一种含有褐藻多糖硫酸酯和蜂胶的组合物和其应用

1.一种调节人体免疫力的药用组合物，其特征是该组合物包含褐藻多糖硫酸酯和蜂胶或蜂胶黄酮类提取物，其中褐藻多糖硫酸酯和蜂胶或蜂胶黄酮类提取物的重量比为
1∶10-10∶1。
2.根据权利要求1的组合物，包含褐藻多糖硫酸酯和蜂胶。
3.根据权利要求1的组合物，包含褐藻多糖硫酸酯和蜂胶的黄酮提取物。
4.根据权利要求1的组合物，其特征是组合物可以是药物或保健品的形式。
5.根据权利要求1的组合物，其特征是组合物中还含有药学可接受的辅料或保健品可接受的添加剂。
6.根据权利要求1的组合物，其特征是组合物中还可含有维生素C。
7.根据权利要求1的组合物，组合物为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、口服液或糖浆。
8.以上任一权利要求中的组合物在制备治疗调节人体免疫力的药物或保健品中的用途。

一种含有褐藻多糖硫酸酯和蜂胶的组合物和其应用\n技术领域\n[0001] 本发明公开了一种药用组合物，和其在调节人体免疫力中的应用。更具体地说，本发明公开了一种褐藻多糖硫酸酯和蜂胶作为活性成分的组合物。\n背景技术\n[0002] 免疫系统是人体内最重要的生物系统之一，其功能对人体有很大影响。一旦出现免疫系统功能失调，将会导致人体对疾病抵抗能力弱化。近年来免疫失调、免疫功能低下人群比例越来越大，长期以往将导致免疫系统疾病患者急剧增多。免疫系统是人体抵御病原菌侵犯最重要的保卫系统，这个系统由免疫器官(骨髓、胸腺、脾脏、淋巴结、扁桃体、小肠集合淋巴结、阑尾等)、免疫细胞(淋巴细胞、单核吞噬细胞、中性粒细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞、肥大细胞、血小板等)，以及免疫分子(补体、免疫球蛋白、细胞因子等)组成。它是机体防卫病原体入侵最有效的武器，但其功能的亢进会对自身器官或组织产生伤害。在很多自身疾病中，免疫系统功能失常往往是一个重要致病原因。免疫系统各组分功能的正常是维持机体免疫功能相对稳定的保证，任何组分的缺陷或功能的亢进都会给机体带来损害。\n[0003] 免疫系统各组分广布全身，错综复杂，特别是免疫细胞和免疫分子在机体内不断地产生、循环和更新。免疫系统具有高度的辨别力，能精确识别自己和非己物质，以维持机体的相对稳定性；同时还能接受、传递、扩大、储存和记忆有关免疫的信息，针对免疫信息发生正和负的应答并不断调整其应答性，因此免疫系统功能的失调对人体极为不利：人体的识别能力异常容易导致过敏现象的发生(使用某种食物、注射药物出现过敏反应，甚至导致休克)，反之则会引起反复感染；人体的自我稳定能力异常，会使免疫系统对自身的细胞作出反应，引发自身免疫疾病。由此可见，人体免疫系统对人类的健康起着举足轻重的作用，如果它的功能不稳定，人体很有可能会被病毒、细菌这些病原体侵害。\n[0004] 由于免疫系统具有如此重要的作用，因此寻找一种无毒或者低毒、能够有效调节人体免疫力的药物成为一个值得关注的研究领域。\n[0005] 海藻是海洋水产资源的重要组成部分，海藻门褐子纲海带目海带科海带属的海带(Lam/nar/ajaponica aresch)是产量最高的海藻，我国的海带产量位居世界首位。海带又称海洋蔬菜，含有丰富的功能性物质，如碘、甘露醇、维生素(A、B、C、F)、牛磺酸以及人体所需要的微量元素硒、钴、铬，是一种既有食用价值，又有药用、保健、工业、农业价值的大型藻类产品，在《本草纲目》、《神农本草》、《食用本草》及《中国中草药汇编》中均有记载。海带中富含的多糖类物质，其结构迥异、性质不同，具有复杂的多方面的生物活性，在医药、化工、食品行业应用前景广阔。\n[0006] 褐藻多糖硫酸酯是一类硫酸化的多糖，存在于褐藻中，首先由Kylin于1913年用稀酸从海带中提取出来。并定义为含有相当数量的岩藻糖(fucose)和硫酸基的多糖，或含有硫代α—L一岩藻糖的多糖。