氨基甲酸乙酯人工抗原的合成方法

1.一种氨基甲酸乙酯人工抗原的合成方法，其特征在于包括下列步骤：
一、半抗原的制取：
(1)试剂A的配制：用4.45重量份的β-丙氨酸，溶于100重量份质量比为4％的NaHCO3水溶液中，制得试剂A备用；
(2)试剂B的配制：用4.14重量份的氯甲酸乙酯，溶于30重量份三氯甲烷纯溶液中，制得试剂B备用；
(3)半抗原的合成：将试剂A缓慢加入到试剂B中，用NaOH调整pH值使其稳定在9-11，冰浴下搅拌反应1h，然后升温至40℃，保温反应1.5h，缓慢加HCl调pH值至2-3；
(4)萃取：用乙酸乙酯萃取经步骤一(3)制得的反应液，共萃取三次，每次50重量份乙酸乙酯，合并有机相；
(5)去除溶剂：用无水Na2SO4去除有机相中的水，过滤，滤液蒸馏去除乙酸乙酯；
(6)冷冻结晶：加入10重量份乙酸乙酯进行重结晶，置于-20℃中冷冻结晶，过滤收集，得半抗原晶体3.1重量份。
二、人工抗原的制备：
(1)透析袋的预处理：透析袋先在去离子水中浸泡1min，然后在电炉上用质量比2％的碳酸氢钠和0.4％的EDTA混合液煮沸10min，然后去离子水清洗干净，再用0.4％的EDTA煮沸10min，缓慢冷却后用去离子水清洗至清晰，最后用去离子水浸泡，4℃保存待用；
(2)试剂C的配制：将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺加入到pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，配制成质量比为0.3％的试剂C；
(3)人工抗原的合成：取0.2重量份半抗原加入到5重量份试剂C中，室温反应1h，加入5重量份载体蛋白质，慢速振摇中偶联反应4h；
(4)透析：将经步骤二(3)制得的偶联反应物置于经步骤二(1)预处理的透析袋中，用pH值7.4的磷酸盐缓冲液透析三天，将内容物洁净保存，即得人工抗原。
2.如权利要求1所述的氨基甲酸乙酯人工抗原的合成方法，其特征是步骤二(3)中所述的载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白中任一种。

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