酵母KM71H菌株表面。本发明运用基因融合方法，将米根霉脂肪酶基因与成熟锚定蛋白Pir1p的C端融合，并将基因mpir1插入含有不同启动子pAOX1、pGAP的载体中，获得重组质粒AOX-mPir1、GAP-mPir1，在毕赤酵母KM71H上实现表面展示，并得到高效表达。与pAOX1启动子相比，pGAP启动子不需进行碳源转换，操作简便，诱导过程中不需添加甲醇，减少了甲醇对菌体生长的毒副作用，且最高酶活为614.5 U/L（180.74 [细胞干重]），高于pAOX1为启动子的酵母菌株。具有很好的实用性，能产生很好的经济效益和社会效应。

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