作为蛋白酪氨酸激酶抑制剂的偶联肽化合物

1.一种化合物，其特征在于，结构式如式I所示，
所述R1为GTH、GAK、GKR、GKD、GRQ、GAS、GLA、GEKL、GMAW、GSEH或GRKG。
2.根据权利要求1所述的化合物在制备抗癌药物中的应用，其特征在于，所述的抗癌药物为抗肺癌或乳腺癌药物。
3.根据权利要求1所述的化合物在制备抗癌药物中的应用，其特征在于，所述的抗癌药物的剂型为片剂、丸剂、胶囊、注射剂、悬浮剂或乳剂，所述的抗癌药物为抗肺癌或乳腺癌药物。

作为蛋白酪氨酸激酶抑制剂的偶联肽化合物\n技术领域\n[0001] 本发明属于化学领域，具体地说，本发明涉及抗癌的化合物。\n背景技术\n[0002] 蛋白激酶(PKs)是催化细胞蛋白质中特定的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基磷酸化的酶。这些底物蛋白质的翻译后修饰作为调控细胞增殖、活化和/或分化的分子开关。在许多疾病状态包括良性和恶性增殖性病症中已经观察到了异常或过度的PK活性。在很多情况下，利用PK抑制剂体外治疗疾病例如增殖性疾病已是可行的，并且在很多情况下，利用PK抑制剂体内治疗疾病例如增殖性疾病已是可行的。所述激酶主要分成两组:特异性磷酸化丝氨酸和苏氨酸的激酶以及特异性磷酸化酪氨酸的激酶。此外，一些称作“双特异性”激酶的激酶能够磷酸化酪氨酸以及丝氨酸/苏氨酸残基。\n[0003] WO2006/000420(特别是1-8页)公开了有关PKs、它们的作用模式和它们与要治疗的病症或病患的关系的详情。该文献还公开了用于治疗蛋白激酶依赖性疾病的杂芳基芳基脲类。此外，W003/023004和W002/102972公开了由FGFR3突变产生的病症。此外，W005/\n118580从属类上公开了用作HIV抑制剂的喹啉衍生物。在涉及蛋白激酶的这些文献和文中所引的参考文献中，可以合理地预期异常活性的调节(尤其是所述激酶活性的抑制)对于文献中所提到的疾病是有用的。\n[0004] 尽管认为上面参考文献中公开的分子是有活性的，但是它们仍然具有一些缺点。\n因此，对于能阻断异常的组成性受体蛋白酪氨酸激酶活性特别是FGFR活性、并由此解决与上述突变相关的临床表现且调节各种生物功能的改进的(例如高度亲和的和/或选择性的)分子而言，仍然存在未被满足的需求。考虑到大量的蛋白激酶抑制剂以及众多的增殖性疾病和其他PK相关的疾病，一直存在提供用作PK抑制剂并由此用于治疗所述蛋白酪氨酸激酶(PTK)相关疾病的新型化合物的需求。\n发明内容\n[0005] 本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种毒性小、抗癌效果好的肽链取代的化合物。\n[0006]  本发明根据一些与蛋白酪氨酸激酶相互作用的小分子化合物，其在母体骨架上引入肽(氨 基酸)链，得到与蛋白酪氨酸激酶相互作用的肽基取代化合物。\n[0007]  本发明的上述技术目的是通过以下技术方案实现上述目的：\n[0008] （式I）\n[0009] 一种肽基取代的化合物，结构式如式I所示，\n[0010] 所述的R1为三肽、四肽。\n[0011]  所述的R1的氨基酸序列为GTH、GAK、GKR、GKD、GRQ、GAS、GLA、GEKL、GMAW、GSEH、GRKG。 其中各个大写字母代表本领域熟知的氨基酸。\n[0012] 更进一步提供上述的肽基取代化合物的制备方法，包括以下步骤：\n[0013]  （1）将[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯(10g，26.63mmol)的三氟乙酸(100mL)溶液在室温下搅拌3小时。将该溶液减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(700 mL)稀释，用5％ KHCO3水溶液(400mL，2x)、水和盐水洗；干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物用乙醚(200mL)和乙腈(100mL)洗，得到化合物S1，为白色固体；\n[0014]  （S1）\n[0015] （2）将S1与氯乙酸在碱性环境中进行烃基化反应，而后再与氯化亚砜进行氯代反应，得到化合物S2或者采用本领域常用的其它的方式实现Cl的取代；\n[0016] （S2）\n[0017] （3）将S2与甘氨酸进行取代反应，得到化合物S3；\n[0018] （S3）；\n[0019] （4）将S3的化合物分别与通过Fmoc基团保护的不同的氨基酸连接到Rink Amide AM树脂进而发生缩合反应获得目的的化合物（如式I所示）。