现今根据国际命名原则统一称为fucoidan(褐藻糖胶或褐藻聚糖，岩藻聚糖，褐藻多糖硫酸酯)，也有人称其为fucan和fucosan。首次从褐藻掌状海带中提取出褐藻多糖硫酸酯以来，人们对不同来源的褐藻多糖硫酸酯进行了大量的研究。\n现在人们对褐藻多糖硫酸酯的组成有了较为清晰地了解，它是一类化学组成和结构非常复杂的多糖，以岩藻糖和硫酸基为主，随着藻类的不同还含有半乳糖，木糖，糖醛酸等其他成分。海带Fucoidan由岩藻糖。半乳糖，木糖，糖醛酸，阿拉伯糖等单糖组成。以岩藻糖和半乳糖为主，二者比例大约为3：1。\n[0007] 本发明的所述的褐藻多糖硫酸酯可以通过多种方式获取，已经有多篇文献和专利涉及到褐藻多糖硫酸酯的制备。包括CN1129109A则公开了由干海带浸泡、数次过滤、二次乙醇提取、一次乙醇洗涤、配合调节PH范围等的碱凝析法。CN1344565A则公开了另一种制备方法，包括原料预处理、控温搅拌浸提、离心、浓缩、乙醇沉淀、无水乙醇脱水等步骤。\nCN1517356A则将岩藻聚糖硫酸酯配制成水溶液，加入过氧化氢、次氯酸或亚硝酸及其盐，将所得混合溶液加热，用截留分子量3000-5000的膜超滤，得到岩藻聚糖硫酸酯低聚糖。\nCN1670028A、CN1392160A、CN1197674A也分别公开了采用絮凝等方法制备海藻多糖，这些制备方法均是本发明所用褐藻多糖硫酸酯可以接受的。\n[0008] 海带硫酸多糖对小鼠腹腔巨噬细胞激活及细胞毒作用的影响(聊城大学学报，\n2004.17(2)56-57)研究认为海带硫酸多糖能激活小鼠腹腔巨噬细胞，增强其免疫机能，对抵抗和杀死肿瘤细胞具有积极作用。\n[0009] 海带硫酸多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用(中国免疫学，2000.2(16))研究了一种包含L-岩藻糖、D-半乳糖等平均分子量为15000D的海带多糖对小鼠吞噬细胞的激活作用。以肿瘤抑制率衡量，抑制肿瘤细胞病变有效率达到了86.5％。说明海带多糖可以有效激活巨噬细胞，分泌细胞毒效应分子，提高巨噬细胞过氧化物酶活性以及吞噬功能。\n[0010] 黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环(A-与B-环)通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物黄酮类化合物。结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。此外，它还常与糖结合成苷。多数科学家认为黄酮的基本骨架是由三个丙二酰辅酶A和一个桂皮酰辅酶A生物合成而产生的。经同位素标记实验证明了A环来自于三个丙二酰辅酶A，而B环则来自于桂皮酰辅酶A.\n[0011] 黄酮广泛存在自然界的某些植物和浆果中，总数大约有4千多种，其分子结构不尽相同，如芸香苷、橘皮苷、栎素、绿茶多酚、花色糖苷、花色苷酸等都属黄酮。不同分子结构的黄酮可作用于身体不同的器官，如山楂--心血管系统，兰梅--眼睛，酸果--尿路系统，葡萄--淋巴、肝脏，接骨木果--免疫系统。\n[0012] 蜂胶(plopolis)被誉为“紫色黄金”，是蜜蜂用从植物的嫩芽及树干上采集的树脂并混入自身上颚腺分泌物和蜂蜡混合而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。蜂胶具有较强的抑菌作用，能治疗多种疾病，并具有天然的抗氧化性能和增强机体的免疫功能。蜂胶的生物学、药理学及医疗功效主要与蜂胶中所含的黄酮成分有关。蜂胶有“黄酮化合物宝库”之美誉，含有40余种黄酮化合物，现已从蜂胶中分离鉴定出的黄酮类化合物有白杨素、芹菜素、金合欢素、槲皮素、高良姜素、芦丁、山萘甲黄素、鼠李素、松属素、5，7一二羟基一\n3，4一二甲基黄酮、5一羟基-4和7一二甲氧基双氢黄酮等。