奶牛溶菌酶基因乳腺特异性表达重组质粒及其构建方法和应用

发明专利有效专利

申请号：
CN201911025733.X
IPC分类号：C12N15/85;C12N15/65;C12N15/56;A61P15/14
申请日期：
2019-10-25
申请人：
扬州大学

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专利名称	奶牛溶菌酶基因乳腺特异性表达重组质粒及其构建方法和应用
申请号	CN201911025733.X	申请日期	2019-10-25
法律状态	实质审查	申报国家	暂无
公开/公告日	2019-12-24	公开/公告号	CN110607324A
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/85 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/63 使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节〔5〕 C12N15/79 专门适用于真核细胞宿主的载体或表达系统〔5〕 C12N15/85 用于动物细胞〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;8;5;;;C;1;2;N;1;5;/;6;5;;;C;1;2;N;1;5;/;5;6;;;A;6;1;P;1;5;/;1;4查看分类表>
申请人	扬州大学	申请人地址	江苏省扬州市大学南路88号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	扬州大学	当前权利人	扬州大学
发明人	杨章平;张志鹏;杨奕;陈代杰;张慧敏
代理机构	南京纵横知识产权代理有限公司	代理人	王玉

摘要

本发明提供一种奶牛溶菌酶基因（Lyz）乳腺特异性表达质粒及其构建方法和应用。具体地，PCR扩增Lyz基因的编码序列，将其插入到携带增强的绿色荧光蛋白基因的通用表达载体pEGFP‑N1的多克隆位点中。通用表达载体pEGFP‑N1经AseI+HindIII双酶切，去除CMV启动子，克隆奶牛乳腺特异性表达β‑乳球蛋白基因（BLG）启动子序列并取代AseI和HindIII酶切位点，构建奶牛溶菌酶基因（Lyz）乳腺特异性表达质粒。采用上述重组质粒转染奶牛乳腺上皮细胞,得到的细胞系可用于分泌具有生物活性的奶牛溶菌酶，用于奶牛乳腺组织免疫机制研究；该重组质粒还可应用于基因治疗奶牛乳房炎制剂的研发。

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