所述的缩合反应是通过多肽固相合成法进行缩合反应后，用三氟乙酸脱去树脂，最终获得所述的肽基取代化合物。\n[0020] 更进一步提供上述的肽基取代化合物在制备抗癌药物中的应用。\n[0021] 所述的抗癌药物的剂型为片剂、丸剂、胶囊、注射剂、悬浮剂或乳剂。\n[0022] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：\n[0023]  1.本发明的新型肽基取代化合物蛋白酪氨酸激酶抑制，显示对癌细胞的良好的抑制活性，从而对多种癌细胞株具有显著的抑制作用；\n[0024]  2.本发明的新型肽基取代化合物对正常细胞毒性小，在制备抗癌药物的应用中安全性高；\n[0025]  3.本发明的新型肽基取代化合物可以可制成各种剂型的抗癌药物，具有很高的医学价值和广阔的市场前景。\n具体实施方式\n[0026] 实施例1 肽基取代化合物的制备\n[0027] （1）将[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯(10g，26.63mmol)的三氟乙酸(100mL)溶液在室温下搅拌3小时。将该溶液减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(700 mL)稀释，用5％ KHCO3水溶液(400mL，2x)、水和盐水洗；干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物用乙醚(200mL)和乙腈(100mL)洗，得到化合物S1，为白色固体；\n[0028] （2）将S1与氯乙酸在碱性环境中进行烃基化反应，而后再与氯化亚砜进行氯代反应，得到化合物S2或者采用本领域常用的其它的方式实现Cl的取代；\n[0029] （3）将S2与甘氨酸进行取代反应，得到化合物S3；\n[0030] （4）将S3的化合物分别与通过Fmoc基团保护的不同的氨基酸（GTH、GAK、GKR、GKD、GRQ、GAS、GLA、GEKL、GMAW、GSEH、GRKG）连接到Rink Amide AM树脂进而发生缩合反应获得目的的化合物。所述的缩合反应是通过多肽固相合成法进行缩合反应后，用三氟乙酸脱去树脂，最终获得所述的肽基取代化合物。通过串联液质鉴定，化合物结构正确。\n[0031] 实施例2 肽基取代化合物的功能验证\n[0032] 人肺腺癌细胞株A549，以RPMI1640培养液（含10%灭活小牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL链霉素）培养，生长于37 ℃、5%CO2培养箱内。\n[0033] 消化制备细胞悬液 1×105/mL，在96孔板中，每孔加100 μL细胞悬液，培养24 h贴壁。换液，加入含不同浓度药物的培养液，每孔100 μL，每一浓度设4个平行孔，化合物终浓度为2.0 mg/L。继续培养72 h。每孔加20 μL MTT（5 mg/mL），放回培养箱，继续孵育4 h。弃上清，每孔加入150 μL DMSO，轻微振荡15 min，使结晶充分溶解，空白对照孔调零，20 min内，选择490 nm波长，在自动荧光酶标仪上测定各孔的吸光度值（A）。实验重复3次，取平均值。计算细胞增殖抑制率：抑制率%=（1－实验组A值/对照组A值）×100%。抑制结果如下：\n[0034]\n化合物种类 人肺腺癌细胞株A549抑制率% 正常人表皮细胞抑制率%\n化合物S1 30% 20.8%\n式I-GTH取代 90.2% 1.2%\n式I-GAK取代 91.3% 2.1%\n式I-GKR取代 92.5% 1.7%\n式I-GKD取代 89.7% 1.5%\n式I-GRQ取代 89.1% 1.1%\n式I-GAS取代 90.2% 1.8%\n式I-GLA取代 91.5% 2.0%\n式I-GEKL取代 88.3% 2.3%\n式I-GMAW取代 92.4% 1.4%\n式I-GSEH取代 93.5% 1.8%\n式I-GRKG取代 90.1% 1.7%\n[0035] 本专利所述的化合物在浓度为2mg/L时， 对癌细胞有明显抑制作用。能够很好的说明此类化合物的作用特点和构效关系。因此本发明的肽基取代化合物可用于制备以激酶为靶点的抗癌药物。\n[0036] 同时采用MCF-7细胞进行试验，得到基本一致的实验结果。说明化合物具有广谱的抗癌效果。