但蜂胶来源不同，蜂胶黄酮成分及其含量不同，黄酮成分与产地及采集季节不同而有明显差异。本发明指的黄酮涵盖蜂胶中所有黄酮类化合物。\n[0013] 蜂胶中黄酮类化合物的研究及应用(医药产业资讯，2006.4.3(11)130-131)论述了黄酮类化合物的医药用途，其中包括了蜂胶黄酮在提高人体免疫力中的应用。\n[0014] 蜂胶黄酮增强免疫作用的研究(扬州大学学报农业与生命科学版，\n2006.3(27)21-23)PF(蜂胶黄酮)能促进免疫雏鸡抗体生成和外周血淋巴细胞增殖，促进体外培养的鸡脾脏T淋巴细胞增殖，且有一定的量效和时效关系。\n发明内容\n[0015] 本发明的目的在于提供一种褐藻多糖硫酸酯组合物及其在调节人体免疫力领域的应用。发明人研究发现通过将褐藻多糖硫酸酯、蜂胶或蜂胶或同类提取物组合，对调节人体免疫力具有协同的、突出的效果，其长期使用安全性和效果均优于现有产品。\n[0016] 本发明的创造性在于采用褐藻多糖硫酸酯，结合蜂胶或其黄酮类提取物作为组合物，并将其用于调节人体免疫力。本发明组合物，不仅保留了褐藻多糖硫酸酯本身的调节免疫功能，同时加入蜂胶辅助调节功效。考虑到蜂胶还具有抗氧化、清除自由基和延缓衰老的功效，本发明组合物具有广泛的适用性。应用于受众人群时，能全方位提高得他们的身体素质。应用本发明可同时调节体液免疫、吞噬细胞、淋巴系统免疫能力，与市场上现有的单一调节体液免疫的药品/保健品相比，本发明组合物的作用是全方位的。单纯的褐藻多糖硫酸酯药品/保健品和蜂胶多集中于调节身体的某个特定方面的机能，导致一方面使用者在选择产品的时候出现困惑，另一方面更重要的是来源于多个不同厂家的药品/保健品在安全性、毒性等方面无法获得统一的保证，给消费者的用药/食用安全构成一定威胁。试验证明，本发明的组合物可以有效提高人体免疫力和抗疲劳能力，同时进一步的实验证明本发明不仅是安全无害的，其功效相对于单独的褐藻多糖硫酸酯、蜂胶均有长足的提高。\n[0017] 本发明所用的蜂胶不仅可以是天然收获的蜂胶，也可以是对其进行提取获得的黄酮类提取物，根据本领域常识和业已上市的保健品成分公开分析，本领域技术人员容易知道人参、西洋参、海参等参类植物提取物、黄芪提取物也可以获得结构与功效与蜂胶黄酮相似的黄酮类物质，因此本发明技术方案实质上还包含了这些植物的黄酮成分。同时，蜂胶中可以直接提取黄酮，也可采取一些简单的提取方法获得蜂胶提取物，使得其中包含有黄酮类物质、芳香酸和酯等成分，很显然，这是涵盖在本发明范围之内的。本发明的技术方案涵盖了褐藻多糖硫酸酯和蜂胶提取物的组合物。\n[0018] 本发明技术方案提供了一种褐藻多糖硫酸酯和蜂胶或其黄酮类提取物的组合物，包含活性成分褐藻多糖硫酸酯和具有明显协同作用活性的蜂胶或其黄酮类提取物，褐藻多糖硫酸酯和蜂胶或蜂胶黄酮类提取物重量份数比可以是1：100-100：1，优选为1：30-30：\n1，最优选为1：10-10：1。\n[0019] 本发明发明人同时研究了将褐藻多糖硫酸酯、蜂胶或其黄酮类提取物组合物加入维生素C所带来的效果改善，申请人的实验显示维生素C可以在本发明组合的基础上进一步对本发明效果有所提高，因此本发明还包括着这样一个技术方案：在本发明组合物的基础上，加入适量维生素C来改善本发明的实施效果。\n[0020] 本发明所用的褐藻多糖硫酸酯取材于海藻类生物，包括任何可以提供褐藻多糖硫酸酯的植物，包括马尾藻、裙带菜、羊栖菜、鼠尾藻、海黍子、昆布、泡叶藻或墨角藻等，优选的植物为海带、马尾藻，无论是人工养殖的还是天然生长的。从这些植物中获得的褐藻多糖硫酸酯方法可以引用背景技术中所述的技术方法，所获得的分子量在十万数量级水平上。从海带、马尾藻、海黍子中获得的褐藻多糖硫酸酯平均分子量分别为350KD、550KD、\n980KD。本发明应用时，可以使用这些分子量比较高的褐藻多糖硫酸酯，优先选用分子量在5000D-200KD之间的低分子量的褐藻多糖硫酸酯，所用低分子量褐藻多糖硫酸酯可以从海藻中提取也可以从高分子量褐藻多糖硫酸酯解聚而来。