DNA分子片段与载体连接的方法及在大容量抗体库构建中的应用

发明专利有效专利

申请号：
CN200910091261.8
IPC分类号：C12N15/66;C40B40/08
申请日期：
2009-08-14
申请人：
中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所

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专利名称	DNA分子片段与载体连接的方法及在大容量抗体库构建中的应用
申请号	CN200910091261.8	申请日期	2009-08-14
法律状态	授权	申报国家	中国
公开/公告日	2010-01-06	公开/公告号	CN101619323
优先权	暂无	优先权号	暂无
主分类号	C12N15/66 ? IPC结构图谱： C 化学；冶金 C0 化学 C12 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 C12N 微生物或酶；其组合物（杀生剂、害虫驱避剂或引诱剂，或含有微生物、病毒、微生物真菌、酶、发酵物的植物生长调节剂，或从微生物或动物材料产生或提取制得的物质入A01N63/00；药品入A61K；肥料入C05F）；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基（微生物学的试验介质入C12Q1/00）〔3〕 C12N15/00 突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体（如质粒）或其分离、制备或纯化；所使用的宿主（突变体或遗传工程制备的微生物本身入C12N1/00、C12N5/00、C12N7/00；新的植物入A01H；用组织培养技术再生植物入A01H4/00；新的动物入A01K67/00；含有插入活体细胞的遗传物质以治疗遗传疾病的药剂的应用，基因疗法入A61K48/00，一般肽入C07K）〔3，5，6，2006.01〕 C12N15/09 DNA重组技术〔5〕 C12N15/63 使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节〔5〕 C12N15/66 经裂解和连接将基因插入载体中以形成重组载体的一般方法；非功能性衔接子或连接物（如含限制性核酸内切酶顺序的衔接子）的使用〔5〕	IPC分类号	C;1;2;N;1;5;/;6;6;;;C;4;0;B;4;0;/;0;8查看分类表>
申请人	中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所	申请人地址	北京市丰台区东大街20号变更专利地址、主体等相关变化，请及时变更，防止失效
权利人	中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所	当前权利人	中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所
发明人	孙志伟;王双;俞炜源;杜威世;余云舟
代理机构	北京路浩知识产权代理有限公司	代理人	王朋飞

摘要

本发明公开了一种DNA分子片段与载体连接的方法，载体上包括至少三个不同的酶切位点E1、E2和E3，其中E2位于E1和E3之间；待连接的DNA分子片段至少包括酶切位点E1和E3，先对载体上酶切位点E1和E2进行酶切和去磷酸化；再对DNA分子片段的酶切位点E1进行第一步酶切和连接，得到DNA分子片段和载体的线性连接产物，然后回收正确大小的连接产物；最后对连接产物的酶切位点E3进行第二步酶切和连接，得到自连接的环状连接产物。本发明能够实现DNA分子片段与载体之间有效的连接，降低了非正确连接的不同形式聚合体的产生，使正确连接产物的比例在连接体系中占到30％以上，有利于实现高效的电击转化。

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