需要指出的是，随着技术的持续进步，可供本发明应用的褐藻多糖硫酸酯分子量变化是落在本发明范围内的。所用的褐藻多糖硫酸酯的纯度不小于50％，优选为不小于70％，更优选为不小于90％，最佳是不小于\n95％。\n[0021] 根据所用藻类种类不同，所获得的褐藻多糖硫酸酯主要的基团岩藻糖、硫酸基含量存在一定的差异，但这种差异不影响本发明应用于防治化学性肝损伤，所带来的只是保健效果的强化或者弱化，这是属于本发明范围之内的。本发明所指的褐藻多糖硫酸酯涵盖化学上所普遍接受的褐藻多糖硫酸酯定义的一类化学物质。\n[0022] 本发明所用的黄酮可以是蜂胶中提纯出的黄酮也可以是含有黄酮成分的蜂胶初步提取物，还可以使蜂胶药材、蜂胶原料等。已经有多种方案公开了提取黄酮的方法。中国专利申请CN2003101100850，CN031317529，CN031506488等均公开了若干从蜂胶中提取黄酮化合物组分的方法。蜂胶黄酮提取方法研究(食品科学，2003.5(24)100-10)综述了现有的若干种从蜂胶中获得黄酮的技术工艺。\n[0023] 在本发明中，一个优选的工艺是将蜂胶原料或者蜂胶药材粉碎成粗粉，按照每g粗粉对应5-10倍质量的50％-95％的乙醇进行浸提，溶液温度控制在50-80℃，浸提2-5次，每次1-3小时。合并滤液，然后减压回收溶剂，干燥即可得本发明所述的蜂胶黄酮。\n[0024] 本发明针对的保健品泛指可以提高和保护人体健康状态的产品，包括食物和饮料。所指的食物包括但不限于小麦制品、淀粉制品、肉类制品、植物提取物、奶乳、保健糖等；\n所指的饮料包括所有人体可饮用的液体制品包括普通的饮用饮料和用于提高特定机能的功能饮料，比如运动饮料。\n[0025] 本发明的组合物可以与其它营养物质或辅料结合使用。这些营养物质包括淀粉、糊精、葡萄糖、乳糖、甘露糖、蔗糖、微晶纤维素、糖浆、多种氨基酸、钙铁锌等。\n[0026] 本发明组合物制剂时还可与辅料搭配，可接受的辅料包括赋形剂、抗氧剂、PH调节剂、防腐剂、等渗剂等任何药学/营养学上安全性有保证的辅料。\n[0027] 本发明组合物可以制备为多种类型，包括胶囊、片剂、粉剂、溶液剂、颗粒、口含品等，改变保健品的形状属于本发明的覆盖范围。\n[0028] 申请人对本发明组合物功能进行了分析，发现根据实际情况调节本发明使用量对调节人体免疫力有积极作用。\n具体实施方式\n[0029] 如下实施例旨在说明本发明具体实施方案，并不限定本发明保护范围。在下列实施例中，所用的蜂胶黄酮是这样制备的：将蜂胶药材粉碎成粗粉，按照每g粗粉对应7倍质量的80％的乙醇进行浸提，溶液温度控制在65℃，浸提3次，每次2小时。合并滤液，然后减压回收溶剂，干燥即可得本发明蜂胶黄酮。\n[0030] 制备实施例1\n[0031] 褐藻多糖硫酸酯 2mg\n[0032] 蜂胶黄酮 20mg\n[0033] 淀粉 20mg\n[0034] 甘露醇 20mg\n[0035] 葡萄糖 15mg\n[0036] 微晶纤维素 10mg\n[0037] 硅胶 1mg\n[0038] 将上述成分搅拌混匀成组合物，测定重量后制成胶囊。\n[0039] 制备实施例2\n[0040] 褐藻多糖硫酸酯 60mg\n[0041] 蜂胶黄酮 10mg\n[0042] 淀粉 20mg\n[0043] 葡萄糖 15mg\n[0044] 微晶纤维素 15mg\n[0045] 硅胶 2mg\n[0046] 将上述成分搅拌混匀成组合物，制成口含片。\n[0047] 制备实施例3\n[0048] 褐藻多糖硫酸酯 25mg\n[0049] 蜂胶黄酮 2.5mg\n[0050] 血红素铁 7mg\n[0051] 维生素C 6ug\n[0052] 叶酸 100ug\n[0053] 将上述成分混匀研磨成粉末溶解于水至500ml，进行密封、灭菌和分装，制备为符合特定规格的口服液。\n[0054] 在大规模生产中本发明制备口服液可以在用量上进行放大，充分溶解后进行罐装然后密封、灭菌和分装为符合规格的口服液，比如500ml，1L等。\n[0055] 实验实施例1\n[0056] 实验项目：急性毒性试验\n[0057] 实验材料：小白鼠，健康状况良好。本发明组合物，其中褐藻多糖硫酸酯：蜂胶黄酮质量比3：1\n[0058] 实验方法：\n[0059] 急毒性试验：选择小白鼠40只，雌雄各20只，体重为18-22g。按照雌雄小鼠各随机分成四个剂量组16.00，7.27，3.31，1.50g/KG(bw)，小鼠灌胃后连续观察15d，记录毒性表现和死亡情况。\n[0060] 试验结果\n[0061] 表1小鼠急毒性试验结果：\n[0062] \n[0063] \n[0064] 假定生产的保健品以成人60kg体重日摄入量0.05g/kg.bw，对照我们采用的最高对照组，相当于成人摄入量的320倍。试验观察十四天未见中毒症状，死亡数为零。受试物对两种性别的小鼠急毒性LD50均大于15.00g/kg.bw.根据现行的毒性分级，属于无毒级别。\n[0065] 实验实施例2\n[0066] 实验材料：选用雌性小鼠，随机分为四组，体重18-22g。本发明组合物，其中褐藻多糖硫酸酯：蜂胶黄酮3：1，溶解于去离子水制成混悬液。注射用环磷酰胺(cyclophospha—mide，Cy)，用于免疫力低下模型构建。绵羊红细胞(sheep e—rythrocyte，SRBC)。\n[0067] 实验方法：按照人体正常使用量成人60kg体重日摄入量0.05g/kg.Bw，设计分成高中低三个剂量组0.25，0.10，0.05g/kg.Bw(剂量分别相当于正常人使用量的5，2，1倍)，每组十只。另外设置褐藻多糖硫酸酯对照组、蜂胶黄酮对照组、模型组、阴性对照组，分别给予0.10g/kg.Bw的褐藻多糖硫酸酯、蜂胶黄酮、蒸馏水、蒸馏水，分别记为A对照组、B对照组、模型组、对照组。采用灌胃给药，每日一次。20天后测定各项免疫指标。其中在第十五天时除阴性对照组外每只小鼠腹腔注射Cy50mg/kg(对照组给予等容量生理盐水)连续2d，制备免疫功能低下的动物模型.第二十天每鼠尾静脉注入离心后50％的印度墨汁(0.1ml/10g)，2min和10min后分别从眼球取血401，并将其加到4ml0.1％NaHCO3溶液中，\n600nm波长测定吸光度值，按文献方法测定吞噬指数。记录小鼠体重，活杀取胸腺并称湿重，以小鼠胸腺重/体重(mg/g)作为胸腺指数。半数溶血值、淋巴细胞转化率的测定方法采用常规的文献方法。\n[0068] DTH测试方法如下：制备DTH模型，第十五天每鼠腹部涂1％DNFB丙酮麻油溶液\n50ml致敏，次日同剂量强化1次，同时除对照组外制备免疫低下模型，该模型构建方法参考上述用于测试胸腺指数、吞噬指数的模型构建方法。致敏后三天，将1％DNFB溶液均匀涂抹于小鼠右耳进行攻击。攻击24h，引颈处死小鼠，剪下左右耳壳，用直径9mm打孔器打下圆耳片称重，左右耳片之差为肿胀度。\n[0069] 抗疲劳能力测试无关于免疫力，因此没有模型组，也无需采用免疫力低下模型构建，只需对照组即可。\n[0070] 结果1表2对小鼠迟发型变态反应DTH的影响\n[0071] \n[0072] 结果2：表3对正常小鼠免疫器官胸腺指数的影响\n[0073] \n[0074] 结果3：表4对小鼠巨噬细胞功能的影响\n[0075] \n[0076] \n[0077] 结果4：表5对小鼠淋巴细胞转化率的影响\n[0078] \n[0079] 结果5：表6对小鼠体液免疫能力的影响\n[0080] \n[0081] 结果6：表7对小鼠抗疲劳能力的影响\n[0082] \n[0083] \n[0084] 上述试验结果显示，本发明组合物有效提高了人体免疫能力。对比对照实验组的的数据，本发明提高免疫力的效果优于单独使用单一成分。应用本发明组合物具有调节免